《N-芴甲氧羰基-N(im)-三苯甲基-组氨酸》

ICS

T/XXXX

XXXX团体标准

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N-芴甲氧羰基-N(im)-三苯甲基-组氨酸

Fmoc-His(Trt)-OH

2023-11-1发布2023-11-1实施

发布

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N-芴甲氧羰基-N(im)-三苯甲基-组氨酸范围

1范围

本文件规定了N-芴甲氧羰基-N(im)-三苯甲基-组氨酸的技术要求、试验方法、检验规则、标志、包

装、运输、贮存、有效期。

本文件适用于多肽药物固相合成中使用的N-芴甲氧羰基-N(im)-三苯甲基-组氨酸。

分子式：C40H33N3O4

结构式：

相对分子量：619.71（按2019年国际相对原子质量）

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T191包装储运图示标志

《药品生产质量管理规范》

3术语和定义

本文件无术语和定义。

4技术要求

应符合表1的要求。

1

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表1技术要求

项目要求

外观白色至类白色粉末

溶解性1mmol在2mlDMF中溶解后应澄清透明

鉴别（IR）供试品的红外光吸收图谱应与结构式一致

纯度（HPLC）≥98.0%

H-His-OH(TLC)≤0.1%

H-His(Trt)-OH(TLC)≤0.1%

异构体(Fmoc-D-His(Trt)-OH)（HPLC）≤0.2%

水分（KF)≤1.0%

比旋光度[20/D]+84.0°±8.0°（c=1，CHCl3）

含量（滴定）≥98.0%

5试验方法

本试验所用试剂和水除特殊注明外，均为分析纯试剂和纯化水。

5.1外观

采用目视法测定。

5.2溶解性

5.2.1仪器

50ml具塞比色管。

5.2.2试剂

DMF。

5.2.3操作方法

称取本品约6.2g，置于一个干燥洁净的50ml具塞比色管中，加DMF20ml，超声溶解后应澄清透

明。

5.3鉴别（IR）

5.3.1仪器

2

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红外光谱仪、电子天平。

5.3.2测定方法

取供试品适量，按照红外光谱仪操作规程进行测定，本品的红外光吸收图谱应与结构式一致。

5.4纯度（HPLC）

5.4.1仪器

高效液相色谱仪、电子天平。

5.4.2试剂

乙腈（色谱级）、甲醇（色谱级）、三氟醋酸、高纯水。

5.4.3色谱条件

5.4.3.1色谱条件应符合表2的要求。

表2色谱条件

设定参数设定值

型号：ZORBAXSB-C18（或等效的色谱柱）

色谱柱

规格：4.6mm*25cm，5um

A：0.1%三氟醋酸-水（v/v）

流动相

B：0.1%三氟醋酸-乙腈（v/v）

洗脱方式梯度

流速1.0ml/min

进样体积20μl

柱温20℃（注意：柱温必须20℃，超过20℃产品会分解）

检测波长220nm

运行时间35min

稀释剂乙腈

供试品浓度0.5mg/ml

5.4.3.2梯度洗脱方案应符合表3要求。

3

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表3梯度洗脱方案

时间（min）流动相A（%）流动相B（%）

07030

201090

251090

267030

307030

5.4.3.3保留时间应参考表4。

表4保留时间

品名保留时间（min)相对保留时间备注

乙酸乙酯6.1160.37±0.01溶剂

H-His(Trt)-OH6.6350.40±0.01杂质

Fmoc-His-OH7.5510.45±0.01杂质

Fmoc-β-Ala-OH11.8360.71±0.01杂质

Fmoc-OH12.8650.77±0.01杂质

Fmoc-β-Ala-His(Trt)-OH15.7440.94±0.01杂质

Fmoc-Osu15.8760.95±0.01杂质

Fmoc-His(Trt)-OH16.7531.00主峰

Trt-OH18.3681.10±0.01杂质

Fmoc-His(Trt)-His(Trt)-OH20.6021.23±0.01杂质

5.4.4试验步骤

5.4.4.1供试品溶液的配制

取本品约50mg，精密称定，置于100ml的容量瓶中，用适量稀释剂溶解后定容至刻度，摇匀即可。

5.4.4.2测定

分别进稀释剂空白和供试品溶液各1针，按照5.4.3的色谱条件进行测定。

5.4.5定量方法

以峰面积归一化法计算纯度和杂质。

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5.5H-His-OH(TLC)

5.5.1仪器

硅胶G薄层板、层析缸。

5.5.2试剂

正丁醇、冰醋酸、DMF、茚三酮、2%茚三酮乙醇溶液。

5.5.3分析步骤

5.5.3.1对照品溶液的配制

取H-His-OH约0.01g，精密称定，置于100ml容量瓶中，加适量水溶解后定容至刻度，摇匀，做

为对照品溶液。浓度：0.1mg/ml。

5.5.3.2供试品溶液的配制

取本品约1.0g，精密称定，置于10ml容量瓶中，加适量DMF溶解后定容至刻度，摇匀，做为供

试品溶液。浓度：100mg/ml。

5.5.3.3点板

精密吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用用正丁醇：冰醋酸：水(2：1：1）

（v/v/v)为展开剂，展开，晾干。

5.5.3.4显色

喷以2%茚三酮乙醇溶液，在105℃烘烤加热至斑点出现，立即检视。

5.5.3.5结果判定

对照品溶液应显一个清晰的斑点，供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，

不得更深。

5.6H-His(Trt)-OH(TLC)

5.6.1仪器

硅胶G薄层板、层析缸。

5.6.2试剂

乙酸乙酯、冰醋酸、乙醇、甲醇、DMF、茚三酮、2%茚三酮乙醇溶液。

5.6.3分析步骤

5

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5.6.3.1对照品溶液的配制

取H-His(Trt)-OH约0.01g，精密称定，置于100ml容量瓶中，加适量水溶解后定容至刻度，摇匀，

做为对照品溶液。浓度：0.1mg/ml。

5.6.3.2供试品溶液的配制

取本品约1.0g，精密称定，置于10ml容量瓶中，加适量DMF溶解后定容至刻度，摇匀，做为供

试品溶液。浓度：100mg/ml。

5.6.3.3点板

精密吸取上述2种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用乙酸乙酯：乙醇：冰醋酸：水(8：

1：1：1)（v/v/v/v)为展开剂，展开，晾干。

5.6.3.4显色

喷以2%茚三酮乙醇溶液，在105℃烘烤加热至斑点出现，立即检视。

5.6.3.5结果判定

对照品溶液应显一个清晰的斑点，供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，

不得更深。

5.7异构体(HPLC)

5.7.1仪器

高效液相色谱仪、电子天平。

5.7.2试剂

乙腈（色谱级）、乙醇（色谱级）、甲酸、高纯水。

5.7.3色谱条件

5.7.3.1色谱条件应符合表5的要求。

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表5色谱条件

设定参数设定值

型号：CHIRALPAKQD-AX

色谱柱

规格：4.6mm*150mm，5um

流动相甲醇：醋酸：醋酸铵=980ml：20ml：10g

洗脱方式等度

流速0.5ml/min

进样体积5μl

柱温30℃

检测波长254nm

运行时间20min

稀释剂乙腈

供试品浓度0.5mg/ml

5.7.3.2保留时间应参考下列要求：

——Fmoc-L-His(Trt)-OH：8.9min

——Fmoc-D-His(Trt)-OH：13.6min

5.7.4试验步骤

5.7.4.1对照品溶液的配制

取消旋体（Fmoc-DL-His(Trt)-OH）约50mg，精密称定，置于100ml的容量瓶中，用适量稀释剂溶

解后定容至刻度，摇匀即可。

5.7.4.2供试品溶液的配制

取本品约50mg，精密称定，置于100ml的容量瓶中，用适量稀释剂溶解后定容至刻度，摇匀。

5.7.4.3测定

取稀释剂溶液、供试品溶液和对照品溶液各进1针，按照5.7.3的色谱条件进行测定。

5.7.5定量方法

以峰面积归一化法计算异构体（Fmoc-D-His(Trt)-OH）的含量。

5.8水分（KF)

5.8.1仪器

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分析天平、自动水分测定仪。

5.8.2试剂

卡尔费休氏试剂、无水甲醇。

5.8.3操作方法

取本品约0.2~0.5g，按照水分测定仪操作规程进行测定。

5.9比旋光度

5.9.1仪器

旋光仪、电子天平。

5.9.2试剂

氯仿。

5.9.3操作方法

称取本品约1.0g，精密称定，置100ml容量瓶中，加适量氯仿溶解后稀释至刻度，摇匀。按照旋

光测定仪操作规程进行测定。

5.9.4计算公式

100α

比旋度[20/D]=---------------

lc

式中:

α——为测得的旋光度；

l——为测定管的长度，dm；

c——为100ml溶液中含有被测物质的重量，g/100ml。

5.10含量（滴定）

5.10.1试剂和溶液

应包含下列试剂和溶液：

——中性DMF：取DMF500ml，加入2滴酚酞指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至溶液显

淡红色，保持30s不褪。

——氢氧化钠标准溶液（0.1mol/L)

——酚酞指示剂

5.10.2操作方法

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取本品约1.2g，精密称定，置于一个干燥洁净的150ml锥形瓶中，加入50ml中性DMF，振摇使供

试品溶解后加入2滴酚酞指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至溶液显粉红色，并保持30秒钟

不褪色；记录消耗标准溶液的体积。

5.10.3计算公式

c×V×0.61971

含量%=-------------------------×100

m

式中：

c——为氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；

V——为供试品消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml；

0.61971——为1.00ml氢氧化钠标准溶液（0.1000mol/L]相当于Fmoc-His(Trt)-OH的质量；

m——为供试品的重量，g。

5.10.4允许误差

取两次平行实验结果的平均值为测定结果，两次平行实验结果之间的RSD不得大于0.3%。

6检验规则

6.1检验分类

产品的检验分为出厂检验和型式检验。

6.2组批

以相同材料、相同生产工艺、连续生产或同一班次生产的同一规格的产品为一批，每批产品不应超

过150t。

6.3抽样

6.3.1固体产品按《药品生产质量管理规范》执行。

6.3.2将采样品置于干燥清洁，取固体样品1000g,分别装于2个洁净、干燥的容器瓶中，密封并贴上

标签，注明生产厂名称、产品名称、批量、取样日期等，一份检测使用，一份用于留样。

6.4出厂检验

6.4.1产品应经本公司质检部门按本标准要求进行检验，检验合格后方可出厂。

6.4.2出厂