DB2102T 0005-2020 海带配子体采苗及育苗技术规程　

DB2102DB2102/T0005—2020海带配子体采苗及育苗技术规程TechnicalSpecificationforGametophyteclonalbreedingofSaccharinajaponica2020-10-29发布2020-11-29实施大连市市场监督管理局发布I本标准按照GB/T1.1—2020给出规则起草。本标准由大连市农业农村局提出并归口。本标准主要起草单位：大连海宝渔业有限公司。本标准主要起草人：冷晓飞、张喜昌、刘剑波、孙颖、许淑芬。本标准发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口管理部门：大连市农业农村局通讯地址：大连市西岗区新开路87号联系电话准起草单位：大连海宝渔业有限公司通讯地址：辽宁省大连市旅顺口区铁山街道柏岚子村1号联系人：刘剑波联系电话：187411667751海带配子体采苗及育苗技术规程本标准规定了海带配子体采苗及育苗的环境与水质、设施、配子体扩增培养、配子体育苗和苗帘出库、运输。本标准适用于大连地区室内海带配子体采苗及育苗。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，标注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY5052无公害食品海水养殖用水水质NY5362无公害食品海水养殖产地环境条件SC/T2024种海带3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。形成配子进行有性生殖世代的藻体(核相n)。4环境与水质育苗场址应选择远离城市污水和工业污水排放口，附近没有大型河流入海，岩石或砂质底质的沿海区域，其它环境条件应符合NY5362的规定，水质应符合NY5052的规定。5.1扩增培养室用于配子体的扩增培养，应为配有制冷设施的保温室，内设培养台架和充气设备，台架层高50cm,5.2育苗室2育苗室设置应为温室结构，以东西走向为宜。屋顶下设置可拉伸的黑色和白色布帘各一层，窗口设深色布帘。育苗池呈平面并联式，单池规格10m×1.4m×0.5m。池内设搅拌机保持循环水流。5.3供排水系统包括泵房、沉淀池、砂滤罐(塔)、储水池、回水池等。5.4制冷系统包括集成式制冷机、制冷槽、砂滤罐、回水槽等。6配子体扩增培养6.1配子体准备6.1.1游孢子采集与配子体培育在海带成熟季节，参照SC/T2024的规定选择种海带。用消毒剪刀剪下3cm×3cm含有孢子囊的藻体，以灭菌纱布蘸消毒海水清洗藻体表面浮泥杂藻，阴干1h~3h后，转移到盛有消毒海水的烧杯中放散游孢子。5min后镜检，视野(×100)中游孢子数量达到10个～20个以上时，取中上层孢子液，接种到多个加有培养液的消毒培养皿中培养20d,获得配子体。培养条件为温度15℃~20℃,光照5001x~10001x,光周期L:D=12h:12h。培养液为灭菌海水中添加NaNO₃-N10mg/L,KH₂PO₄-P2mg/L,F/2培养基16.1.2配子体雌雄分离与保种用微细管分离法分离雌雄配子体，分别移到数个直径18cm盛有培养液的培养皿内培养。培养条件为：温度15℃~20℃,光照5001x~10001x。当配子体生长至布满培养皿底面时，将雌雄配子体用消毒毛刷刷下，转移到50ml透明试管中，在温度4℃~8℃,光照低于501x条件下储藏保种。每月更换一次培养液。培养液为在灭菌海水中添加NaNO₃-N10mg/L,KH₂PO₄-P2mg/L。6.2配子体扩增配子体扩增应在采苗前6个月进行，在适宜的培养条件下，扩增后的配子体生物量每月可翻一倍。采苗时，一个苗帘需求雌雄配子体各0.5g,因此，可根据苗帘数确定配子体需求量和扩增时间。6.3配子体扩增操作将低温储藏的雌、雄配子体分别移入组织捣碎机中，加灭菌冰海水至1000ml,16000r/min切碎30s后，按1g/L~1.5g/L的密度，分别接种于5L三角烧瓶中培养。6.4扩增培养条件应符合以下要求：——扩增培养用海水应为煮沸消毒的砂滤海水；——培养液温度应控制在15℃~20℃;——光照应控制在10001x~15001x,光周期L:D=12h:12h;——培养瓶应24小时连续充气；——新培养液中营养盐浓度应为NaNO₃-N10mg/L,KH₂PO₄-P2mg/L;——更换培养液或接种前，操作人员双手和器具应消毒。36.5扩增培养管理6.5.1更换培养液培养液2周更换一次，更换前应停止充气，使配子体自然沉降于烧瓶底部，将烧瓶中上层的旧培养液倒出。配子体量较多时，用300目筛绢收集倒出的配子体。6.5.2分瓶扩增培养配子体生长至15g/L～20g/L时应分瓶培养。若配子体呈絮状，直接分瓶培养。若配子体呈簇团状，用300目筛绢滤出配子体，转入组织捣碎机，加灭菌冰海水至1000ml,16000r/min切碎30s后，分瓶扩增培养。7配子体育苗7.1采苗前准备7.1.1苗帘的组装应按以下要求进行：——使用聚乙烯材质规格为68cm×34cm长方形框架，上缠直径3.0mm~4.0mm,混纺1根～3根聚乙烯丝的白色维尼纶绳，绳不宜缠得过紧，每帘用绳37m;——苗帘使用前需用喷灯将苗绳上的细毛烤掉，且使用三道聚乙烯绳均匀的固定好苗帘绳；——苗帘4帘一组，水平并列绑缚到两根长1.4m的PVC圆管上。7.1.2育苗池处理每个育苗池2个长池壁内侧距池底20cm处，设置托架，用于托放成组的苗种帘。7.2.1采苗时间可根据海区养殖季节来确定，多在8月中旬。7.2.2配子体切碎用灭菌的300目筛绢网收集扩增培育养的配子体。每次取50g配子体，转移到组织捣碎机，加灭菌冰海水至1000ml,16000r/min切碎120s,经400目筛绢过滤，未滤出的配子体细胞段继续切碎过滤。重复切碎4次后，将捣碎机中的配子体细胞段混合到前三次的滤液中备用。把备好的海带苗种帘逐组摆放到育苗池壁托架上，9℃~11℃低温海水浸泡预冷，池水没过苗种帘6cm~8cm。将雌、雄配子体细胞段按照破碎前湿重的1:1混合，用5℃~6℃低温海水稀释，按照1g/帘的配子体用量，均匀泼洒在苗种帘上方的水面，使配子体细胞段沉降到苗种帘上，静水附着72h,水温9℃~13℃。7.3幼苗培育管理7.3.1水流、水温及换水量4附苗72h后正常流水，流速5cm/s~10cm/s,水温9℃~11℃。每日补新水。幼孢子体规格在0.3mm之前，日补水量30%,规格在0.3mm~10mm时，日补水量60%,规格在10mm以上，日补水量100%。7.3.2光照及营养盐配子体期，光照不高于20001x,营养盐NaNO₃-N3mg/L,KH₂PO₄-P0.6mg/L,F/2培养基0.3mg/L;幼孢子体前期，规格在0.5mm之前，光照不高于35001x,营养盐NaNO₃-N3mg/L,KH₂PO₄-P0.3mg/L,FeCH₅Oz-Fe·5H₂O0.02mg/L;幼孢子体后期，规格在0.5mm之后，光照不高于70001x,营养盐NaNO₃-N附苗20d内不洗涮苗帘；附苗20d后，每3d洗刷苗帘1次。7.3.4病害及防治应符合表1的要求。表1育苗期间主要病害及防治方法病因防治方法长脖子病严重，叶片失去光泽。多为幼苗密度大，光照不足。(1)增加洗刷苗帘的次数；(2)适当提高光照强度；(3)降低水温。绿烂病叶片从尖端开始变绿、变软，逐渐腐烂脱落。多为光照不足。(1)适当提高光照强度；(2)增加补水量，加大流速；(3)降低水温；(4)白尖病细胞脱落掉。多为突然受强光刺