分析化学分光光度法

分析化学分光光度法110.1物质对光的选择性吸收和光吸收基本定律一、物质对光的选择性吸收

1.光的基本性质光是一种电磁波光具有两象性2电磁波谱范围表32.物质吸收光的特性可见光：400-750nm白光是一种复合光。同一波长的光称为单色光。4物质颜色和吸收颜色的关系物质的颜色是因物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生，物质的颜色与吸收光的颜色互为互补色。互补色光：可以合成白光的两种对应颜色的光称为互补色光。将它们按一定比例混合，可得到白光。5溶液的光吸收曲线最大吸收波长

maxKMnO4溶液的max=525nm

max/nm吸收强度6物质颜色和吸收颜色的关系107光源应该稳定，即要求电源电压保持稳定。光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm)。可见光：400-750nm显色剂和被测离子均有色，可加掩蔽剂掩蔽被测试液为参比。a．光源（钨灯、氢灯）通常用6～12V钨丝灯作可见光区的光源，发出的连续光谱在360—800nm范围内。2）作待测组分的标准曲线，根据A=Kbc=K’c去除背景干扰当透光率为15-65%或用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法称为目视比色法。总浓度c二苯硫腙----Cu2+Pb2+Zn2+Cd2+Hg2+二、分子吸收光谱----可见光吸收光谱分光光度计常用的显示装置是检流计、微安表、数字显示记录仪。光电管是一个真空或充有少量惰性气体的二极管。普通测量法的结果为：

物质对光的吸收引起电子能级的跃迁，在电子能级跃迁的同时，不可避免地伴随分子振动和转动能级的变化。8※二、光吸收的基本定律—朗伯比耳定律入射光为平行单色光ItbdbI定义透射比或透光度为T91.朗伯—比耳定律另：当溶液中存在多种吸光物质，且对同一波长的单色光均有吸收，溶液的总吸光度等于各吸光物质的吸光度之和。102.吸光系数、摩尔吸光系数与桑德尔灵敏度

①

吸光系数a

A=Kbc

A=abcc-g.L-1;b-cm;a称为吸光系数②摩尔吸光系数

A=

bcc-mol.L-1;b-cm;

称为摩尔吸光系数11③桑德尔灵敏度S桑德尔灵敏度S就是规定仪器的检测极限为A=0.001时，单位截面积光程所能检测出来的吸光物质的最低含量，以μg-2表示。S与的关系如下：12即选择被测物质的最大吸收波长的光作为入射光。络合物的离解度及稳定常数当溶液中的络合物MRn浓度最大时，CR/CM的比值为n。它的灵敏度比光电管高200多倍。当透光率为15-65%或改变CR和CM的相对量，制备一系列溶液，测量其吸光度；红敏光电管是在阴极表面涂银和氧化铯，适用波长范围为625—1000nm；二苯硫腙----Cu2+Pb2+Zn2+Cd2+Hg2+结晶紫-----Ti3+S与的关系如下：改变CR和CM的相对量，制备一系列溶液，测量其吸光度；其优点是仪器简单，操作简便，适宜于大批试样的分析；二、分子吸收光谱----可见光吸收光谱有色化合物的组成恒定；示差法T’2=70%例1.已知含Cd2+浓度为140

g.L-1

的溶液，用双硫腙法测定镉，液层厚度为2cm,在

max=520nm处测定的吸光度为0.22，计算摩尔吸光系数

及桑德尔灵敏度S。1314光源单色器样品池检测器读出系统一、分光光度计※10.2.分光光度计及吸收光谱15721分光光度计1617分光光度计的主要部件

a．光源（钨灯、氢灯）通常用6～12V钨丝灯作可见光区的光源，发出的连续光谱在360—800nm范围内。光源应该稳定，即要求电源电压保持稳定。为此，通常在仪器内同时配有电源稳压器。

b．单色器单色器的作用是将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。分为棱镜和光栅。18棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同分光c.单色器入射狭缝准直透镜棱镜聚焦透镜出射狭缝白光红紫λ1λ280060050040019

棱镜是根据光的折射原理而将复合光色散为不同波长的单色光，然后再让所需波长的光通过一个很窄的狭缝照射到吸收池上。它由玻璃或石英制成。玻璃棱镜用于可见光范围，石英棱镜则在紫外和可见光范围均可使用。20相对标准偏差与透光率的关系棱镜是根据光的折射原理而将复合光色散为不同波长的单色光，然后再让所需波长的光通过一个很窄的狭缝照射到吸收池上。提高显色反应的速率；光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm)。两组分共存时分别测定由于c与A成正比，则测量的绝对误差dc与dA也成正比；L-1;b-cm;称为摩尔吸光系数即选择被测物质的最大吸收波长的光作为入射光。红敏光电管是在阴极表面涂银和氧化铯，适用波长范围为625—1000nm；红敏光电管是在阴极表面涂银和氧化铯，适用波长范围为625—1000nm；丁二酮肟----Ni2+有色化合物的组成恒定；5cm，1cm，2cm，3cm和5cm。分光光度计常用的显示装置是检流计、微安表、数字显示记录仪。其主要缺点是准确度不高，标准系列不能久存，需要在测定时临时配制。光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm)。M1M2出射狭缝光屏透镜平面透射光栅光栅衍射示意图原理：利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光.21

光栅是根据光的衍射和干涉原理将复合光色散为不同波长的单色光，然后再让所需波长的光通过狭缝照射到吸收池上。它的分辨率比棱镜大，可用的波长范围也较宽。22c．比色皿也称吸收池。用于盛放试液的容器。它是由无色透明、耐腐蚀、化学性质相同、厚度相等的玻璃制成的，按其厚度分为0.5cm，1cm，2cm，3cm和5cm。在可见光区测量吸光度时使用玻璃吸收池，紫外区则使用石英吸收池。使用比色皿时应注意保持清洁、透明，避免磨损透光面。23d．检测器

检测器的作用是接受从比色皿发出的透射光并转换成电信号进行测量。分为光电管和光电倍增管。光电管是一个真空或充有少量惰性气体的二极管。阴极是金属做成的半圆筒，内侧涂有光敏物质，阳极为一金属丝。光电管依其对光敏感的波长范围不同分为红敏和紫敏两种。红敏光电管是在阴极表面涂银和氧化铯，适用波长范围为625—1000nm；紫敏光电管是阴极表面涂锑和铯，适用波长范围为200—625nm。24

光电倍增管是由光电管改进而成的，管中有若干个称为倍增极的附加电极。因此，可使光激发的电流得以放大，一个光子约产生106～107个电子。它的灵敏度比光电管高200多倍。适用波长范围为160～700nm。光电倍增管在现代的分光光度计中被广泛采用。

e．显示装置显示装置的作用是把放大的信号以吸光度A或透光率T的方式显示或记录下来。分光光度计常用的显示装置是检流计、微安表、数字显示记录仪。25

物质对光的吸收引起电子能级的跃迁，在电子能级跃迁的同时，不可避免地伴随分子振动和转动能级的变化。由电子能级跃迁而产生吸收光谱，位于紫外及可见光部分(200-800nm)，称为紫外光谱和可见光谱。二、分子吸收光谱----可见光吸收光谱26玻璃棱镜用于可见光范围，石英棱镜则在紫外和可见光范围均可使用。3）测出待测组分的吸光度值A，在标准曲线中查出对应的浓度c。棱镜是根据光的折射原理而将复合光色散为不同波长的单色光，然后再让所需波长的光通过一个很窄的狭缝照射到吸收池上。当透光率为15-65%或选择物质最大吸收波长，选择合适的参比溶液，用来调节仪器零点，消除洗手池及溶剂的影响，消除干扰。光是一种电磁波△=—红敏光电管是在阴极表面涂银和氧化铯，适用波长范围为625—1000nm；入射光波长的选择和标准曲线的制作L-1;b-cm;称为摩尔吸光系数吸光系数、摩尔吸光系数与桑德尔灵敏度一、物质对光的选择性吸收b．单色器单色器的作用是将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。物质对光的吸收引起电子能级的跃迁，在电子能级跃迁的同时，不可避免地伴随分子振动和转动能级的变化。磺基水杨酸----Fe3+吸收光谱曲线：物质在不同波长下吸收光的强度大小

A～λ关系最大吸收波长λ

max：光吸收最大处的波长二、分子吸收光谱----可见光吸收光谱27吸收光谱特点：

1.同一物质，浓度不同时，同一波长下吸光度不同，最大吸收波长位置和吸收光谱形状不变。------定性分析

2.同一物质，在一定波长下，随着浓度的增加，吸光度增加，在最大吸收波长下，吸光度最大，且随浓度增大变化最明显。------定量分析

3.吸光度具有加和性，可同时测定多组分。28三、吸光度的测量选择物质最大吸收波长，选择合适的参比溶液，用来调节仪器零点，消除洗手池及溶剂的影响，消除干扰。参比溶液选择原则：试液与显色剂均无色时，可用蒸馏水作参比；显色剂无色，被测试液存在其它有色离子，可用不加显色剂的被测试液为参比；显色剂有色，可不加试样的试剂空白为参比；显色剂和被测离子均有色，可加掩蔽剂掩蔽被测试液为参比。2910.3显色反应及其影响因素一、显色反应1.显色反应的选择a.选择性好，灵敏度高；b.有色化合物的组成恒定；c.有色化合物的性质足够稳定；d.有色化合物与显色剂的颜色差别(对比度)要大于60nm。△=—

maxR

maxMR

30二.显色剂无机显色剂有机显色剂a.磺基水杨酸----Fe3+b.丁二酮肟----Ni2+c.1，10-邻二氮菲----Fe2+d.二苯硫腙----Cu2+Pb2+Zn2+Cd2+Hg2+e.偶氮胂3-----ThZrUf.铬天青S----Al3+g.结晶紫-----Ti3+313.多元络合物

a.三元混配络合物

b.离子缔合物

c.金属离子—络合剂—表面活性剂体系

d.杂多酸32三.影响显色反应的因素1.溶液酸度a.影响显色剂的平衡浓度和颜色b.影响金属离子的存在状态c.影响络合物的组成pHA332.显色剂用量M(被测组分)+R(显色剂)=MR(有色络合物)c试液吸光度与显色剂浓度的关系AAAccab343.显色反应时间

一般从加入显色剂起计算时间。4.显色反应温度5.溶剂有机溶剂降低有色化合物的解离度；提高显色反应的速率；影响有色络合物的溶解度和组成。3510.4吸光光度分析及误差控制一.入射光波长的选择和标准曲线的制作1.波长选择遵守最大吸收原则。即选择被测物质的最大吸收波长的光作为入射光。遵守吸收最大，干扰最小的原则。362、标准曲线的制作1）作吸收光谱曲线，求出最大吸收波长

max，2）作待测组分的标准曲线，根据A=Kbc=K’c3）测出待测组分的吸光度值A，在标准曲线中查出对应的浓度c。c未知物的吸光度未知物的浓度37二、对朗伯—比耳定律的偏离1.非单色光引起的偏离abA2A1A3A4

1

2

3A正偏离负偏离Ac标准曲线非单色光的影响382.介质不均匀性引起的偏离3.由于溶液中的化学反应引起的偏离a.离解b.络合c.缔合394.干扰及其消除方法控制溶液酸度加入掩蔽剂利用氧化还原反应利用校正系数利用参比溶液选择适当的波长增加显色剂用量采用适当的分离方法40吸光度与透射比的关系0201030405060708090100透射比T%吸光度A1.00.700.10.20.30.40.50.6

三、吸光度测量的误差1.541

由于c与A成正比，则测量的绝对误差dc与dA也成正比；而相对误差相等。42透射比在什么范围具有较小的测量误差43相对标准偏差与透光率的关系00.20.40.60.81.01086420.368相对标准偏差/%相对标准偏差与透光率的关系T当透光率为15-65%或吸光度为时，浓度测量的相对标准偏差较小44吸光度为0.434时仪器测量误差最小？45根据朗伯比尔定律控制适当的吸光度范围（）控制溶液浓度选择不同厚度的比色皿46一、目视比色法用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法称为目视比色法。标准系列样品KMnO4溶液10.5其他吸光光度法47

其优点是仪器简单，操作简便，适宜于大批试样的分析；灵敏度高；在复合光—白光下进行测定，故某些显色反应不符合朗伯—比尔定律时，仍可用该法进行测定。其主要缺点是准确度不高，标准系列不能久存，需要在测定时临时配制。48

吸光光度法与目视比色法在原理上并不完全一样。吸光光度法是比较有色溶液对某一波长光的吸收情况，目视比色法则是比较透过光的强度。例如，测定溶液中KMnO4的含量时，吸光光度法测量的是KMnO4溶液对黄绿色光的吸收情况，目视比色法则是比较KMnO4溶液透过红紫色光的强度。49

吸光光度法的特点是：因入射光是纯度较高的单色光，故使偏离朗伯—比尔定律的情况大为减少，标准曲线直线部分的范围更大，分析结果的准确度较高。因可任意选取某种波长的单色光，故利用吸光度的加和性，可同时测定溶液中两种或两种以上的组分。由于入射光的波长范围扩大了，许多无色物质，只要它们在紫外或红外光区域内有吸收峰，都可以用吸光光度法进行测定。50※二、示差分光光度法1.示差法的原理512.示差法的误差1020304050607080901000X一般法T’1=7%示差法T’2=70%52

在示差吸光光度法中测量的是两个溶液的浓度差如果测量误差为x%

普通测量法的结果为：示差测量法的结果为：53三、双波长吸光光度法1.双波长吸光光度法的原理5455c.两组分共存时分别测定选择参比波长和测定波长的条件是：待测组分在两波长处的吸光度之差要足够大，干扰组分在两波长处的吸光度应相等。56四.导数吸光光度法

目的：提高分辨率去除背景干扰

原理：

5710.6吸光光度法的应