DB51T 2649-2019 小熊猫亲子鉴定技术规范　　

DB51四川省市场监督管理局发布IDB51/T2649—2019 1 1 1 1 2 3 3 4 5 6DB51/T2649—20191DB51/T2649—2019小熊猫亲子鉴定技术规范本标准适用于四川省圈养小熊猫亲子鉴定、个体识别、遗传多样性评估和遗传档CJJ/T263-2017动物园动物管微卫星标记Microsatellit微卫星亲子鉴定MicrosatellitePaternit4样品采集与保存2DB51/T2649—20194.1采样范围4.2采样工具一次性橡胶手套、EDTA抗凝采血管、采样登记表、采4.3血液及组织样品采集4.4粪便样品采集采集样品时，应佩戴一次性手套，禁止用手直接触碰4.5样品记录与编号在采集样品时，填写《小熊猫样品采集记录表》（附录A）。记录采样时间、地点、动物编号、性别、年龄、来源以及动物体况特征等。在采血管/采样袋和采样表表示成都动物园血液样品，电子芯片号75687表示成都动物园粪便样品，电子芯片号75634血液样品采集编号规则为：动物园首写字母（三位）+B（血液样品）+样品号或动物呼名，如 粪便样品采集编号规则为：动物园首写字母（三位）+F（粪便样品）+样品号或动物呼名，如“CDZ-F-001”表示成都动物园001号个体粪便样品，“C使用样品对应的专用商品试剂盒或传统分子生物学技术手段进行3DB51/T2649—2019近期使用的DNA，装有DNA的离心管保存于-2号为备选标记。当基本标记不能成功进行亲子鉴定时，考进行小熊猫个体识别时，在10个微卫星标记中选择使用（附录B），其中1-5号为基本标记，6-10号为备选标记。当基本标记不能成功进行个体识别时，考使用微量分光光度计对每个DNA样品进行浓度分析。血液样品260/280在1.8-2.0之间，粪便样品260/280在1.7-2.1之间，浓度超过50ng/ul的DNA样品合格。不在范围内的DNA记。详细记录引物合成的公司名称、合成批次及每个引物Taqpolymerase(2.5U/4DB51/T2649—2019PCR扩增程序：95℃预变性10分钟；95℃变性15秒，退火（退火温度根据具体的引物确定）15秒，）；当PCR扩增完成后，取PCR产物5μL，经1.5%-2%琼脂糖凝胶电泳检测，如电将符合质量要求的PCR产物避光（使用锡箔纸盒）存放于4℃冰箱，用将符合质量要求的PCR产物送有关实验室进行基因扫不同颜色标记引物的PCR产物或者相同颜色标记但PCR产物长度明显不重叠的可以混合后进行基因同一批样品或同一地样品分两/多批次检测的，需使用一个已检对未鉴定出父本或母本的，扩大疑是父母范围，进行样品采集、PCR扩增和基因分型，以进一步确当两个或两个以上的样品微卫星标记分型结果完当两个样品的微卫星标记分型结果中只有一个标记差异时，对出现差异的位点重复PCR扩增（2-3个体；若仍存在标记差异，则认为两个样品来自不5DB51/T2649—2019A号性别左一雌雄6DB51/T2649—2019B5’-3’℃1Aifu-01R:GGTATCAGACGTGGGA2F:ACTCTACTATGATTCTGCCTATR:TGAAGGTTATCTCAGG3Aifu-04F:TTATTTTTTTATGGCTGAGR:GCACTGCTAGTTATTT4F:TGAGGGCATTTGATTTR:AGAGTGAACTGGAATG5Aifu-066F:TTCCCAACTTTCTTCTCTR:AACCAACCCAGTGACA7Aifu-22F:CACGTTGGCTTCAGTAR:GGTTCGGATAAAGTATTR:CCTTGATTTGTTGGAG8Aifu-23F:GGACCCAACAAGCCCTTTR:TTCTCTCTCAGCCTCTCA9F:AACCTCTGTCCTCCTCCR:GCACAATGGTTTAGGCR:ACGGGTCAGAGTCAGAF:AAGTTGAAATGCCCGAGR:TTGCTGGTAGTTGTAGTAATF:TGATTCAAGGTTCCCTAR:AAGAAAGTGGTTAGTTTAAF:AATGTCAAGGAAGAACCR:TTCACTGCTCACCGTTAifu-05F:GAATAATGAGCTTGCCTR:TTGACATTGGCTATGTGF:GACTCTTGGTTTCAGGGR:TCTACACTGGACCATTTTTR:CTTATGCTCTTTCTCC7DB51/T2649—20195’-3’℃F:TTCATGTCCTTTTGGATR:CCTCTTTTACCTCTGCF:AGAGTATCTCGGAAACTGF:TGCGGTGTATTCAGGTAR:TCTTTGAACCCTCAGCF:GGGGCCTTGTCTAATTCAifu-02F:GACCCAGCCCTAACTCR:FAM-CCTGCATTAGGCTCF:AGTGTCTGAAAAATGGAGATF:TAGGGTTCAAGCTCTTACTTAGR:AGCAAACTGTTCTACCACTAifu-24F:AGAGGG