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T/HBIQAT/HBIQA0003.7—2024食品中常见高组胺鱼源性成分检测方法DetectionofcommonHistamine-richfishderivedingredientinfoodPart7:ScomberomorusniphoniusReal-timePCRmethod2024-08-15发布2024-10-15实施河北省检验检疫学会发布T/HBIQA0003-2024《食品中常见高组2本部分适用于食品中蓝点马鲛源性成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD）为2规范性引用文件GB/T6682分析实验室用水规格和试GB/T27403实验室质量控制规范食品分3.1蓝点马鲛Scomberomorusniph），3.2实时荧光PCRreal-3.3Ct值cyclethreshol4.1PCR：聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction）4.2DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleicacid）4.3Cytb：线粒体细胞色素b基因（Cytochromeb4.4dNTP：脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphat4.5CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammoniumbromide）4.6Tris：三（羟甲基）氨基甲烷（tris（hydroxymethyl）aminomethan4.7EDTA：乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic4.8FAM：羧基荧光素（carboxyfluorescei3鲛P:FAM-CAATCTCCCAGTTCTT-MGB-NFQ），），6.9荧光PCR预混液（2×)。8检验步骤鱼罐头、鱼肠、鱼丸等食品取肉糜300mg，置于三氯甲烷:甲醇:水混4上清液至另一新离心管中，加入0.8倍体积异丙醇，混匀后室温下静置1h。12000r/min离心10备用。也可用等效的商业化DNA提取试剂盒提取样品DNA。取适量DNA溶液原液，使用核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计分别测定260nm和28c=A260×N×50··························（1）c——DNA浓度，单位为微克每微升(μg/μLN——核酸稀释倍数。实时荧光PCR反应参数见表2。每个样品各做两个平行管，可先将反应试剂及引物预混成混合液。表2实时荧光PCR反应体系终浓度反应体系/μLF(10μmol/L)1R(10μmol/L)1P(10μmol/L)1DNA模板(50-100ng/μL)——），检验过程中分别设阳性对照、阴性对照和空白对照。以蓝点马鲛提取的DNA为阳性对照，以已知不含有蓝点马鲛的样品提取的DNA为阴性对照，以灭菌水为空白对照。样品、阳性对照、阴性对照、空白对照各设置两个平行。5c)阳性对照：有荧光对数增长，且荧光通道出d)内参照：被检样品有荧光对数增长，且荧光通道出现典型的扩增曲线，相应的Ct值＜30.0。a）如Ct

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