DB4505T 0008-2023 岛礁贝类生态增殖技术规范

4505TechnicalspecificationforecologicI前言 III 12规范性引用文件 13术语和定义 14海域选择 24.1自然条件 24.2海水理化条件 25物种选择 26种苗培育及苗种要求 27苗种检验检疫 27.1检验资质机构要求 27.2抽检原则与数量要求 37.3检验内容与方法 38生态增殖 38.1苗种的适应性驯化及优选 38.2苗种运输方法 38.3底播增殖 49增殖容量 410贝类丰度监测 4 410.2潜水断面设置 410.3丰度监测与计算 411效果评估 411.1基于贝类丰度的增殖效果评估 4 511.3基于增殖群体回捕占比率的增殖效果评估 5 6附录A(规范性)贝类生态增殖放流情况记录表 7附录B(资料性)基于环境DNA的贝类丰度计算 8B.1特异性qPCR扩增引物设计 8 8 8 8附录C(资料性)基于微卫星分子标记的贝类增殖群体回捕占比率计算 C.6贝类回捕抽样样本的遗传区分及回 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1岛礁贝类生态增殖技术规范GB/T12763.6海洋调查规范第6部分：海洋SC/T9401.6水生生物增殖放流技术规程第6部SC/T9401.11水生生物增殖放流技术规程第11部分：投放农业部公告第1125号一、二、三类动物疫病病种目录（水生动生态增殖ecologicalenhanc适应性驯化adaptivedome通过播撒底栖生物苗种到适合的海底生境中，利用天然生产力增加放流种群产量的过从环境样本中提取的所有DNA的集合，包括环境微生物以及从生物体上脱落下来的活细胞DNA和因24海域选择类的贝类，筛选确定贝类生态增殖的海域。增殖海域应生态环4.2海水理化条件表1增殖海域海水理化因子要求5物种选择马氏珠母贝(P.fucata)、珠母贝(P.margaritifera)、企鹅珍珠贝(Pteriapenguin)、杂色鲍(Haliotisdiversicolor)、塔形马蹄螺(Trochuspyramis)和福建牡蛎(Crassostreaangulata)。6种苗培育及苗种要求6.1参照SC/T216.2用于生态增殖的贝苗应活力强、外观无损伤、无畸形、规格整齐。规格应符合表2的要求。表2生态增殖贝类苗种规格中规格7苗种检验检疫3规格合格率≥90%以上，死亡个体比例、伤残率生动物疫病病种8生态增殖b)投放贝类小规格苗种10000个或中规格苗种4000个或大规格苗种2000个，每10m²投放与贝类苗种等规格的蟹5只，在底播生态增殖前对贝类苗种进行为期7d的躲避天敌能力的适应性c)第8d不投喂饲料，只进行大量换水，并进行吸底，以去除贝苗的排泄物。8.2.1水运法一般采用水车，在车内用空调将温度控制在20℃~30℃,车内配备充气装置及降温设备，运输时间宜控制在48h以内，运输时间大于48h时，需就地暂养后再进行运输。8.2.2干运法8.2.2.1充气干运法：适合短途运输。将贝类苗种放入双层塑料袋内，密度控制在小规格贝苗150个/L或中规格贝苗100个/L或大规格贝苗50个/L,注入纯氧后，将塑料袋放入泡沫箱内，密封。将泡沫箱放入转运框中，盖上顶盖以防贝类逃逸。运输时间宜控制在10h以内。8.2.2.2非充气干运法：适合部分牡蛎苗种的短途运输。此方法一般用湿毛巾覆盖在苗种上，保持苗4贝类苗种宜在每年的3～12月进行底播。选择晴朗、多云或阴天进行贝类底播生态增殖，海面最大风力≤5级，气温≤35℃。采用本文件8.2中的方法将贝类苗种运输至底播预定海域。船速：2m/s~4m/s,投放密度：0.1个/m²~0.2个/m²,苗种底播按照SC/T9401.11中的方法进行，记录投放中心位点的经纬度、投放数量和覆盖范围，填写贝类增殖放流情况记录表(见附录A)。不超过增殖海域历史上礁栖贝类最大捕捞产量的2倍。按GB/T12763.6的规定进行潜水员配备和设备准备。10.2潜水断面设置在生态增殖海域每平方公里设置1个监测断面，断面应均匀分布于增殖海域，每个断面宽1.2m,直线距离50m,断面设置方法为：在监测海域内，通过潜水设定起点，沿礁石走向拉皮尺至终点，起点到终点总距离为50m。10.3丰度监测与计算潜水员沿皮尺方向进行断面内贝类调查，观察到的贝类个体均计入贝类数量，并根据贝类形态辨别贝类种类，进行断面内贝类数量统计。调查海域的贝类丰度计算见公式(1):式中：A调查海域的贝类丰度，单位为个/hm²;S第i个断面内观察到的贝类数量，单位为个。11效果评估11.1基于贝类丰度的增殖效果评估11.1.1生态增殖实施一年后，潜水调查贝类丰度，基于贝类丰度的生态增殖效果评估值(Ro)计算见5公式(2):Re=[(Ae₂-Ae₁)/Aq₁]×100%……2)增殖效果评估分级优良差B),基于环境DNA的贝类生态增殖效果评估值(RE)计算见公式(3):增殖效果评估分级优良差增殖效果评估分级优良差67pH8分别针对所有用于生态增殖的贝类种类的线粒体COI基因或基因组DNA特异区域设计种特异性qPCRST——质粒浓度，单位为拷贝/μL；CON——质粒检测浓度，单位为μg/μL；NT——质粒碱基数量，单位为bp。用本文件B.1设计的特异性引物进行qPCR扩增，以测得的扩增循环数(Ct值)为纵坐标，以质粒浓度的对使用标准采水器收集贝类生态增殖海域的底层海水，每个点采集膜对底层海水进行过滤，剪碎滤膜，采用海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒对滤膜上的生物样本进行B.4.2环境DNA的qPCR扩增及增殖种扩增体系为20μL，测量样品Ct值，通过标准曲线，求得Ct值9在调查海域至少设置采样点6个，采集采样点海域的底层海水500mL，提取环境DNA，并按照本文件B.4.2的方法对样品中生态增殖种类贝类的DNA进行定量，底层海水中生态增殖种类贝类DNA丰度的计算）：a——生态增殖的贝类种类个数；AEij——调查海域第i个采样点底层海水中第j种生态增殖种类贝类DNA丰度，单位为拷贝/mL。样本采集后，用剪刀剪取一块200mg～500mg的贝类体壁组织，置于10mL离心管中，加入5mL95%采用常规的海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取贝类样本DNA，DNA浓度≥50ng/μL，对于每个用于生态增殖的贝类种类，分别筛选具有种特异性的高度多态性SSR标记。筛选方法为：采集不同地理分布的各种贝类群体，进行基因组测序并利用MISA软件分别查找具有地理差异的各种贝组中分别筛选出20个～30个具有高度多态性C.6贝类回捕抽样样本的遗传区分及回捕占利用本文件C.5的分型结果，通过GenAIEx6.51b2和原生种群间的遗传距离，如某一种类贝类回捕抽样样本与该种类增殖苗种群体具有相似的分子遗传特征，且