重组人白细胞介素-2课件

重组人白细胞介素-2

RecombinantHumanInterleukin-2重组人白细胞介素-2白细胞介素定义1.由白细胞分泌的一类调节细胞生长、分化和免疫活性的细胞因子。（狭义）2.一组由多种类型细胞所分泌的、结构和功能各异的可溶性蛋白，参与细胞间信息交换，目前已发现IL-1~IL-33。（广义）3.一般具有多来源、多功能和多作用途径的特点。其立体结构有β三叶草型、4-螺旋束型和β三明治型等。信号转导方式有胞外因子-受体复合体相互作用和胞内信号传递途径等。其中白细胞介素-2是最常用的重组人白细胞介素-2白细胞介素-2的结构天然hIL-2是一种糖蛋白，pI在6.6~8.2。成熟的IL-2分子由133个氨基酸残基组成，蛋白链中有三个半胱氨酸残基(Cys)，位于第58、105和125位。58位和105位Cys残基结合形成二硫键，使肽链折叠，125位Cys残基游离。若125位游离的Cys残基突变为Ser或Ala时，仍具有生物活性，且不会与第58位Cys残基形成错误二硫键，增加了IL-2的稳定性，同时也消除了由第125Cys残基造成的二聚体，但是这样IL-2容易产生抗体。IL-2肽链折叠后才呈现活性，直链是无活性的，正确的二硫键对于IL-2活性的保持是必需的，但糖基化却与活性无关。重组人白细胞介素-2主要内容一、作用用途二、药物信息三、生产制备四、注意事项五、发展前景重组人白细胞介素-2一、作用用途为多肽类免疫增强剂，是一种淋巴因子。刺激B细胞增殖分化和分泌抗体，也用于先天或后天免疫缺陷症的治疗。诱导干扰素和多种细胞因子的分泌用于肿瘤辅助治疗和癌性胸、腹水的治疗。也可各种自身免疫病的治疗，如类风湿性关节炎等。对乙型肝炎、麻风病、肺结核、白色念珠菌感染等具有一定的治疗作用。重组人白细胞介素-2二、药物信息药典中有以下三种药物含有重组人白细胞素介素-2：注射用重组人白细胞介素-2重组人白细胞介素-2注射液注射用重组人白细胞介素-2（

Ⅰ）重组人白细胞介素-2注射用重组人白细胞介素-21.性状及功效高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水后迅速溶解为澄明液体。用于治疗成人转移性肾细胞癌（RCC）及黑色素瘤等恶性肿瘤，也适用于癌性胸腹水的控制重组人白细胞介素-22.用法用量（1）.全身用药静脉滴注：10万一80万国际单位；皮下注射：50万—100万国际单位；介入动脉灌注：40万—l00万国际单位重组人白细胞介素-22.用法用量（2）.区域与局部给药

胸腹腔注射：30万—l00万国际单位；肿瘤灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量。一般剂量为一次20万国际单位(IU)。注：药物采用氯化钠溶解。重组人白细胞介素-2重组人白细胞介素-2注射液1.性状及功效(1).性状高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为无色或者微黄色澄明液体。重组人白细胞介素-2(2).功效1.用于肾细胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直肠癌、淋巴癌、肺癌等恶性肿瘤的治疗，用于癌性胸腹水的控制，也可以用于淋巴因子激活的杀伤细胞的培养。2.用于手术、放疗及化疗后的肿瘤患者的治疗，可增强机体免疫功能。3.用于先天或后天免疫缺陷症的治疗，提高病人细胞免疫功能和抗感染能力。4.各种自身免疫病的治疗，如类风湿性关节炎等。5.对某些病毒性、杆菌性疾病、胞内寄生菌感染性疾病，如乙型肝炎、麻风病、肺结核等具有一定的治疗作用。重组人白细胞介素-22.用法用量（1）.全身用药：1)皮下注射：重组人白介素-2（125Ala）60－100万IU/m2，皮下注射3次/周，6周为一疗程。2)静脉注射：40～80万U/m2加生理盐水500ml，滴注时间不少于4小时。3)介入动脉灌注50～100万IU/次，2～4周一次，2～4次为一疗程。重组人白细胞介素-22.用法用量(2).区域与局部用药：1)胸腔注入：用于癌性胸腔积液，重组人白介素－2（125Ala）100～200万IU/m2次，尽量抽去腔内积液后注入。2)肿瘤病灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量，每次用量不少于10万IU，隔日一次,4～6次为一疗程。

重组人白细胞介素-2注射用重组人白细胞介素-2（

Ⅰ）1.性状及功效高效表达人白细胞介素-2（

Ⅰ）基因的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2（

Ⅰ）冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水后迅速溶解为澄明液体。人白细胞介素-2（

Ⅰ）基因是人白细胞介素-2基因序列中原125位编码半胱氨酸的序列突变为编码丝氨酸的序列后的突变基因重组人白细胞介素-22.用法用量1.全身用药：1)皮下(或肌肉)注射：重组人白介素-2(Ⅰ)20-100万国际单位/次，加2毫升无菌生理盐水溶解，皮下(或肌肉)注射，1-2次/天。2)静脉注射：60-200万国际单位/次，加无菌生理盐水500毫升，滴注时间不少于4小时。3)介入动脉灌注：100-200万国际单位/次。重组人白细胞介素-22.用法用量2.区域与局部给药：1)胸腹腔注入：用于癌性胸腹腔积液，重组人白介素-2(Ⅰ)100-300万国际单位/次，尽量抽去腔内积液后注入，2-3次/周。2)心包积液：心包内注射，200万国际单位/次，尽量抽去心包积液后注入，1次/周。3)肿瘤病灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量，10-20万国际单位/次，隔日一次。重组人白细胞介素-2三、生产制备生产制备的方式主要有两种：1、传统工艺制备2、基因工程制备其中以第二种方法为主重组人白细胞介素-2传统工艺流程鸡瘟病毒，PHA,培养液[启动诱生]37℃人白细胞粉诱生白细胞培养液[灭活病毒，分离],HCl,NaOHpH=2~2.5,pH=7.2~7.4,离心上清液35%硫酸铵4℃，24h，离心上清液85%硫酸铵4℃，24h，离心沉淀10mmol/LPBS透析pH=6.5，24h透析内液[亲和层析]上Sepharose柱pH=6.5亲和载体I[洗涤]0.4mol/LNaCl，PBSpH=6.5亲和载体Ⅱ[吸收]1.0mol/LNaCl,PBS透析pH=6.5IL-2组分[凝胶层析]上Utrogel柱pH=6.5凝胶载体0.2mol/Ltris-HCl含0.1%PEG2%正丁醇，0.2mol/L甘氨酸pH=7.6IL-2重组人白细胞介素-2cDNA文库的构建IL-2mRNA逆转录酶逆转录成单链cDNA末端脱氧核苷酸转移酶cDNA末端连接dCMP残基，寡聚（dG）12~18为引物DNA聚合酶I双链cDNA蔗糖密度梯度离心cDNA片段G-C加尾法插入到pBR322质粒的PstI位点重组质粒转化大肠杆菌得到IL-2cDNA文库重组人白细胞介素-2基因工程制备流程IL-2cDNA文库的构建IL-2表达利用mRNA杂交筛选IL-2cDNA克隆与质粒载体pLY-4连接，并转入大肠杆菌纯化的IL-2制备包涵体，并用凝胶过滤层析纯化重组人白细胞介素-2四、注意事项不良反应：各种不良反应中最常见的是发热、畏寒、疲乏等，多与用药剂量有关；个别患者可出现恶心、呕吐、类感冒症状；皮下注射者局部可出现红肿、硬结、疼痛；使用较大剂量时，可能会引起毛细血管渗漏综合征，表现为低血压、末梢水肿等。神经系统受到影响，可发生行为变化、认知障碍重组人白细胞介素-2四、注意事项禁忌：1、对本品成份有过敏史的病人。2、严重低血压者、心肾功能不全者、高热者、肺功能异常或进行过器官移植者。3、重组人白细胞介素-2既往用药史中出现过与之相关的毒性反应。重组人白细胞介素-2五、发展前景1.目前研究是对其在用药前进行化学修饰，主要采用PEG修饰：1).具体有三聚氯氰活MPEG修饰2).MPEG硝基苯基碳酸盐修饰。3).修饰物和rhlu-2的投入比、反应环境的PH、修饰反应的时间、1%PEG4000的加入都会影响到修饰产物的活性。重组人白细胞介素-2五、发展前景修饰后的产物经过疏水层析和凝胶过滤即可被提纯。其水溶性也得到极大提高，可不用

SDS助溶在常温下保持长期稳定。目前已经证明rhIL-2经不同的

PEG化处理后，其循环半衰期均有不同程度的提高，重组人白细胞介素-2发展前景2.IL-2融合蛋白已经成为IL-2研究的热门方向。采用基因重组融合蛋白的方式获得IL-