微生物检验技能-细菌的生化试验

原理：有触酶的细菌能催化过氧化氢生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。触酶试验方法：用接种环取备检菌少许，置于洁净的玻片上，滴加3%的过氧化氢1～2滴，观察结果。试管法：用洁净的玻棒蘸取待检菌少许，置于装有3%过氧化氢的试管内，观察结果。应用：用于革兰阳性球菌初步分属。触酶试验方法触酶试验结果原理：胆盐、取氧胆酸钠和硫磺胆酸钠能选择性地溶解肺炎链球菌，其它链球菌则能耐受这些试剂。胆汁溶菌试验方法：平板法：取胆酸钠溶液一环，放在平板的菌落上，35℃30min观察结果。试管法：于0.9ml培养了18～24小时的菌液中，加入取氧胆酸钠试剂0.1ml或牛胆盐0.2ml混匀，37℃水浴10～30min，观察结果。应用：主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌。胆汁溶菌试验方法胆汁溶菌试验结果细菌的生物化学试验知道细菌鉴定常用的生化试验原理学会细菌鉴定常用的生化试验方法能正确判断常用生化试验结果糖（醇、苷）类发酵试验葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验）β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）七叶苷水解试验甲基红试验V-P试验碳水化合物代谢试验靛基质试验硫化氢试验苯丙氨酸脱氨酶试验尿素酶试验蛋白质类代谢试验枸橼酸盐利用试验硝酸盐还原试验有机盐类试验细胞色素氧化酶试验过氧化氢酶试验凝固酶试验酶类试验胆汁溶菌试验CAMP试验氢氧化钾拉丝试验其他生化试验原理：含有色氨酸酶的细菌，能分解色氨酸产生吲哚，吲哚能与对二甲氨基苯甲醛作用，形成红色玫瑰吲哚。吲哚（靛基质）试验方法：将待检菌接种于胰蛋白胨水中，35℃培养24～48h，取出后沿试管壁缓慢加入靛基质试剂数滴，在两液面观察结果。应用：主要用于肠杆菌科中产气肠杆菌与大肠埃希菌的鉴别，常与MR试验联用。吲哚（靛基质）试验方法吲哚（靛基质）试验结果枸橼酸盐利用试验原理：能利用枸橼酸盐的细菌，也能利用铵盐作为唯一的碳源，分解后生成碳酸钠和氨，使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由浅绿色变为深蓝色。方法：将待检菌接种于含有枸橼酸盐和铵盐的西蒙和柯氏培养基培养18～24h后，观察结果。应用：主要用于肠杆菌科属间的鉴别。枸橼酸盐利用试验方法蓝色为阳性绿色为阴性+-枸橼酸盐利用试验结果硫化氢试验原理：有些细菌能分解含硫氨基酸，产生H2S与培养基中的铅盐或铁盐发生反应，生成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀。

方法：将细菌穿刺接种到醋酸铅培养基中，35℃、24～48h，观察结果。应用：肠杆菌科的属间鉴定。硫化氢试验方法硫化氢试验结果原理：多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物(或产酸产气)－→pH↓

－→指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现)。糖（醇、苷）类发酵试验方法

将纯种细菌以无菌操作接种到含有指示剂的培养基中，置35℃温箱培养数小时至两周，观察结果。应用：主要用于肠杆菌科的鉴定。糖（醇、苷）类发酵试验方法糖（醇、苷）类发酵试验结果氧化酶试验原理：某些细菌具有细胞色素氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺试剂氧化成紫红色醌类化合物方法：

滤纸法：用洁净滤纸蘸取菌落，加一滴试剂，观察结果菌落法：直接在菌落上加试剂，观察结果纸片法：使用试剂浸泡制成的试剂纸片，取足够的菌落，观察结果。应用：用于科别鉴定试验。氧化酶试验方法滤纸法：阳性结果纸片法：阳性、阴性结果氧化酶试验结果原理：产生尿素酶的细菌,能分解尿素产生氨和CO2,氨在溶液中形成碳酸铵，使培养基变碱，酚红指示剂变红。尿素分解试验方法：将待检菌接种于尿素培养基中，35℃培养18～24h取出观察。应用：肠杆菌科属间鉴别。尿素分解试验对照阳性阴性尿素分解试验结果原理：细菌分解葡萄糖对O2需求不同，氧化型细菌只在有氧环境中分解葡萄糖，发酵型细菌可在有氧、无氧环境中分解葡萄糖，产碱型细菌在有氧、无氧环境中都不分解葡萄糖。葡萄糖氧化/发酵试验方法：取2支HL葡萄糖培养管煮沸驱氧，待冷后接种菌种。一管管口敞开，一管用液体石蜡封管，培养18~24h观察结果。应用：主要用于革兰阴性杆菌的鉴别。葡萄糖氧化/发酵试验方法

发酵型两管均分解葡萄糖葡萄糖氧化/发酵试验结果葡萄糖氧化/发酵试验结果

氧化型开管分解葡萄糖液体石蜡封闭管不分解葡萄糖。产碱型开管、封管均不分解葡萄糖葡萄糖氧化/发酵试验结果血浆凝固酶试验原理：有些细菌能产生血浆凝固酶，可以使人和动物血浆中的纤维蛋白原转化成纤维蛋白，从而使血浆凝固。方法：玻片法：取洁净玻片一张，加生理盐水两小滴于玻片两端，用接种环挑取待检菌落和对照菌均匀涂于盐水中，制成浓菌液，加兔或人血浆一滴于菌液中，观察结果。试管法：于3支试管中分别加入1:4稀释的血浆0.5ml，1支管加入待检菌肉汤培养物0.5ml,另两支分别加阴阳性对照菌肉汤培养物0.5ml，35℃培养3～4h后观察结果。应用：主要用于金葡菌的鉴定。血浆凝固酶试验方法血浆凝固酶试验结果血浆凝固酶试验结果CAMP试验原理：B群链球菌能产生一种胞外因子——CAMP,它能增强金黄色葡萄球菌β-溶血毒素的活性，因此，在两菌交界处出现箭头样的溶血增强区。方法：取血平板一块，用产生β-溶血毒素的金葡菌在中央划一道线，将待检菌据此线0.5cm处垂直划线。35℃18~24小时培养，观察结果。应用：用于鉴定B群链球菌。CAMP试验方法CAMP试验结果苯丙氨酸脱氨酶试验原理：有苯丙氨酸脱氨酶的细菌，可以使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙铜酸与三氯化铁作用形成绿色化合物。方法：琼脂斜面法：将待检细菌接种到苯丙氨酸琼脂斜面上，35℃培养24～48h，取出，将三氯化铁试剂4～5滴滴于斜面上，观察结果。快速纸片法：将待检菌涂于苯丙氨酸纸片上，孵育15min，取出，滴加三氯化铁试剂，立即观察结果。应用：多用于肠杆菌科的鉴定。苯丙氨酸脱氨酶试验方法

绿色阳性黄色阴性+-苯丙氨酸脱氨酶试验结果说出糖发酵试验的原理及应用。说出VP试验原理及应用。说出硝酸盐试验原理及应用。说出触酶试验原理及应用。说出氧化酶试验原理及应用。归纳细菌生化试验的类型。原理：七叶苷可以被细菌分解为葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中的Fe2+反应，形成黑色化合物，使培养基变黑。七叶苷水解试验方法：将待检菌接种于七叶苷培养基上，培养后观察结果。

应用：主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别。

七叶苷水解试验方法七叶苷水解试验甲基红试验原理：细菌分解培养基中的葡萄糖→丙酮酸→大量混合酸→培养基pH↓4.4以下→甲基红试剂→培养基变红。方法：

将待检菌种接种于葡萄糖蛋白胨水中,35℃培养6～18小时后,往培养基中加入甲基红指示剂少许,观察结果。应用：主要用于大肠和产气肠杆菌鉴定。甲基红试验方法空白对照阴性阳性甲基红试验结果原理：使硝酸盐还原的细菌能从硝酸盐中获得氧，使其成为亚硝酸盐或其它还原物。培养基中的亚硝酸基能与α-萘氨和苯磺酸形成红色的N-α-萘氨偶氮苯磺酸。若出现红色现象则说明该菌还原硝酸盐。

硝酸盐还原试验方法：取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜面上，35℃培养18~24小时，然后依次加入含α-萘氨和对氨基苯磺酸的试剂各1mL，30s后观察结果。应用：有助于鉴别肠杆菌科、嗜血杆菌属、奈瑟菌属、布兰汉菌属、假单胞菌属等。硝酸盐还原试验方法红色为阳性无色为阴性+-硝酸盐还原试验结果无色+锌粉→无色：阳性无色+锌粉→红色：阴性+-硝酸盐还原试验结果原理：某些细菌分解糖类→丙酮酸→继续脱羧→乙酰甲基甲醇（碱性）→空气氧化→双乙酰+α-萘酚、肌酸→红色化合物。V-P试验方法：将待检菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，35℃培养48h后按每毫升培养基加入0.1ml含2％肌酸或肌酐的40％KOH溶液,数分钟或数小时后观察结果。应用：主要用于鉴别大肠和产气肠杆菌。V-P试验方法空白对照阴性阳性V-P试验结果原理：有β-半乳糖苷酶的细菌，可以分解邻硝基酚β-半乳糖苷(ONPG),而释放黄色的邻硝基酚。