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文档简介

AutoMACSpro分选仪

用户手册

第一版

出品人:德国美天旎生物技术有限公司

MiltenyiBiotecGmbH

Friedrich-Ebert-StraBe68

51429BergischGladbach

电话:+4922048306-0

传真:+49220485197

email:macs@miltenyibiotec.de

上海代表处:上海市仙霞路319号远东国际广场A栋2301,200051,

电话/传真62350953

北京办事处:北京市朝阳区东三环北路2号南银大厦916,100027,

电话/传真:010—64107101/64107102

email:miltenyibiotecOD,macs@

内容列表

重要信息3

技术服务11

术语一览表12

1、介绍17

2、技术资料和规格23

3、安装27

4、所需材料36

5、使用AutoMACSpro进行细胞分选39

6、维护55

7、操作规程61

8、使用autoMACSpro分选仪分选后的质量控制68

9、问题解决方案70

MACS是MiltenyiBiotecGmbH(德国美天旎生物技术有限公司)注册商标。

autoMACS是MiltenyiBiotecGmbH(德国美天旎生物技术有限公司)的商标。

Ficoll-Paque是GEHealthcare公司的商标。

Teflon是DuPont公司注册商标。

FACSClean是BectonDickinson公司商标。

BDFalcon是BectonDickinson公司商标。

除非特殊指明,所有MiltenyiBiotec产品和服务都是仅限于研究使用,不能用

于诊断或者治疗。

2

重要信息

autoMACSpro分选仪用于科研,不能用于诊断和治疗。

I、图标

注意:需要参考文件

A警告:如果不按照指南操作,会有危害

擦伤和切割伤

A动机械部分可能有擦伤和切割伤的危险

生物危害

如果使用生物有害材料,有污染的危险

保护性导电终端

这个标志贴在仪器里面,用于警告维修人

开机

O关机

3

II警告和注意事项

autoMACSpro自动分选仪使用最先进的技术。它是一个计算机控制的设备,

根据MACS技术原理对磁性标记的细胞进行自动分选。MACS样本传送带

(minisamplcr)与autoMACSpro相连接,是细胞分选设备的一部分。安装后,

由受过培训的人员根据一般安全规程和这个用户手册的指导进行操作,

autoMACSpro和样本传送带都会安全运行。手册的这部分解释了与仪器操作

相关的可能危险性,为了最大程度降低这些危险,提供了重要的安全信息。仔

细遵守这些指示,就可以保护自己和设备免受可能的危害,营造一个安全的工

作环境。如果没有按照说明操作,可能就起不到保护作用。

注意:请阅读和遵守这个用户手册的所有操作指南,注意仪器上显示的所有警

告。请把这个手册和随机提供的其他安全和操作指南放在所有使用者都能够拿

到的地方,以便将来查阅。

注意:autoMACSpro分选仪只用于室内操作。K要在定级为有害区域的地方

操作,例如充满氧气的环境。

与管理电源、建筑物结构、维修、或者安全的人员联系,获得关于仪器安装的

其他信息。如果对于安全使用仪器有疑问,请联系MiltenyiBiotec提供服务的

人员或者客户服务部。

II.1一般注意事项

为了减少autoMACSpro操作相关的可能危险,请遵守下述注意事项。不遵守

这些注意事项可能会导致火灾、身体伤害、和/或仪器损害。

电休克

警告:电设备可能有电休克的危险。为了降低这种危险,除了前盖以外,不要

打开任何盖子,也不要打开MiltenyiBiotec公司提供的任何附属硬件。所有的

其他盖子和附属硬件都要由授权人员打开。处理液体的时候要小心。有液体溅

洒出来要立刻擦干净。不要让液体进入机器内部。在手动清洁autoMACSpro

的时候,要拔掉电源。

警告:使用打开的或者损坏的autoMACSpro>有液体流进仪器、有物体通过

通风口进入仪器、或者有物体掉进仪器内部的时候,都可能存在危险。

4

强磁场

警告:autoMACSpro分选仪配备有非常强的磁场。任何有磁性信息的物品(例

如信用卡、磁带或者软盘)和任何电设备(如助听器、起搏器、检测和控制设

备、计算机、手表),都要放在距离磁盖至少20cm的地方。因为这些物晶可能

会被磁场影响和损害。

擦伤和切割伤

警告:在设备运行过程中不要打开前盖。在操作中不要阻挡自动臂和附属硬件

的活动。不要把手指放在auloMACSpro及其附属硬件的所有移动部分,避免

擦伤和切割伤,或者损害仪器。在仪器运行的时候,不要触碰注射器泵或者调

整管道。在调整液流系统的任何部分的时候,都要关机。在调整附属硬件如

MACS样本传送带的时候,把试管放在传送带的试管架上或者取下来的时候,

都要停止或者放弃运行中的操作程序。要使用安全措施和设备。

图A:擦伤和切割伤的警告标志

垂直小孔表面发射激光(VSCL)

警告:该设备配备4个VSCL,可以自动探测试管架(1M级)。放射光是看不

见的。不要用光学仪器(如透镜、放大镜、显微镜)直接去看。在100mm距

离内用光学仪器直接去看VSCL孔可能会损伤眼睛。

注意:使用推荐以外的控制、调整或者运行操作,都可能导致有害的放射接触。

A

InvisibleLaserRadiation

Donetviewdirectlywithopticalnstrnrents

(magntflerc)

Class1MnrnrtJdn<r

IEC/EN60825-1:1994M1:1996*A2:2O31

3.3mW850n(n.pulGOduraiion0215ms

FigureB:PositiorofVSCLs

5

II.2安装附属设备、空气循环和冷却

安装附属设备

不要把autoMACSpro放在不稳的桌子、车、架子、三脚架、支架上。因为仪

器可能会掉下来,造成严重的肢体损伤和/或仪器损坏。只能在MiltenyiBioiec

推荐的桌子、车、架子、三脚架或者支架上,或者随仪器一起销售的设备上使

用。不要把autoMACSpro分选仪放在嵌入型设施或者狭窄的空间(如搁板)

内,除非这种设备是特异设计用来容纳autoMACSpro的,要提供适当的通风,

手册中提供设备安装指南。

空气循环

autoMACSpro不要放在放射机、热记录仪、炉子、其它设备(包括扩增仪)

等产热设备旁边。在操作过程中,为了确保充分冷却设备,autoMACSpro分

选仪周围要有充分的空气流通,范围至少15cm。避免将仪器直接暴露于阳光

下。仪器的所有开口都是用于通风的,不要阻塞或者盖上,因为这些通风口可

以确保仪器可靠操作,防止设备过热。不要将异物通过开口塞入仪器。

水和潮湿

不要在湿润或者潮湿的地方使用设备,避免过度潮湿或者压缩,不要让水溅到

仪器上。

II.3电源和周围设施

接地产品

该仪器配备的是三线接地电插头,有第三根针接地。这个插头只适用于接地电

源。这是一个安全性的标志。不要试图把活塞插入没有地线的电源。如果不能

把插头插入电源插口,请联系当地电工或者更换电源插口。

电源

该仪器只应该使用符合产品电等级标志的电源运行。如果你对使用电源的类型

有疑问,请联系当地的MiltenyiBiotec服务供应商或者当地供电公司。

方便性

确定主开关和电线连接器使用方便,并且尽可能地离仪器操作人员近。如果需

要断开电源,要把插头从电源上拔出来。

6

延长电源线

如果需要使用延长电源线,确定电源线符合设备电源等级,并且所有的插入延

长电源的设备电流加起来不要超过延长电源最大电流负荷的80%。

超负荷

不要让电源、电线、转换器超负荷。总的系统负荷不要超过分支电路规定功率

的80%。如果使用电源线,不要超过电源线输入功率的8()%。

外周设施

只有符合UL60950的外周设施才允许连接到标志有“COM”的RS232连接口。

标记有“RS232/AUX”的连接口不能使用。此外,只有原始的autoMACSpro

设备才能够连接到标志有“ExternalCAN"、“CAN1”、“CAN2”的连接口。这

些连接口的电压不能超过有害电压30VRMS.和42.4V峰值或者60VDC。只

有autoMACSpro溶液瓶感受器电线才能够连接到“bottlesensor(溶液瓶感受

器)”连接口。只有MiltenyiBiotec推荐的条形码扫描器才能够连接到

“RS232/BCR”连接口。与“RS232/BCR”连接口相联的外激光设备必须符合

IEC60825-1标准。只能使用长度不超过3米的连接线。

II.4安全操作和服务

安全操作

如果出现下列损害,操作可能就不安全了。立即关闭auloMACSpro分选仪,

拔掉电源,与MiltenyiBiotec服务供应商或者MiltenyiBiotec客户服务部门联

系。严禁使用损坏的仪器或者电源线受损的仪器。

警告:如果出现下列情况,不要再使用。

•机架、电源线、电源延长线、插头损坏。

•液体溅到仪器内部,或者仪器沾水了。

•有物体通过通风口进入autoMACSpro或者掉进仪器内。

•出现冒烟。

•仪器摔落或者损坏。

•按照说明书操作时,仪器没有正常运作。

•出现联系技术支持的警告信息。如果不能安全操作,立即关闭仪器,联系当

地MiltenyiBiotec服务人员。

服务

除非MillenyiBiolec文件中提出,一般不要自己做服务。除了autoMACSpro

前盖,不要打开或者去掉其它盖子和辅助硬件,因为可能有电休克的危险。除

了前盖以外,其它盖子只能由MiltenyiBiotec培训过或者授权的人员打开。仪

器内部成分的服务只能由MiltenyiBiotec培训或者授权的人员进行。

7

清洁

清洁之前把autoMACSpro的电源拔掉。不要使月液体或者喷雾清洁剂,要使

用湿布。

有害材料

如果使用生物有害材料,建议穿戴上保护手套、防护衣、防护镜,避免接触皮

肤和眼睛。为了确保最大安全性,仪器可以在安全柜内操作。如果使用有害材

料或者有害标木溅出,必须仔细地全面清洁系统。详情见6.9章节。

分选柱、管道、其它与生物有害标本接触的耗材,在丢弃之前都要消毒。液体

废物应该高压消毒或者使用针对相应特殊病原的消毒剂消毒,如10%漂白液、

异丙醇、70%乙醇。

丢弃液体要遵守当地要求。

FigureC:Warningsignsforbiohazard

图c:生物有害的警告标志

可燃性

某些清洗程序要用70%乙醇,这种溶剂是可燃的。因此仪器要远离火。

安全检查

在做完服务或者修理后,MiltenyiBiotec的服务人员会进行维修程序所需要的

所有安全检查,确保仪器处于正常运行状态。

8

II.5更换部件、可选项和升级、运输

更换部件

在需要更换部件的时候,确定服务供应商使用的是MiltcnyiBiotcc指定部件。

如果使用了未授权的硬件附件、缓冲液或者配件,可能会引起仪器功能异常,

影响细胞分选效果。只能更换同一类型和级别的俣险丝。记忆卡要放在仪器里。

只能由经过培训的MiltenyiBiotec人员取出。操作中间取出记忆卡会丢失所有

运行程序。

可选项和升级

只能使用MiltcnyiBiotec推荐的可选项和升级。

运输

autoMACSpro分选仪应该放在MiltenyiBiotec特制的包装内小心运输。如果受

到过多震荡或者摔落,可能造成内部损坏。

如果仪器需要运回制造商处进行服务,运输之前要对仪器消毒去除有害物质。

如果对于正确消毒或者运输有疑问,请联系技术支持。

仪器丢弃

如果要丢弃仪器,请联系我们的技术支持。

9

III.限制授权

购买时,MiltenyiBiotec产品根据分公司或者经销商授权范围销售,可能不同

国家不一样。这个手册里面的话都不能直译成额外授权。

autoMACSpro分选仪只能与MACS微珠和其它原装MiltenyiBiotcc耗材联合

使用。如果在仪器上使用了非MiltenyiBiotec生产、经销、授权的试剂或者耗

材,我们不能提供保证,因为仪器的正确操作不能保证。此外,由于使用不正

当的试剂或者耗材产生的错误或者损坏,MiltenyiBiotec将不对此负责。

10

技术服务

德国/奥地利/瑞士中国:

MiltenyiBiotecGmbHMiltenyiBiotec上海代表处

Fricdich-Ebcrt-StraBc68中国上海仙霞路319号远东国际广场

51429BergischGladbachA座2301,200051

电话:+04922048306-830上海电话:+862162351005

传真:+0492204851978008202606

macslec(8)millenyibiotec.de传真:+862162350953

北京电话:+861064107101

传真:+861064107102

macs(5)

miltenyibiotec@

美国/加拿大亚太区(新加坡)

MiltenyiBiotecInc.MiltenyiBiotecAsiaPacificPteLtd.

12740EarhartAvenue7,TemasekBoulevard#16-06

Auburn,CA95602,USASuntecTowerOne

电话:ingapore038987

传真:话:+6562388183

macs@传真:+6562380302

macs(5).sg

澳大利亚:日本:

电话:+610288777400电话:+81356468910

传真:+610298895044传真:+81356468911

macs@.aumacs(S)millenYibiotec.ip

法国:意大利:

电话:+33156981616电话:+390516460411

传真:+33156981617传真:+390516460499

niacs@miltenyibiotec.frmacs@miltenyibiotec.it

比利时、荷兰、卢森堡:

比利时西班牙:

电话:080094016电话:+34915121290

传真:080099626传真:+39915121291

macs(3)miltenvibiotec.nlmacs®miltenyibiotec.es

卢森

英国:

电话

80()24971电话:+441483799800

传真

堡080024984传真:+441483799811

荷兰

.macs@miltenyibiotec.co.uk

电话.

传真.8004020120

.()8004020100

.

11

术语一览表

airfilter(空气滤器):瓶盖开口处的0.2um疏水空气漉器,用于瓶口通气,同时防止污

染物进入瓶内或者从瓶内流出。

airfilterconnector(空气滤器连接器):一种将空气滤器连接到瓶盖开口的路厄锁连接器。

APC:Allophycocyanin,别藻兰蛋白

autoMACSColumn(autoMACS分选柱):专为autoMACS设计的分选柱,可以重复使用

14天,或者在14天内使用100次。

autoMACScolumn1:第一个auloMACS分选柱,在阳性分选和去除程序的时候标记细胞

滞留在该柱上。autoMACS分选柱1位于黑色磁盖左侧的槽内。

autoMACScolumn?:第二个auloMACS分选柱,在双柱,口性分选的时候使用。autoMACS

分选柱2位于黑色磁盖右侧的槽内。

AutoMACSproseparator:自动磁性细胞分选仪,该说明书中也称为“该设备”。

AutoMACSRunningbuffer(缓冲液):细胞分选和洗涤程序时使用的无菌、即用型溶液,

管道连接口是蓝色编码。

autoMACSproWashingSolution(洗涤液):洗涤和特殊冲洗程序时使用的无菌、即用型溶

液,管道连接口是黄色编码。

bouleclosure(瓶盖):带有液体抽吸管的通气的螺口瓶盖。瓶盖上有液流感受器和感受器

电线连接口。

cokimnconnector(柱连接器):与AutoMACS分选柱相连的路厄锁连接器。

columnsubstitute(替代柱):该柱不能用于细胞分选。在长期储存和运输时用来替代

AutoMACS分选柱。

Depletion(去除分选):使用MACS微珠标记所有非靶细胞,进行MACS分选后得到靶

细胞的过程。未标记成分中含有靶细胞。

Deplete(去除分选程序):标准模式的去除分选过程,即分选时使用正常细胞沉淀率。未

标记的细胞被洗脱到标本试管架的B行中。这是一个优化的分选程序,可与MACS去除

分选试剂盒结合使用,或者用于获得最高回收率的未标记细胞。

Depletes(敏感的去除分选程序):敏感模式的去除分选程序,即使用较慢的细胞沉淀率

(Iml/min).未标记的细胞被洗脱到标本试管架的B行中。该程序用于去除分选磁性标记

抗原表达弱的细胞,或者得到高纯度的未标记细胞成分。

12

Depl05:特殊的去除分选程序,细胞沉淀率0.5ml/min。未标记的细胞被洗脱到标本试管

架的B行中。该程序用于强力去除分选磁性标记抗原表达弱的细胞,或者得到最高纯度

的未标记细胞成分。但是选择Depi05可能会降低靶细胞成分的回收率。

Depl025:特殊的去除分选程序,细胞沉淀率0.25ml/min“未标记的细胞被洗脱到标本试

管架的B行中。该程序用于极强地去除分选磁性标记抗原表达弱的细胞,或者得到最高

纯度的未标记细胞成分。但是选择Depl025可能会降低靶细胞成分的回收率。

Ethanol(70%):sleep(关机)、safe(安全)、换柱程序时使用的溶液,用于将污染的可

能性降低到最小。在siorage(储存)时,auloMACSpro液体系统充满70%乙醇。

Ethanolbottle:70%乙醇的容器。瓶盖、液流感受器、管道连接口都是黑色的。

FITC:异硫氟酸盐荧光素。

Fluidcontainer(溶液瓶):装有autoMACSpro分选仪操作所需溶液的1.5L溶液瓶。液流

感受糊通过电解质导电性来监测缓冲液、洗涤液、废液溶液瓶中的液流水平。由于乙醵中

不含有电解质,故装有70%乙静的溶液瓶中的液流水平不能被监测。

Fluidsensor(液流感受器):这种感受器探测电解质的导电性,是废液、缓冲液、洗涤液

溶液瓶盖的一个整合部分。

Fluidsensorcable(液流感受器电线):连接液流感受器和AutoMACSpro的电线。溶液瓶

盖上的感受器电线连接器是有颜色代码的:废液瓶是红色,洗涤液瓶是绿色,缓冲液瓶为

蓝色。

Fractioncollectiontube(成分收集管):用来收集阳性和阴性成分的5m1、15ml、50ml塑

料样本管。可以使用BDFalcon的试管。

Frontdoor(前盖):前盖侧向打开,打开后可以看到AutoMACS分选柱、泵、阀门、洗

涤站、管道。

MACSTechnology(MACS技术):先进行免疫磁性标记,然后在高梯度磁场中分选细胞

或者生物分子的技术。

MACSMicrobeads(MACS微珠):与抗体结合,用来磁性标记细胞或者生物分子的超顺

磁性颗粒。

13

Magnetcover(磁盖):磁铁周围的黑盖,位于液流系统的中央,里面有用来容纳AutoMACS

分选柱的槽。

Memorycard(记忆卡):可以取出的电子记忆卡,用于偌存AutoMACSpro程序。

MemorycardSlot(记忆Q槽):位于AutoMACSpro触摸屏右侧的k槽,记忆k经此插入。

只能由MiltenyiBiotec培训过的人员取出。

Negativefraction(阴性成分):含有未标记细胞的成分,当分选柱位于磁场中时,未标记

细胞经AutoMACS分选柱流下来。

PE(phycoerythrin,藻红蛋白)

Ports(样本口):自动臂带有两个样本口:离机器近的一个用于计算机控制的样本摄取和

流出磁性标记的成分;而离机器远的一个(前面的一个)是未标记成份流出的管口。

Positivefraction(阳性成分):含有MACS微珠标记细胞的分选成分。当分选柱在磁场中

时,这些细胞滞留在分选柱上。当分选柱离开磁场的时候,这些细胞成分被洗脱下来。

Positiveselection(阳性分选):使用MACS微珠标记靶细胞,然后进行MACS分选得到

细胞的过程。标记的靶细胞洗脱到试管架的C排。

Possel(阳性分选程序):使用一个AutoMACS分选柱时的标准模式阳性分选程序。靶细

胞洗脱到试管架的C排。该程序用于阳性分选正常到高频的细胞,以及正常抗原表达的

细胞。

Possel.s(敏感的阳性分选程序):使用一个AinoMACS分选柱的敏感阳性分选程序。祀

细胞洗脱到试管架的C排。该程序用于阳性分选磁性标记抗原表达弱的正常到高频度细

胞,或者达到靶细胞最高回收率。

Posseld:使用两个AutoMACS分选柱的正常模式阳性分选程序。靶细胞洗脱到试管架的

C排,容量只有0.5ml。该程序用于阳性分选罕见细胞,或者得到较高纯度靶细胞。

Posseld2:使用两个AuioMACS分选柱的正常模式特殊阳性分选程序。靶细胞洗脱到试管

架的C排,容量2ml。该程序用于从全血、脐带血、大量细胞样本中阳性分选罕见细胞,

可以得到较高回收率的靶细胞。

Posselds:使用两个AutoMACS分选柱的敏感阳性分选程序。靶细胞洗脱到试管架的C排,

容量2ml。该程序用于分选磁性标记抗原弱表达的罕见细胞(如CD133)。

14

Posselwb:使用两个AutoMACS分选柱的特殊阳性分选程序,用于从全血中分选细胞亚

群。靶细胞洗脱到试管架的C排。

Runningbufferbottle(缓冲液瓶):盛缓冲液的容器。盖子上装有液流感受器。盖子、液

体感受器电线和管道连接器都是蓝色标记。

Safesolution(安全溶液):即用蒸馈水配成的1%(w/v)次氯酸钠溶液,用于运行安全程

序进行AutoMACSpro液流系统的消毒。安全溶液装在50ml试管内被吸入机器液路。安

全程序运行完毕的时候,液流系统内充满缓冲液。

Sloreprogram(储存程序):在长期储存之前,要运行储存程序避免液流系统微生物污染。

在该程序中将AutoMACS分选柱取下来,换上替代柱。储存程序运行完毕的时候,液流

系统内充满70%乙醇。

Syringepump(注射器泵):计算机控制的高精密注射器泵,带有聚四氟乙烯封口活塞,

可以驱动液体流经AutoMACSpro液流系统。

Touchscreen(触摸屏):AuloMACSpro分选仪上方的高敏度TPT液晶彩色触摸屏,通过

屏幕上的菜单,可以操作和监控仪器。

Tubingconnector(管道连接器):带有方形螺丝的塑料螺帽连接器,用于将管道连接到溶

液瓶盖、分选柱、泵或者阀门上。

Tubingsystem(管道系统):聚四氟乙烯制成的永久性管道,液流经此在AutoMACSpro

的液流系统内循环。

Tuberacks(试管架):该仪器带有三个不同的丙烯酸试管架,用于将样本管和成分收集管

放在自动臂口对应的适当位置上。试管架内装有冷却剂,可以在冰箱内预冷试管架,从而

保证在分选过程中细胞处于低温状态。每个标本在试管奖上有四个试管对应位置。位置A

内插装有起始材料的标本管,位置B内插装非标记成分的试管,位置C内插装磁性标记

成分的试管,位置D是附设的。详情参见4.1.2章节。

Washingsolutionbottle(洗涤液瓶):盛autoMACSpro洗涤液的溶液瓶。瓶盖上装有液流

感受器。瓶盖、液体感受器电线和管道连接器都是绿色标记。

Wastecontainer(废液瓶):盛废液的容器。瓶盖上装有一个液体感受器。瓶盖、液体感受

器电线、管道连接器都是红色的。

15

WholeBloodMicroBeads(全血微珠):专门为使用autoMACSpro分选仪直接从全血中分

选出靶细胞而设计的MACS微珠。

Wrench(扳手):用于拧紧和拧松管道连接的黑色扳手。

16

1、介绍

纵览页码

1.1MACS技术17

1.2超顺磁性MACS微珠17

1.3分选柱为基础的高梯度磁性细胞分选18

1.4autoMACSpro分选仪18

1.4.1autoMACSpro分选仪描述19

1.1MACS技术

MACS技术已经成为细胞分选的标准方法,需要使用MACS微珠、MACS分选柱、MACS

分选器(强的永久性磁铁)。第一步,以高度特异性的方式使用与MACS微珠偶联的单克

隆抗体磁性标记细胞表面抗原。在磁性标记后,细胞通过放置在MACS分选器中的MACS

分选柱。未标记细胞流出来,被收集在试管内;磁性标记细胞滞留在分选柱上,将分选柱

移出磁场,磁性标记成分可以被洗脱下来。因此,使用MACS技术,磁性标记和未标记

细胞成分均可有效回收。整个过程快速,操作简单,对细胞作用温和,纯化后的活力和功

能活性都很高的细胞可以直接用于后续实验。

MACS技术除了用于细胞分选,还有许多其它用途,例如纯化蛋白和相互作用分子,分

离功能性病毒(如HIV研究),mRNA分离,一步法cDNA合成和标记。

1.2超顺磁性MACS微珠

MACS微珠是直径大约50nm的超顺磁性颗粒,相当于病毒大小。微珠不会改变流式细胞

仪上细胞的光散射特性,也不会影响光学显微镜下细胞的外观。微珠形成稳定的胶体悬液,

在磁场中不会沉淀或者聚集。MACS微珠由可生物降解的氧化铁基质和多聚糖构成,因

此在分选过程后不必剪切,从而节省了操作时间。一般情况下MACS微珠不会改变标记

细胞的结构、功能或者活化状态,也没有发现对后续试验的干扰作用。分选出来的细胞可

以直接用于后续研究或者细胞培养。

MACS细胞分选试剂是高度特异性的,因此可以标记B细胞、T细胞,以及频度低达O'

的罕见细胞。MACS技术可以分选活的抗原特异性T细胞、CD133+造血干祖细胞、CD34*

造血祖细胞亚群、外周血中的循环肿瘤细胞。MACS微珠是一种非常灵活多样的分选工

具,可以从多种标本中分选多种细胞亚群。目前有数百种分选人类、小鼠、大鼠、非人类

灵长类细胞的试剂,还有可以标记多种其它类型细胞的间标试剂。

17

1.3分选柱为基础的高梯度磁性细胞分选

MACS分选设备由一个特别研发的、强有力的永久性磁帙组成。当把MACS分选柱放到

分选器的磁场中时.,柱基质的小铁磁结构会干扰同源磁场,产生很高的磁性梯度。在紧密

相邻的区域,铁磁结构产生的磁力比常规的几何学中产生的磁力强10000倍,因而即便是

极少量MACS微珠标记的靶细胞也可以滞留在磁场内。此外,分选柱从分选器中移开后,

可以迅速消磁,滞留细胞的回收简便,并且操作温和。这种方法可以从少到数百多到10”

总细胞的标本中分选出活性细胞。MACS微珠(与特异性抗体偶联的纳米级超顺磁性颗

粒)标记细胞大约需要15分钟。细胞过柱分选大约在几分钟之内完成。

1.4AutoMACSpro分选仪

AutoMACSpr。分选仪是一个台式磁性细胞分选仪器,可以以一种很温和的方式,每秒钟

分选IO?以上细胞的速度进行分选,最多可以一次处理4X109总细胞。该仪器可以配合使

用任何一种研究用MACS细胞分选试剂。因此可以根据不同的试验设计选择不同的分选

策略,从大量细胞或者罕见细胞的阳性分选到去除非FI的细胞的未标记细胞分选。十科预

设的分选程序使仪器的应用简单化和标准化。

AutoMACSpr。的特点是自动标本上样,洗脱阴性的、未标记的细胞和阳性的、标记的细

胞。此外还包括系统维护的自动程序。不同的清洗程序用于在新的分选之前冲洗分选柱。

一对分选柱可以使用100次或者使用两周,以最先达到者为准。TFT液晶彩色触摸屏有很

直观的屏幕菜单,仪器操作很简便。标准的MACS溶液瓶直接装在仪器上,即用性MACS

缓冲液最大程度地为客户提供了方便。

与老款的auloMACS分选仪相比,auloMACSPr。分选仪额外提供上样选择。这种新的特

点可以顺序性处理多个样本,无须手动干预。样本传送带适配3种不同的试管架。样本传

送带和试管架都可以被autoMACSPro分选仪自动探测到。

使用autoMACSpro还有其他一些需知。用户手册的目的是解释autoMACSpro分选仪进

行细胞分选的原理,通过提供一步一步的细胞标记、分选和质量控制方法,帮助客户完成

实验。我们在问题解答部分和一般操作指南、特殊分选操作指南部分提供了技巧和注意事

项,目的是帮助客户优化磁性细胞分选。

18

1.4.1AutoMACSpro分选仪描述

AutoMACSpro分选仪的关键组成部分见图1-5。

整合为一体的计算机用于控制细胞处理过程

所有与计算机的交流都是通过一个TFT液晶彩色触摸屏来完成(图1;I),记忆卡用于运

行所有的程序(图2:6),记录操作日志。

带有样木进出口的自动臂用于摄取样木和流出细胞分选成分

自动臂(图1:8和图2:2-4)受计算机控制,是autoMACSpro液流系统的一部分。它

有两个进出口,一个用于摄取样本和释放磁性标记的阳性细胞成分(图2;4),另一个用

于释放未标记的阴性细胞成分(图2;3)o自动臂可以前后和上下运动。在分选过程中和

分选之后,为了避免样本间交叉污染,各个进出口会在autoMACSPr。洗涤站内自动被清

洗。

盖子

前盖(图1:2)向侧方开,打开后可以看到液流系统部分,这些是需要客户周期性维护

的部分,包括auloMACS分选柱、泵注射器、上面的阀。打开底盖(图1;3)可以看到

下面的阀门,轻拉一下可以把底盖取F来。洗涤站的盖子(图1;4)向侧方开,打开后

可以看到洗涤站、蠕动泵、auloMACSpro洗涤站的管道。

溶液瓶和溶液瓶装载篮

仪器两侧各有两个溶液瓶装载篮(图1;5),每个可以装两个瓶子。溶液瓶通过瓶盖上颜色

编码的管道和感受器与autoMACSpro相连接,后者用于检测溶液水平(图1:7)。

MACS样本传送带和试管架

放置细胞标本管和成分收集管的预冷试管架有三种,MACS样本传送带(图4;I)可以

装载其中任意一种。样本传送带上面的板子在水平方向移动,使试管开口与自动臂的液体

进出口在一排。样本传送带的滑槽(图4;2)直接与洗涤站(图4;4)下面的相应卡口

连接。当样本传送带的感受器电线与仪器后面的相应接口连接后,样本传送带就会被自动

检测到。分选程序开始后样本传送带上面的试管架类型可以被试管架探测器自动识别。(图

1:9和图4;7)。在操作过程中,试管架上应该盖上样本传送带的盖子,这种盖子与盖滑

槽相连(图4:3)o按压样本传送带松开按钮(图4:5),可以将样本传送带从autoMACS

pro分选仪上拆下来。

插口、连接口、滑槽

主要插头(图3;2)、液体感受器电线(图3;4)和MACS样本传送带(图3;3)佗插

口位于仪器后面。随着仪器的进一步开发,可能会安装更多的插口。主电源开关位于仪器

右手边(图2;7)。将一些滑槽设计在后面和侧面有利于安全连接管道和感受器电线。

19

图1:autoMACSpro分选仪的正面图

I、触摸屏

2、前盖

3、底盖

4、洗涤站盖

5、溶液瓶装载篮(2)

6、溶液瓶(4)

7、瓶盖(4)

8、自动臂

9、试管架探测器

图2:autoMACSpro分选仪侧面图

1、感受器电线和管道容纳槽

2、自动臂

3、阴性成分流出口(neg)

4、阳性成分流出口(pos)/上样口

5、MACS样本传送带卡槽

6、记忆卡

7、主电源开关

20

图3:autoMACSpro分

选仪后面图

1、感受器电线和管道

卡槽

2、主电源插口

3、感受器电线插口

4、MACS样本传送带

插口

5、型号记录板

6、FCC标记

图4:MACS样本传送

带连接

I、MACS样本传送带

2、样本传送带滑槽

3、样本传送带盖子滑

4、样本传送带滑槽卡

5、MACS样本传送带

拆卸按钮

6、MACS样本传送带

电线插头

7、试管架探测器

图5:MACS样本传送

带和预冷试管架

1、MACS样本传送带

2、MACS样本传送带

的盖子

3、Chill5():50ml试管

4、Chill15:15ml试管

5、Chill5:5ml试管架

21

细胞分选部分

细胞处理部分的核心部件包括一块磁铁(图6;3)和两个autoMACS分选柱(图6;4-5)。

安装上以后,autoMACS分选柱成为密闭液流系统的一部分,最多可以使用14天或者做

100次分选,以先达到者为准,在泵注射器(图6;1)和5个阀门(图6;2)的推动下,

液体在液流系统内流动。

图6;autoMACSpro液流系统

1、泵注射器

2、阀门(5)

3、磁铁

4、autoMACS分选柱I

5、autoMACS分选柱2

6、稀释阀

22

2技术资料和规格

总录页数

2.1autoMACSpro分选仪的技术资料与规格23

2.2MACS样本传送带的技术资料和规格25

2.1autoMACSpro分选仪技术资料和规格

模式autoMACSpro分选仪

输入电压100-240VAC

~50/60HZ

电源消耗200VA

保险丝2XT4A/250

RS232-界面(标记为“COM”)Pins1,4,6,9:NC

Pin2:RXD

Pin3:TXD

Pin5:GND

Pin7:RTS

Pin8:CTS

RS232-界面(标记为“RS232/AUX”)Pins146,7,8,9:NC

未使用Pin2:RXD

Pin3:TXD

Pin5:GND

RS232-界面+DC输出口(标记为Pins4,6:NC

“RS232/BCR”)Pin1:输入

Pin2:RXD

Pin3:TXD

Pin5:GND

Pin7,8:shorted

Pin9:5VDC/0.5A

CAN-Bus+DC-输出口(标记为“外部CAN")Pins1,4,8:NC

Pin2:CAN-L

Pin3,6:GND

Pin5,9:24VDC/2A

Pin7:CAN-H

AC-输出口(标记为“溶液瓶感受器”)Pins1,23,4,5:5VAC/10kQ

Pin6,7,8,14,15:GND

Pin9,10,11,12,13:输入

CAN-Bus(标记为“CAN1”或者“CAN2”)Pins1,4,5,8,9:NC

Pin2:CAN-L

Pin3,6:GND

Pin7:CAN-H

表1:autoMACSpro分选仪的技术资料和插II设置

23

autoMACSpro分选仪被标记为I级保护设备,必须插进一个圆形电源插头,见第二章(警

告和注意事项)。

仪器的主电源插头和插U应该符合下述规格(只有美国即加拿大):UL和KAM,最低类

型SJ,最低18AWG,3导。温度至少要达到60度级。配有圆形插头(NEMA5-15P),125VAC,

10A。另外一面终端是IEC型连接器,125VAC,10A。

颜色蓝/橙

底座605mmX343mm(wxd)

带有样本传送带的底座605mmX455mm(wxd)

高度392.5-454nm(可调节的触摸屏)

重量25kg

输入电压(autoMACS分选仪)100-240VAC,50-60Hz

输入电压(autoMACS样本传送带)24VDC

耗电200VA

程序10种预设程序

保险丝5X20;230VT4A

样本容量(输入)0.2-50ml

样本容量(输出)0.5-50ml

分选柱容量4X109细胞/样本

2X108磁性标记细胞/样本

表2:autoMACSPro分选仪技术资料

操作条件:最高海拔200()米,15-30摄氏度,0-85%湿度。供应电压在正常电压+/-10%波

动。短暂的超电压在主电源上的表现:H类。仪器适合2级污染条件下使用。

AutoMACSPro分选仪不一定要在冷气房中使用,实验室条件符合:UL61010-1,CSAC22.2

NO.61010-1,IEC61010-2-81,89/336/EEC(电磁容量)和73/23/EEC(低电压设备)。

C£C©USLISTED

Compliancewasdemonstratedbyconformancetothefollowingspecificationswhichhavebeenlistedinthe

OfficialJournaloftheEuropeanCommunities:

EMC:EN61326

EN61000-3-2

EN61000-3-3

FCC47CFRCh.1part15,classB

Safety:EN61010-1,EN61010-2-081

24

2.2MACS样本传送带技术资料和规格

模式MACS样本传送带

输入电压24VDC

电压0.8A

有遮盖的D9界面Pin1:NC

Pin2:CAN-

Pin3:GND

Pin4:NC

Pin5:+24V

Pin6:GND

Pin7:CAN+

Pin8:NC

Pin9:+24V

表3:MACS样本传送带的技术资料和插口设置

MACS样本传送带属于H1级保护设备,只能插进标记有“内部CAN+电源”的连接器,

详情见警告和注意事项章节。

没有盖子的大小:182mmX148mmX47mm

有盖子的大小:280mmX153mmX172mm

重量:1.5kg

MACS样本传送带可以适配三种不同的试管架:

试管架类型试管孔最大样本数最大样本体积每管最大细胞

Chill524X5ml6(5ml试管)2.5ml5X108

Chill1515X15ml5(15ml试管)12.5ml2.5X109

5X5ml

Chill506X50ml3(50ml试管)50ml4X109

3X15ml

3X5ml

表4:冷却试管架

操作条件:15-3()摄氏度,0-85%湿度,最大高度2000m

MACS样本传送带不一定要在低温的房间内操作。MACS样本传送带需要在符合UL

61010-1和CSAC22.2和No.61010-1标准的实验室内使用,电磁相容性达到89/336/EEC。

C€

Compliancewasdemonstratedbyconformancetothefollowingspecificationswhichhavebeenlistedinthe

OfficialJournaloftheEuropeanCommunities:

EMC:EN61326

EN61000-3-2

EN61000-3-3

FCC47CFRCh.1part15,classB

Safety:EN61010-1

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