2025年正交设计法探究酶活性影响因素的实验研究报告

正交试验法就是运用排列整洁的表-正交表来对试验进行整体设计、酶活力(enzymeactivity)也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应1.学习并掌握正交法应用原理。2.采用正交法测定多种原因对酶活力的影响。三、试验原理酶促反应常常同步受到多种原因(包括激活剂和克制剂等)的交互影响，可采用正交法进行综合研究，即通过少许试验收到更好的效果：多快好省。本试验以正交法同步测定[S]、[E]、温度和pH值对trypsin活性的影响，以求得酶活最大时对应影响原因的最佳值(水平),并借此初步掌握正交法的使用。①试管④吸管②漏斗⑤恒温水浴锅③温度计⑥分光光度计①2%血红蛋白液(Hb)④0.04mol/L巴比妥缓冲②15%三氯醋酸液(TCA)⑤考马斯亮蓝染液五、试验操作9次试验),展开后其特性为均衡搭配(1)每列中水平数1、2、3出现次数相似，均为3次；列号试验号1234111112122231333421235223162312731328321393321试验号试剂/ml1682493572%血红蛋白液缓冲溶液37℃预温5min50℃预温5min60℃预温5min(1)各试管编号，分别加入对应容量的底物(2%Hb)和对应pH值的(2)同温处理的3支试管同步预温5min;(3)各试管依序分别加入对应容量的trypsin酶液(统一加样时间间隔),混匀；(4)同温处理的3支试管置对应恒温水浴中反应10min;(5)各试管依次加入15%三氯醋酸液2ml,混匀以终止反应；(6)非酶促对照：另取一试管，先加入2%血红蛋白液0.5ml及pH8缓冲液2.0ml,再加15%三氯醋酸液2.0ml,混匀静置10min后再加入酶液(7)上述各管反应液室温静置15min后过滤，取滤液待测酶活；(8)酶活测定(考马斯亮蓝法，原则曲线制备略):取试管若干支编号，分别加入对应的样品滤液1.0ml及考马斯亮蓝液4.0ml,混匀，室温静置3min,以非酶促对照管为空白，于波长595nm比色测定。水平的试验成果总和I、Ⅱ和Ⅲ,并分别取其平均值计算对应的极差(各列中最大与最小值之差);比较各原因极差的大小以评估各原因对酶活的温度测量值测量值测量值2.试验数据处理分析：列号试验号123温度/(℃)试验成果123456789I(一水平试验成果总和)II(二水平试验成果总和)Ⅲ(三水平试验成果总和)极差由上述表格各原因极差大小可看出，底物浓度对于酶活力影响最大，另一方面是酶浓度，再次是pH,最终是温度。根据上表数据，以吸光度值(I/3、Ⅱ/3、Ⅲ/3)为纵坐标，原因的水平数为横坐标作图图一底物浓度对酶活力的影响从图一可看出，在一定浓度范围内，伴随底物浓度的增大，酶活力是逐渐减少的，约在底物浓度为0.5mol/ml时酶活力到达最低。图二酶浓度对酶活力的影响从图二可看出，在一定浓度范围内，伴随酶浓度升高，酶活力是逐渐减少的，约在酶浓度为0.55mol/ml时酶活力到达最低。图三温度对酶活力的影响升高的，即酶活力是逐渐升高的，约在温度为50℃时酶活力到达最高。图四pH对酶活力的影响从图四可看出，在一定浓度范围内，伴随pH升高，反应速率是逐渐升高的，即酶活力是逐渐升高的，约在pH为8时酶活力到达最高。1.每加入一种试剂都需要充足混匀。2.应保证酶促反应的温度及反应时间的精确性。1.正交法有何长处?答：通过少数的试验次数找到很好的生产条件，可以在原因变化范围内均衡抽样，使每次试验都具有较强的代表性，保证了全面试验的某些规定，这些试验往往可以很好或更好的到达试验的目的。2.各管温育后为何要加入三氯醋酸液?答：三氯醋酸液可作为蛋白质沉淀剂，使反应停止，进而保证变量的3.非酶促空白对照的作用是什么