2025年高考生物复习之小题狂练300题（多选题）：现代生物技术及应用（10题）

第1页（共1页）2025年高考生物复习之小题狂练300题（多选题）：现代生物技术及应用（10题）一．多选题（共10小题）（多选）1．工业上生产青霉素的流程如图所示。有关叙述正确的有（）A．制备该培养基除了添加必要的营养成分外，还需要将pH调至碱性 B．过程①、②都属于扩大培养，发酵过程的中心环节是发酵罐中发酵 C．过程③需要严格的灭菌，否则可能会导致青霉素产量下降 D．过程④可采用过滤、沉淀方法将菌体分离干燥（多选）2．我国育种专家用普通小麦与耐盐偃麦草体细胞杂交获得耐盐新品种山融3号，培育过程如图所示。下列叙述错误的是（）A．原生质体由细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质组成 B．融合原生质体需放在无菌水中培养，以防杂菌污染 C．愈伤组织再分化形成的芽产生的生长素会抑制愈伤组织生根 D．可将获得的试管苗移栽于高盐土壤中进行筛选后，再推广栽培（多选）3．澳大利亚布里斯班一对姐弟被确认为全球第二对半同卵双胞胎。发育成半同卵双胞胎的受精卵形成过程如图所示，图3中染色单体分离后分别移向细胞的三个不同方向，从而分裂成A、B、C三个细胞，其中两个细胞发育成姐弟二人。下列有关叙述错误的是（）A．图1表示卵子的异常受精过程，此时卵子发育到减数分裂Ⅱ的中期 B．该卵子与2个精子受精，与透明带反应无关 C．若图4细胞A包含父系和母系染色体组各1个，则细胞C可能含2个母系染色体组 D．这对姐弟来源于母亲的染色体一般相同，来源于父亲的染色体可能不同（多选）4．同种生物的细胞可在自然条件下发生融合，不同种生物的细胞也可经诱导发生融合。如图为细胞融合过程示意图。下列叙述正确的是（）A．在形成某动物的有性杂交后代时，一个a只能与一个b结合的两道屏障有透明带反应、卵细胞膜反应 B．在培育体细胞杂交植株过程中，a与b融合成功的标志是d再生出细胞壁 C．制备单克隆抗体时，a、b和d均可在适宜条件无限增殖，且在培养它们时会有细胞贴壁和接触抑制现象 D．培育体细胞杂交植株和制备单克隆抗体时均需诱导融合，且融合方法有所不同（多选）5．研究人员将结核杆菌分别接种在含有不同浓度抗生素A与B的培养基中（+代表含抗生素，+多少代表抗生素浓度，一代表不含抗生素），对两种抗生素药性分析。在37℃环境下培养24小时后，细菌生长情况如图。下列说法错误的是（）A．为排除杂菌的影响，倒平板前需对培养基采用高压蒸汽灭菌 B．该实验使用稀释涂布平板法接种结核杆菌，待菌液被吸收后方可倒置培养 C．长期使用抗生素A不会增加结核杆菌的抗药性基因频率 D．与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B可显著增强对结核杆菌的抑制作用（多选）6．东南景天中的HMA3基因能编码Cd（镉）转运蛋白，Cd转运蛋白能将土壤中的Cd吸收进体内，现欲将东南景天中的HMA3基因转入栾树，以增强栾树对Cd的富集能力，从而有效治理Cd污染，科研人员利用如图结构构建重组DNA，图1为HMA3基因所在DNA示意图，图2为质粒结构示意图，下列叙述错误的是（）A．欲获取HMA3基因，可用引物1、引物2进行PCR循环至少2轮获得 B．用凝胶电泳鉴定PCR产物，引物1、引物2扩增的产物可得3条条带 C．构建含HMA3和GFP基因的重组质粒，需在引物上添加BglⅡ和HindⅢ的识别序列 D．用含潮霉素的培养基筛选受体细胞，能生长的为含重组质粒的受体细胞（多选）7．动物体细胞融合后染色体核型不稳定，来自某一方的染色体往往随机丢失一至多条，这种现象常应用于基因的定位。在甲型流感单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞在克隆化培养过程中来自B淋巴细胞的染色体往往出现随机丢失现象。不考虑基因互作和其他变异，下列叙述正确的是（）A．B淋巴细胞可从多次间歇注射甲型流感疫苗的动物脾脏中筛选获得 B．在筛选杂交瘤细胞的选择培养基上，B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均死亡 C．与亲代杂交瘤细胞相比较，若减少某条染色体后分泌单克隆抗体的功能缺失，则该抗体的基因就位于这条染色体上 D．利用抗体检测筛选的杂交瘤细胞克隆化培养将具有持续产生甲型流感抗体的能力（多选）8．W是一种具有特定功能的人体蛋白质。某研究小组拟仿照制备乳腺生物反应器的研究思路，制备一种膀胱生物反应器来获得W，基本过程如图所示。下列叙述正确的是（）A．步骤①是基因工程的核心步骤，需要使用的工具酶有限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体 B．与乳腺生物反应器相比，用膀胱生物反应器生产W所选的启动子不同 C．从上述流程可知，制备生物反应器涉及胚胎工程中的主要技术有体外受精、胚胎移植 D．鉴定W蛋白基因是否成功表达可以检测转基因动物的尿液是否存在W蛋白（多选）9．狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉且其细胞中的黄酮类化合物可入药。某科研小组以狼爪瓦松为材料，开展植物细胞工程应用的研究，具体过程如图所示（其中数字序号代表相应的处理过程）。下列有关分析错误的有（）A．过程③在生长素/细胞分裂素比值高的培养基中培养，再移至相应比值低的培养基中 B．过程④常用射线或化学物质处理，处理后培养即可获得大量所需的突变体植株丙 C．过程⑤所得原生质体经体细胞杂交技术最终形成丁，该过程实现了远缘杂交育种 D．过程⑥利用愈伤组织分裂能力强、全能性高的特点，可大量获得黄酮类化合物（多选）10．鸡蛋表面污染的细菌会逐渐侵入蛋内，缩短鸡蛋保质期。对某地不同季节及不同养殖模式下生产的鸡蛋取样，按每克鸡蛋用1mL无菌生理盐水清洗鸡蛋表面，收集清洗液，培养计数结果如表。相关叙述正确的是（）季节菌落数（个•g﹣1）半封闭式养殖模式全封闭式养殖模式夏季3.92×1047.24×103冬季7.60×1041.24×104A．稀释涂布平板法得到的鸡蛋表面菌落数比实际数略少 B．表中数据是对清洗液稀释1×103倍后涂布平板获得的 C．比较两种养殖模式可知鸡蛋表面的细菌主要来自环境 D．冬季鸡舍更需要消毒以减少鸡蛋表面的细菌污染

2025年高考生物复习之小题狂练300题（多选题）：现代生物技术及应用（10题）参考答案与试题解析一．多选题（共10小题）（多选）1．工业上生产青霉素的流程如图所示。有关叙述正确的有（）A．制备该培养基除了添加必要的营养成分外，还需要将pH调至碱性 B．过程①、②都属于扩大培养，发酵过程的中心环节是发酵罐中发酵 C．过程③需要严格的灭菌，否则可能会导致青霉素产量下降 D．过程④可采用过滤、沉淀方法将菌体分离干燥【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；发酵工程的基本环节．【专题】模式图；微生物的分离、培养和应用．【答案】BCD【分析】培养基的概念及营养构成：（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。（2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求，例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。【解答】解：A、制备培养基时，除了添加必要的营养成分外，还需要将pH调至酸性，A错误；B、接种之前的过程①、②都属于扩大培养，以提高微生物产品的产量，其中在发酵罐中发酵是整个发酵过程的中心环节，B正确；C、过程③需要严格的灭菌，因为杂菌污染后，某些杂菌会分泌青霉素酶将青霉素分解掉，可能会导致青霉素产量下降，C正确；D、待完全发酵结束后，采用过滤、沉淀等方法将菌体分离干燥，D正确。故选：BCD。【点评】本题考查学生从题中获取相关信息，并结合所学发酵工程的知识做出正确判断，属于理解层次的内容，难度适中。（多选）2．我国育种专家用普通小麦与耐盐偃麦草体细胞杂交获得耐盐新品种山融3号，培育过程如图所示。下列叙述错误的是（）A．原生质体由细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质组成 B．融合原生质体需放在无菌水中培养，以防杂菌污染 C．愈伤组织再分化形成的芽产生的生长素会抑制愈伤组织生根 D．可将获得的试管苗移栽于高盐土壤中进行筛选后，再推广栽培【考点】植物体细胞杂交技术及应用．【专题】模式图；正推法；植物的组织培养．【答案】ABC【分析】植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。在进行体细胞杂交之前，必须先利用纤维素酶和果胶酶去除这层细胞壁，获得原生质体；人工诱导原生质体融合的方法基本可以分为两大类—物理法和化学法：物理法包括电融合法、离心法等；化学法包括聚乙二醇（PEG）融合法等。【解答】解：A、原生质体是用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁后的植物细胞，而由细胞膜、液泡膜及两者之间的细胞质组成的结构称为原生质层，A错误；B、原生质体放在无菌水中会吸水涨破，应放到等渗的溶液中，保持原生质体的完整性，B错误；C、愈伤组织再分化形成的芽产生的生长素会促进愈伤组织生根，C错误；D、僵麦草出现耐盐性状是由于变异导致的，高盐土壤对僵麦草耐盐性状进行选择，筛选后，再推广栽培，D正确。故选：ABC。【点评】本题主要考查的是植物体细胞杂交的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适中。（多选）3．澳大利亚布里斯班一对姐弟被确认为全球第二对半同卵双胞胎。发育成半同卵双胞胎的受精卵形成过程如图所示，图3中染色单体分离后分别移向细胞的三个不同方向，从而分裂成A、B、C三个细胞，其中两个细胞发育成姐弟二人。下列有关叙述错误的是（）A．图1表示卵子的异常受精过程，此时卵子发育到减数分裂Ⅱ的中期 B．该卵子与2个精子受精，与透明带反应无关 C．若图4细胞A包含父系和母系染色体组各1个，则细胞C可能含2个母系染色体组 D．这对姐弟来源于母亲的染色体一般相同，来源于父亲的染色体可能不同【考点】胚胎的早期发育；细胞的减数分裂；受精作用．【专题】模式图；胚胎工程．【答案】BC【分析】根据图示，半同卵双胞胎的形成过程有两个精子同时进入到一个卵细胞，受精卵中有三个染色体组；有丝分裂过程中，染色体复制，有丝分裂后期形成6个染色体组，通过三极纺锤体将六个染色体组拉开，每一极2个染色体组，其中有两极的染色体各有一组来自双亲，有一极染色体均来自于父亲。细胞分裂后，其中两个细胞发育成个体。【解答】解：A、图1两个精子进入一个卵细胞，是异常受精过程，发生在卵细胞的减数第二次分裂中期，A正确；B、阻止多精入卵的两道屏障是透明带反应和卵黄膜封闭作用而不是顶体反应，B错误；C、若图4细胞A包含父系和母系染色体组各1个，C应该包含父系和母系染色体组各1个或包含两个父系染色体组，C错误；D、该姐弟来源于母亲的染色体是复制而来是相同的，来自于父亲的染色体由两个不同的精子提供，可能不同，D正确。故选：BC。【点评】本题主要考查胚胎发育、受精作用等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和掌握。（多选）4．同种生物的细胞可在自然条件下发生融合，不同种生物的细胞也可经诱导发生融合。如图为细胞融合过程示意图。下列叙述正确的是（）A．在形成某动物的有性杂交后代时，一个a只能与一个b结合的两道屏障有透明带反应、卵细胞膜反应 B．在培育体细胞杂交植株过程中，a与b融合成功的标志是d再生出细胞壁 C．制备单克隆抗体时，a、b和d均可在适宜条件无限增殖，且在培养它们时会有细胞贴壁和接触抑制现象 D．培育体细胞杂交植株和制备单克隆抗体时均需诱导融合，且融合方法有所不同【考点】植物体细胞杂交技术及应用；单克隆抗体及其应用．【专题】模式图；克隆技术．【答案】ABD【分析】据图分析，a、b是生殖细胞，c是细胞融合过程，d是杂交细胞，d杂交细胞发育成个体，依赖于细胞的全能性。【解答】解：A、防止多精入卵的两道屏障是透明带反应、卵细胞膜反应，所以在形成某动物的有性杂交后代时，一个a只能与一个b结合的两道屏障有透明带反应、卵细胞膜反应，A正确；B、在培育体细胞杂交植株过程中，a与b是原生质体，没有细胞壁，而a与b融合是否成功的标志是d再生出细胞壁，B正确；C、制备单克隆抗体时，a和b细胞中，一个是骨髓瘤细胞，另一个是已免疫的B淋巴细胞，其中已免疫的B淋巴细胞不可无限增殖，而骨髓瘤细胞在培养它们时不会有细胞贴壁和接触抑制现象，C错误；D、培育体细胞杂交植株需用PEG诱导融合，生产单克隆抗体时需要用灭活的病毒促融，融合的细胞为效应B细胞和骨髓瘤细胞，D正确。故选：ABD。【点评】本题主要考查细胞工程等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和掌握。（多选）5．研究人员将结核杆菌分别接种在含有不同浓度抗生素A与B的培养基中（+代表含抗生素，+多少代表抗生素浓度，一代表不含抗生素），对两种抗生素药性分析。在37℃环境下培养24小时后，细菌生长情况如图。下列说法错误的是（）A．为排除杂菌的影响，倒平板前需对培养基采用高压蒸汽灭菌 B．该实验使用稀释涂布平板法接种结核杆菌，待菌液被吸收后方可倒置培养 C．长期使用抗生素A不会增加结核杆菌的抗药性基因频率 D．与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B可显著增强对结核杆菌的抑制作用【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．【专题】模式图；微生物的分离、培养和应用．【答案】CD【分析】根据图中平板上菌落的分布可知，与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B没有明显增强抑制作用。【解答】解：A、先用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，然后冷却到50℃左右倒平板，A正确；B、如图，菌落分布均匀，是利用了稀释涂布平板法接种结核杆菌，待菌液被吸收后方可倒置培养，B正确；C、在抗生素A的选择作用下，结核杆菌的抗药性基因频率可能会增加，C错误；D、根据图中平板上菌落的分布可知，与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B不能增强对结核杆菌的抑制作用，D错误。故选：CD。【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。（多选）6．东南景天中的HMA3基因能编码Cd（镉）转运蛋白，Cd转运蛋白能将土壤中的Cd吸收进体内，现欲将东南景天中的HMA3基因转入栾树，以增强栾树对Cd的富集能力，从而有效治理Cd污染，科研人员利用如图结构构建重组DNA，图1为HMA3基因所在DNA示意图，图2为质粒结构示意图，下列叙述错误的是（）A．欲获取HMA3基因，可用引物1、引物2进行PCR循环至少2轮获得 B．用凝胶电泳鉴定PCR产物，引物1、引物2扩增的产物可得3条条带 C．构建含HMA3和GFP基因的重组质粒，需在引物上添加BglⅡ和HindⅢ的识别序列 D．用含潮霉素的培养基筛选受体细胞，能生长的为含重组质粒的受体细胞【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．【专题】模式图；基因工程．【答案】ABD【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。【解答】解：A、由于引物接在了目的基因的两侧，因此经过两轮PCR后，可获得与HMA3基因等长的DNA单链，故若要获取HMA3基因，可用引物1、引物2进行PCR循环至少3轮获得，A错误；B、用凝胶电泳鉴定PCR产物，引物1、引物2扩增的产物可能会得到引物带、引物二聚体带、目的扩增产物带和非目的扩增产物带等多条不同的条带，B错误；C、构建含HMA3和GFP基因的重组质粒时，需要有启动子和终止子序列，又不破坏GFP基因，因此需要在引物上添加BglⅡ和HindⅢ的识别序列，C正确；D、质粒上含有潮霉素抗性基因，用含潮霉素的培养基筛选受体细胞，能生长的为含重组质粒或含空质粒的受体细胞，这两种都有可能，D错误。故选：ABD。【点评】本题考查基因工程的相关知识，要求考生理解识记有关技术的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能将教材中的知识结合题中信息进行迁移应用。（多选）7．动物体细胞融合后染色体核型不稳定，来自某一方的染色体往往随机丢失一至多条，这种现象常应用于基因的定位。在甲型流感单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞在克隆化培养过程中来自B淋巴细胞的染色体往往出现随机丢失现象。不考虑基因互作和其他变异，下列叙述正确的是（）A．B淋巴细胞可从多次间歇注射甲型流感疫苗的动物脾脏中筛选获得 B．在筛选杂交瘤细胞的选择培养基上，B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均死亡 C．与亲代杂交瘤细胞相比较，若减少某条染色体后分泌单克隆抗体的功能缺失，则该抗体的基因就位于这条染色体上 D．利用抗体检测筛选的杂交瘤细胞克隆化培养将具有持续产生甲型流感抗体的能力【考点】单克隆抗体及其应用．【专题】正推法；克隆技术．【答案】ABC【分析】在制备单克隆抗体时，首先要给小鼠免疫，产生相应的B细胞，然后将B细胞与骨髓瘤细胞融合，经过选择培养基两次筛选，最后获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。在单克隆抗体的制备过程中，使用了动物细胞培养和动物细胞融合等动物细胞工程技术。【解答】解：A、对动物进行间歇注射抗原处理，以刺激动物机体产生相应的B淋巴细胞，A正确；B、B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行融合，再用特定的选择培养基进行筛选。在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长，B正确；C、分泌单克隆抗体的基因位于染色体上，因此与亲代杂交瘤细胞相比较，若减少某条染色体后分泌单克隆抗体的功能缺失，说明该抗体的基因位于这条染色体上，C正确；D、杂交瘤细胞在克隆化培养过程中来自B淋巴细胞的染色体往往出现随机丢失现象，若丢失的染色体含有产生甲型流感抗体的基因，则利用抗体检测筛选的杂交瘤细胞不一定具有持续产生甲型流感抗体的能力，D错误。故选：ABC。【点评】本题考查单克隆抗体的制备与应用的相关知识，要求考生理解识记有关技术的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能将教材中的知识结合题中信息进行迁移应用。（多选）8．W是一种具有特定功能的人体蛋白质。某研究小组拟仿照制备乳腺生物反应器的研究思路，制备一种膀胱生物反应器来获得W，基本过程如图所示。下列叙述正确的是（）A．步骤①是基因工程的核心步骤，需要使用的工具酶有限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体 B．与乳腺生物反应器相比，用膀胱生物反应器生产W所选的启动子不同 C．从上述流程可知，制备生物反应器涉及胚胎工程中的主要技术有体外受精、胚胎移植 D．鉴定W蛋白基因是否成功表达可以检测转基因动物的尿液是否存在W蛋白【考点】体外受精和胚胎移植．【专题】模式图；胚胎工程．【答案】BCD【分析】1、膀胱生物反应器有着和乳腺生物反应器一样的优点：收集产物蛋白比较容易，不会对动物造成伤害。与乳腺生物反应器相比，用膀胱生物反应器生产W的优势在于不受转基因动物性别和年龄的限制。2、基因工程技术的基本步骤包括：目的基因的筛选与获取，基因表达载体的构建，将目的基因导入受体细胞，目的基因的检测与鉴定。其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤。3、分析题图可知，步骤①为将W基因与载体结合，构建基因表达载体；步骤②为将重组表达载体导入受精卵，常用显微注射法；步骤③为早期胚胎培养；步骤④为胚胎移植。【解答】解：A、步骤①是基因表达载体的构建，是基因工程的核心步骤，需要使用的工具酶有限制性内切核酸酶和DNA连接酶，载体不是工具酶，A错误；B、乳腺生物反应器是将W蛋白在乳腺中表达，应选用乳腺中特异性表达的基因的启动子，而膀胱生物反应器是将W蛋白在膀胱上皮细胞中表达，应选用膀胱上皮细胞中特异性表达的基因的启动子，B正确；C、结合题图可知，制备生物反应器涉及胚胎工程中的主要技术有体外受精、早期胚胎培养，胚胎移植，C正确；D、若W蛋白基因表达成功，说明膀胱生物反应器制备成功，就可以从转基因动物的尿液中检测到W蛋白，D正确。故选：BCD。【点评】本题主要考查胚胎工程等相关知识点，意在考查学生对相关知识点的理解和掌握。（多选）9．狼爪瓦松是一种具有观赏价值的野生花卉且其细胞中的黄酮类化合物可入药。某科研小组以狼爪瓦松为材料，开展植物细胞工程应用的研究，具体过程如图所示（其中数字序号代表相应的处理过程）。下列有关分析错误的有（）A．过程③在生长素/细胞分裂素比值高的培养基中培养，再移至相应比值低的培养基中 B．过程④常用射线或化学物质处理，处理后培养即可获得大量所需的突变体植株丙 C．过程⑤所得原生质体经体细胞杂交技术最终形成丁，该过程实现了远缘杂交育种 D．过程⑥利用愈伤组织分裂能力强、全能性高的特点，可大量获得黄酮类化合物【考点】植物的组织培养；植物体细胞杂交技术及应用．【专题】模式图；植物的组织培养．【答案】ABCD【分析】1、植物组织培养的过程：离体的植物组织、器官或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，愈伤组织再分化形成胚状体，进一步发育植株（新植体）。2、植物组织培养技术具有广泛的应用：植物繁殖的新途径（快繁技术、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。【解答】解：A、③应先诱导生芽再诱导生根，先在生长素/细胞分裂素的值低的培养基中培养，再转移至其值高的培养基中培养，A错误；B、过程④常用射线或化学物质处理，由于人工诱变具有不定性向和低频性，因此通过筛选可能获得所需的突变体植株丙，B错误；C、植物丁是将原生质体进行了融合，由于是同种生物，并未实现远缘杂交，C错误；D、过程⑥利用愈伤组织分裂能力强的特点，通过培养愈伤组织细胞可大量获得黄酮类化合物，D错误。故选：ABCD。【点评】本题结合图示，考查植物组织培养的相关知识，意在考查学生的识图能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力。（多选）10．鸡蛋表面污染的细菌会逐渐侵入蛋内，缩短鸡蛋保质期。对某地不同季节及不同养殖模式下生产的鸡蛋取样，按每克鸡蛋用1mL无菌生理盐水清洗鸡蛋表面，收集清洗液，培养计数结果如表。相关叙述正确的是（）季节菌落数（个•g﹣1）半封闭式养殖模式全封闭式养殖模式夏季3.92×1047.24×103冬季7.60×1041.24×104A．稀释涂布平板法得到的鸡蛋表面菌落数比实际数略少 B．表中数据是对清洗液稀释1×103倍后涂布平板获得的 C．比较两种养殖模式可知鸡蛋表面的细菌主要来自环境 D．冬季鸡舍更需要消毒以减少鸡蛋表面的细菌污染【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．【专题】数据表格；微生物的分离、培养和应用．【答案】ACD【分析】测定微生物数量的方法：①直接计数法：常用显微镜直接技术法，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。②间接计数法：常用稀释平板计数法，平板培养基上长出一个菌落就代表原待测样品中一个微生物个体。【解答】解：A、由于两个或更多的细胞可能聚集在一起形成一个菌落，因此稀释涂布平板法得到的鸡蛋表面菌落数比实际数略少，A正确；B、稀释平板计数法涂布的菌液体积为0.1mL，菌落数为30﹣300的平板适于计数，根据图中数据分析，半封闭式养殖模式对清洗液稀释1×102倍后涂布平板，全封闭式养殖模式对清洗液稀释1×101倍后涂布平板，B错误；C、半封闭式养殖模式下的鸡蛋表面菌落数明显高于全封闭式养殖模式，这说明环境中的细菌更容易污染鸡蛋表面，C正确；D、从表中数据可以看出，冬季鸡蛋表面的菌落数明显高于夏季，这可能是因为冬季气温低，细菌更容易在鸡蛋表面生存和繁殖，因此需要加强消毒措施，D正确。故选：ACD。【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。

考点卡片1．细胞的减数分裂【知识点的认识】1、概念：细胞连续分裂两次，而染色体在整个过程只复制一次的细胞分裂方式。2、减数分裂是特殊的有丝分裂，其特殊性表现在：①从分裂过程上看：（在减数分裂全过程中）连续分裂两次，染色体只复制一次②从分裂结果上看：形成的子细胞内的遗传物质只有亲代细胞的一半③从发生减数分裂的部位来看：是特定生物（一般是进行有性生殖的生物）的特定部位或器官（动物体一般在精巢或卵巢内）的特定细胞才能进行（如动物的性原细胞）减数分裂。④从发生的时期来看：在性成熟以后，在产生有性生殖细胞的过程中进行一次减数分裂。【命题方向】题型：减数分裂的概念和特征典例：（2013•东城区模拟）有关减数分裂和受精作用的描述，正确的是（）A．受精卵中的遗传物质一半来自于卵细胞，一半来自于精子B．减数分裂过程中，着丝点分裂伴随着非同源染色体的自由组合C．减数分裂过程中，着丝点分裂伴随着等位基因的分离D．染色体的自由组合不是配子多样的唯一原因分析：关注减数分裂中染色体的行为变化和数目变化、各个时期的特征。等位基因位于同源染色体的相同位置。受精卵中的核遗传物质一半来自于卵细胞，一半来自于精子，但细胞质遗传物质一般全部来自卵细胞。解答：A、受精卵中的核遗传物质一半来自于卵细胞，一半来自于精子，但细胞质遗传物质一般全部来自卵细胞。故A错误。B、减数分裂中，同源染色体分离和非同源染色体的自由组合发生在减Ⅰ后期。减Ⅱ后期着丝点分裂，姐妹染色单体分离。故B错误。C、等位基因的分离可发生在减Ⅰ后期（同源染色体分离）和减Ⅱ后期（若减Ⅰ前期发生交叉互换，则减Ⅱ后期姐妹染色单体分离也会导致等位基因分离）。着丝点分裂发生在减Ⅱ后期。故C错误。D、决定配子中染色体组合多样性的因素是同源染色体分离导致非同源染色体自由组合，同源染色体非姐妹染色单体上等位基因交叉互换。故D正确。故选D。点评：本题考查了减数分裂、受精作用的相关内容。属于对识记、理解层次的考查。【解题思路点拨】减数分裂的特征：①一种特殊方式的有丝分裂（染色体数目减半）；②与有性生殖的生殖细胞的形成有关；③只有特定生殖器官内的特定细胞才能进行。2．受精作用【知识点的认识】亲子代生物之间染色体数目保持稳定的原因：减数分裂是进行有性生殖的生物，在形成成熟生殖细胞进行的细胞分裂，在分裂过程中，染色体复制一次，而细胞连续分裂两次．因此减数分裂的结果是：成熟生殖细胞中的染色体数目比原始生殖细胞减少一半．通过受精作用，受精卵中的染色体数目又恢复到体细胞的数目．这昂就保证了亲子代生物之间染色体数目的稳定．【命题方向】题型：亲子代生物之间染色体数目保持稳定的原因典例：对于进行有性生殖的生物体来说，维持每种生物前后代体细胞中染色体数目恒定的生理作用是（）A．有丝分裂和无丝分裂B．减数分裂和受精作用C．无丝分裂和减数分裂D．细胞分裂和细胞分化分析：减数分裂是进行有性生殖的生物，在形成成熟生殖细胞进行的细胞分裂，在分裂过程中，染色体复制一次，而细胞连续分裂两次．因此减数分裂的结果是：成熟生殖细胞中的染色体数目比原始生殖细胞减少一半．通过受精作用，受精卵中的染色体数目又恢复到体细胞的数目．解答：减数分裂使成熟生殖细胞中的染色体数目比原始生殖细胞减少一半，而受精作用使染色体数目又恢复到体细胞的数目．因此对于进行有性生殖的生物体来说，减数分裂和受精作用对于维持每种生物前后代体细胞中染色体数目的恒定，对于遗传和变异都很重要．故选：B．点评：本题考查亲子代生物之间染色体数目保持稳定的原因，要求考生识记减数分裂的结果和受精作用的意义，能根据题干要求选出正确的答案，属于考纲识记层次的考查．【解题思路点拨】细胞内的遗传物质并不是一般来自父亲，一般来自母亲，这是因为细胞核内遗传物质一半来自父亲，一半来自母亲，但是其线粒体内也有DNA（来自于母亲），所以细胞内的遗传物质来自于母亲的多于父亲的．3．微生物的选择培养（稀释涂布平板法）【知识点的认识】土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：1．分离菌株的思路（1）自然界中目的菌株的筛选①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的TaqDNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的。（2）实验室中目的菌株的筛选①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度．pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素．配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。2．统计菌落数目的方法（1）稀释涂布平板法（间接）①当样品的稀释庋足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。（2）利用显微镜直接计数3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。4．实验流程土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定。【命题方向】自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图所示。下列叙述正确的是（）A.培养自生固氮菌时，可用牛肉膏蛋白胨培养基，接种完成后培养皿应倒置B.该纯化培养的方法是稀释涂布平板法，统计细菌数量时通常会低于真实值C.步骤①获取土壤一般来自深层土壤，为防止其他杂菌污染可对获取土壤灭菌处理D.若④的平板上菌落平均数为58个，则每克土壤中含有的固氮菌约5.8×105个分析：培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质和氧气的要求。解答：A、培养自生固氮菌时，一般不需要添加氮源，而牛肉膏蛋白胨培养基含有氮源，A错误；B、该纯化培养的方法是稀释涂布平板法，由于多个细菌连在一起时长出来的是单个菌落，因此统计细菌数量时通常会低于真实值，B正确；C、步骤①获取土壤一般来自浅层土壤，对土壤灭菌处理时也杀死了固氮菌，C错误；D、10g土壤加到90mL无菌水后，稀释了10倍，在④中相当于稀释了104倍，若在④的平板上统计的菌落的平均数量为58个，则每克土壤中含有的固氮菌为58÷0.1×104＝5.8×106个，D错误。故选：B。点评：本题主要考查微生物培养的相关知识，难度适中。【解题思路点拨】掌握稀释涂布平板法的相关步骤，结合题干进行分析解答4．发酵工程的基本环节【知识点的认识】（1）发酵工程的基本环节有：发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等方面。（2）发酵工程的中心环节应该注意：发酵罐内的发酵是发酵工程的中心环节，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等，以了解发酵进程。还要及时添加必需的营养组分，要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件。环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢产物的形成。【命题方向】发酵工程的基本环节中，其中心环节是（）A．菌种的选育和扩大培养B．培养基的配制、灭菌和接种C．发酵罐内的发酵D．产品的分离、提纯等分析：发酵工程，是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。解答：在发酵过程中，要随时检测培养基中的微生物数量产物的浓度等，以及了解发酵进程，还要及时添加必需的营养组分，要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件。环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物的代谢物的形成，所以发酵罐内的发酵是发酵工程的中心环节。故选：C。点评：本题考查发酵工程的相关知识，比较基础，只要考生识记发酵工程的基本环节即可正确答题，属于考纲识记层次的考查。【解题思路点拨】掌握发酵工程基本环节的相关知识是解题的关键。5．发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用【知识点的认识】发酵工程的应用：在食品工业的应用：生产传统的发酵产品，生产各种各样的食品添加剂，生产酶制剂等。在医药工业的应用：如生产抗生素、氨基酸、激素、免疫调节剂等。在农牧业上的应用：生产微生物肥料、微生物农药、微生物饲料等。【命题方向】由于发酵工程生产条件温和、原料来源丰富、价格低廉等，在食品工业、医药工业、农牧业等许多领域得到了广泛的应用，下列有关发酵工程在食品工业上应用的描述，错误的是（）A．酱油是以大豆为主要原料，利用霉菌制作而成的B．啤酒发酵的过程分为主发酵和后发酵两个阶段，其中，酵母菌的繁殖在主发酵阶段完成，大部分糖的分解和代谢物的生成在后发酵阶段完成C．味精是谷氨酸棒状杆菌发酵产生的谷氨酸经过一系列处理而获得的D．由于酶制剂催化效率高、专一性强、作用条件温和，因此在使用时要考虑酶制剂的使用量、底物的种类以及适宜的温度和pH分析：大麦常用于酿酒，而制作酱油常用大豆。谷氨酸棒状杆菌为需氧菌。酶的催化受温度、pH等条件的影响。解答：A、酱油是以大豆为主要原料，利用产生蛋白酶的霉菌（如黑曲霉），将原料中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，然后经淋洗、调制而成的，A正确；B、啤酒发酵的过程分为主发酵和后发酵两个阶段，但酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成，主发酵结束后在低温、密闭环境下储存一段时间属于后发酵，B错误；C、谷氨酸棒状杆菌在有氧条件下发酵产生谷氨酸，谷氨酸经过一系列处理而获得味精，C正确；D、由于酶制剂催化效率高、专一性强、作用条件温和，因此在使用时要考虑酶制剂的使用量、底物的种类以及适宜的温度和pH，D正确。故选：B。点评：本题主要考查发酵工程的相关知识，要求学生有一定的理解分析能力，能够结合题干信息和所学知识进行分析应用。【解题思路点拨】掌握发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用是解题的关键。6．植物的组织培养【知识点的认识】（1）植物组织培养：将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。（2）植物组织培养的原理是：植物细胞的全能性（3）在一定的激素和营养等条件的诱导下，已经分化的细胞失去特有的结构和功能，转变成未分化的细胞，进而形成不定形的薄壁组织团块（愈伤组织）的过程。愈伤组织重新分化成芽、根等器官的过程，称为再分化。（4）生长素与细胞分裂素的用量比值高，有利于根的分化，抑制芽的形成；用量比值低，有利于芽的分化，抑制根的形成；用量比值适中，促进愈伤组织的形成。【命题方向】下列有关植物组织培养的说法中，错误的是（）A．再分化过程中，不同的细胞内合成了部分功能不同的蛋白质B．脱分化与再分化过程所使用的培养基中激素的浓度及比例不同C．再分化过程在实验室或植物组织培养车间进行，需要避光处理D．再分化过程中，核遗传物质没有发生改变，但mRNA有变化分析：离体的植物组织或细胞，在培养一段时间后，会通过细胞分裂形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植株体。解答：A、再分化过程中，细胞会进行分化，细胞内基因选择性表达，不同细胞内合成了功能不同的特异性蛋白质，A正确；B、在植物组织培养培养过程中，使用不同的植物激素能够人为地控制细胞的脱分化和再分化，故脱分化与再分化二者使用的培养基主要是激素用量及比例的不同，B正确；C、脱分化需要避光，而再分化的过程中会形成根和芽，芽的形成需要光照，有光照才能使其形成叶绿素，故再分化过程需要光照处理，C错误；D、再分化过程中，细胞会进行分化，细胞内基因选择性表达，核遗传物质没有发生改变，但在表达不同的细胞中转录出的信使mRNA会不同，D正确。故选：C。点评：本题考查植物组织培养，要求考生掌握植物组织培养激素，识记实验原理、操作步骤及注意事项，结合选项进行作答。【解题思路点拨】掌握植物的组织培养的相关知识是解题的关键。7．植物体细胞杂交技术及应用【知识点的认识】（1）植物体细胞杂交技术：将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。（2）去除植物细胞壁，获得原生质体的方法：酶解法（纤维素酶和果胶酶处理）。（3）诱导原生质体融合的方法：物理法：电融合法、离心法；化学法：聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+_高pH融合法。（4）植物体细胞杂交的原理原生质体融合的过程利用了细胞膜的流动性，杂种细胞发育成杂种植株利用了植物细胞的全能性。（5）植物体细胞杂交的意义打破生殖隔离，克服了远缘杂交育种，培育植物新品种。【命题方向】拟矮牵牛的原生质体在X培养基（A）上只能形成小细胞团，不能形成植株，在含放线菌素﹣D的X培养基（B）上培养结果相同；矮牵牛的原生质体在A上能分化成植株，但在B上不能生长。在A、B上利用植物体细胞杂交技术均可培养出可育杂种矮牵牛。下列说法错误的是（）A．酶解法制备原生质体时，应在等渗或稍微高渗溶液中进行B．只有杂种细胞能在B上形成植株C．获得的杂种矮牵牛可育，说明拟矮牵牛和矮牵牛属于同一物种D．植物体细胞杂交技术应用的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性分析：植物体细胞杂交的具体过程：解答：A、酶解法去壁制备原生质体应在等渗或略高渗透压的溶液中进行，防止原生质体在低渗溶液中会吸水涨破，A正确；B、根据题干信息“拟矮牵牛的原生质体在X培养基（A）上只能形成小细胞团，不能形成植株，在含放线菌素﹣D的X培养基（B）上培养结果相同；矮牵牛的原生质体在A上能分化成植株，但在B上不能生长”，说明只有杂种细胞能在含放线菌素﹣D的X培养基上形成植株，B正确；C、通过植物体细胞杂交获得的杂种矮牵牛，不论拟矮牵牛和矮牵牛是否属于同一物种，杂种矮牵牛都可育，C错误；D、植物体细胞杂交技术利用了细胞膜的流动性和植物细胞的全能性的原理，D正确。故选：C。点评：本题考查植物体细胞杂交的相关知识，要求考生识记植物体细胞杂交的具体过程及意义，能结合所学的知识准确判断各选项。【解题思路点拨】8．单克隆抗体及其应用【知识点的认识】1、抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体．从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差．2、单克隆抗体的制备（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞（2）获得杂交瘤细胞①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体．（3）克隆化培养和抗体检测（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取3、单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点．（2）用于治疗疾病和运载药物．9．胚胎的早期发育【知识点的认识】胚胎发育过程：（1）卵裂期：细胞进行有丝分裂，数量增加，胚胎总体积不增加；（2）桑葚胚：32个细胞左右的胚胎[之前所有细胞都能发育成完整胚胎的潜能属全能细胞]；（3）囊胚：细胞开始分化，其中个体较大的细胞叫内细胞团将来发育成胎儿的各种组织；而滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘；胚胎内部逐渐出现囊胚腔[注：囊胚的扩大会导致透明带的破裂，胚胎伸展出来，这一过程叫孵化]；（4）原肠胚：内细胞团表层形成外胚层，下方细胞形成内胚层，由内胚层包围的囊腔叫原肠腔[细胞分化在胚胎期达到最大限度。【命题方向】关于哺乳动物胚胎早期发育的叙述正确的是（）A．合子形成后立即进入子宫内进行有丝分裂B．卵裂时每个细胞的表面积与体积之比增大C．桑葚胚内部开始出现含有液体的腔D．内细胞团将来发育成胎盘和胎膜分析：胚胎发育过程：（1）卵裂期：细胞进行有丝分裂，数量增加，胚胎总体积不增加；（2）桑葚胚：32个细胞左右的胚胎[之前所有细胞都能发育成完整胚胎的潜能属全能细胞]；（3）囊胚：细胞开始分化，其中个体较大的细胞叫内细胞团将来发育成胎儿的各种组织；而滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘；胚胎内部逐渐出现囊胚腔[注：囊胚的扩大会导致透明带的破裂，胚胎伸展出来，这一过程叫孵化]；（4）原肠胚：内细胞团表层形成外胚层，下方细胞形成内胚层，由内胚层包围的囊腔叫原肠腔[细胞分化在胚胎期达到最大限度]。解答：A、合子形成后在输卵管中就开始进行有丝分裂，A错误；B、卵裂时胚胎体积不变甚至略微缩小，因此每个细胞的体积变小，则每个细胞的表面积与体积之比增大，B正确；C、囊内部开始出现含有液体的腔，即囊胚腔，C错误；D、内细胞团将来发育成胎儿的各种组织，滋养层将来发育成胎盘和胎膜，D错误。故选：B。点评：本题考查胚胎的早期发育，要求考生识记胚胎早期发育的具体过程，掌握各个阶段的特点，能结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记层次的考查。【解题思路点拨】掌握胚胎的早期发育的相关知识是解题的关键。10．体外受精和胚胎移植【知识点的认识】胚胎移植（1）胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其它雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术．其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体称为“受体”．（供体为优良品种，作为受体的雌性动物应为常见或存量大的品种．）地位：如转基因、核移植，或体外受精等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎，都必须经过胚胎移植技术才能获得后代，是胚胎工程的最后一道“工序”．（2）胚胎移植的意义：大大缩短了供体本身的繁殖周期，充分发挥雌性优良个体的繁殖能力．（3）生理学基础：①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的．这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境．②早期胚胎在一定时间内处于游离状态．这就为胚胎的收集提供了可能．③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应．这为胚胎在受体的存活提供了可能．④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响．（4）基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理．选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，供体和受体是同一物种．并用性激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理．②配种或人工授精．③对胚胎的收集、检查、培养或保存．配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来（也叫冲卵）．对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段．直接向受体移植或放入﹣196℃的液氮中保存．④对胚胎进行移植．⑤移植后的检查．对受体母牛进行是否妊娠的检查．11．基因工程的操作过程综合【知识点的认识】基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品．基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术．（一）基因工程的基本工具1、“分子手术刀”﹣﹣限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的．（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性．（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端．2、“分子缝合针”﹣﹣DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键．②区别：E•coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低．（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键．3、“分子运输车”﹣﹣载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存．②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入．③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择．（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子．（3）其它载体：噬菌体的