《辐照法灭活烈性病毒剂量确定方法》

ICS67.020

CCSX04

团体标准

T/CIRAXXXXX—2023

辐照法灭活烈性病毒剂量确定方法

Methodfordeterminingtheinactivationdoseofvirulentvirusbyirradiation

点击此处添加与国际标准一致性程度的标识

（征求意见稿）

2023/11/6

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国同位素与辐射行业协会发布

T/CIRAXXXXX—2023

辐照法灭活烈性病毒剂量确定方法

1范围

本文件规定了辐照设备要求、病毒灭活评价方法与结果判定、类比病毒预备试验、烈性病毒辐照灭

活试验等规范要求。

本文件适用于在BSL3、BSL4实验室，使用小型加速器辐照装置确定烈性病毒最低有效灭活剂量的实

验方法。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

消毒技术规范（2002年版）卫生部(卫法监发〔2002〕282号)

WS/T775-2021新型冠状病毒消毒效果实验室评价标准

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

病毒灭活virusinactivation

通过物理或化学方法使病毒失去感染性。

3.2

吸收剂量absorbeddose

电离辐射授予质量为dm的物质的平均能量dε除以物质质量dm的商。吸收剂量单位为“戈瑞”符号为

Gy，1Gy=1J/kg。

3.3

最低有效灭活剂量minimumeffectivedose

为达到灭活病毒目的所需要的最低吸收剂量，即工艺剂量下限值。

3.4

病毒滴度Virustiter

单位体积液体中具有感染能力病毒的数目。

3.5

TCID50（Mediantissuecultureinfectivedose）

半数组织培养感染剂量,即指能在半数细胞培养板孔引起细胞病变(cytopathiceffect,CPE)的病毒量，

是病毒滴度常用的测量方法。

4辐照设备要求

1

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4.1技术要求

使用小型电子加速器对病毒进行灭活处理，设备要求如下：

a)电子束能量大于150keV；

b)单次辐照吸收剂量0～150kGy；

c)泄露剂量：＜1.0uSv/h（距离设备表面10cm处）；

d)设备尺寸能进入BSL3、BSL4实验室。

4.2使用要求

a)使用单位应取得《辐射安全许可证》或地方环保部门的行政许可；

b)操作人员需参加设备操作的专题培训。

5病毒灭活评价方法与结果判定

5.1试验原理

用细胞感染法测定辐照处理前后（或对照组与实验组）样本中病毒的量。以细胞病变作为判断指标，

使用TCID50方法确定各组病毒的感染滴度，观察不同辐照吸收剂量对病毒的灭活效果。

5.2病毒感染性定量测定方法

TCID50细胞体外感染法，用Behrens和Karber法计算TCID50值。

5.3病毒灭活辐照剂量判定

灭活试验结果符合以下全部条件，可判定辐照灭活病毒的有效性：

a)阴性对照组细胞生长正常；

b)阳性对照组病毒滴度对数值应≥4.0；

c)灭活试验组细胞无病变，与阴性对照组细胞生长情况一致。

其中满足上述判定标准获得的辐照剂量做小值，即为最低有效辐照灭活剂量。

6类比病毒预备试验

6.1类比病毒筛选

对烈性病毒进行辐照灭活试验时，可先选用类比病毒进行预实验，具体如下：

a)所选类比病毒应和拟开展试验的烈性病毒属于同一种属；

b)所选类比病毒应属于低致病性或宿主为非灵长类的病毒，可在低安全等级实验室开展相关试验。

6.2类比试验要求

a)对类比病毒采取的辐照灭活试验方法、条件等应与拟开展试验的烈性病毒一致，辐照灭活剂量结

果以供后续参考；

b)最终结果以拟进行辐照灭活试验的烈性病毒为准，类比病毒试验结果仅供参考。

7烈性病毒辐照灭活试验

7.1病毒载体材料

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不锈钢钢片和聚丙烯塑料片。不锈钢钢片为12mm直径圆形片(厚0.5mm)，聚丙烯塑料片为10mm

×10mm方形。

7.2操作步骤

a)病毒载体的制备:取灭菌载体片，滴染病毒晾干备用。

b)灭活试验:取病毒载体置于细胞培养板中，并进行密封处理，再放入小型辐照仪器内腔中，设置

辐照剂量后，作用至规定的时间取出，放入1mL维持培养基中，作用10min,混匀洗脱。

c)对照组试验:阳性对照组为病毒对照组，观察病毒生长是否良好，病毒滴度是否达到试验要求；

阴性对照组用维持培养基作为阴性对照，观察有无污染，细胞生长是否良好。

d)以上各组按照终点稀释法分别进行病毒滴度测定。试验重复3次。

e)根据5.2测定方法和5.3判定标准，确定2种载体下最低有效灭活剂量，最后取两者较大者为试验

灭活剂量。

具体参照《新型冠状病毒消毒效果实验室评价标准》中载体制备和载体法灭活试验。

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附录A

（规范性附录）

辐照设备剂量标定方法

一、剂量计：采用GEX公司生产的B3薄膜剂量片。

二、测试仪器和工具：

1、分光光度计：能提供520光波波长；波长精度±2；波长重复性≤1；投射比准确度

±0.5%（T）（SRM930D）；透射比重复性0.3%（T）；光谱带宽6；杂光≤0.5%（T）（360，）。

2、烘箱：烘箱内部带有风机；温度控制精度为±1℃；温度范围10℃~100℃可调。（用于对剂量片

进行测量前的烘烤加热）

3、测试支架：安装于分光光度仪内，用于固定剂量薄膜位置。

4、镊子：用于夹取剂量片，防止其它拿取方式污染薄膜剂量片。

5、手套：无粉乳胶手套。（用于保证操作过程中不污染薄膜剂量片）

三、测试步骤:

1、将一张A4纸平铺在托盘上（公司提供的标准高度24mm托盘），要求纸张要与金属托盘贴合在一

起。

2、将纸张多余部分去除。

3、在托盘上标注数个测量点。测量点要求以托盘正中心为中间点，纸张长方向的对称轴（穿过中

心点）为测量点中心点，然后像左、右间隔60mm标注一个测量点（一侧1个，共3个点）。如下图所示：

托盘上剂量片放置点位示意图

4、剂量片标注位置标注好后将剂量片放置于点的正中。如下图所示：

4

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剂量片在托盘上的放置位置示意图

注意：托盘纸张上面除放置剂量片（以及固定剂量片的纸胶带）外不得放置其它物品。它会对剂量

片接收的剂量产生干扰。

5、剂量片放置好后需要对其进行固定（设备在辐照时设备会通入氮气，流动的氮气会将轻薄的剂

量片吹移位置）。固定方法是在剂量片的边缘采用纸胶带粘接固定。粘接固定需要固定在对角上的两个

点，同时需要注意剂量片要平贴在A4纸上。粘接方法如下图所示：

剂量片纸胶带粘接方法示意图

6、剂量片固定好后边可以放入设备进行剂量测量标定

7、标定剂量均匀性时，启动设备，点击装样，待载物小车出来后将托盘放在小车上，设置好能量

和剂量点击启动。

8、辐照完成后将剂量片依次贴在纸上其放入烘箱（烘箱温度60℃）保温15分钟，然后采用分光

光度仪读取参数δ。分光光度仪使在用前需要预热30分钟。

9、在使用分光光度仪读数前需要对仪器进行校验。首先打开电源开关等待30分钟预热，预热完成

后按下述步骤操作：

A、按“MODE”键进入“T”档。

B、盖上盖子，按“ABS0/100%T”键，显示“100.0”。

C、打开盖子，放入黑块，再盖上盖子，按“0%T”键，显示“000.0”。

D、拿出黑块，按“MODE”键，回到“ABS”。

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在完成上述操作就可以进行剂量片的读数了。

10、开始对剂量片进行测量时，首先用镊子夹取剂量片放入分光光度仪里，盖上盖子，读取屏幕上

的参数做好记录。然后用参数的剂量对照表读取三个读取参数、、分别所对应的剂量读

数值记为、。然后根据下面公式计算辐照平均剂量。

D1D2、D3

DDD

D123

3