生物学案：课前预习专题课题血红蛋白的提取和分离

学必求其心得，业必贵于专精学必求其心得，业必贵于专精学必求其心得，业必贵于专精课题3血红蛋白的提取和分离课前预习情景导入血红蛋白的功能是运输氧.而亚硝酸盐进入人体，可生成强致癌物亚硝酸胺，也可与人体血液中的血红蛋白结合，使人产生缺氧病症，典型事例便是被列为世界十大环境污染事故之一的1952年美国洛杉矶光化学烟雾事件。该事件致使大批居民发生眼睛红肿、喉痛咳嗽、皮肤潮红等症状，严重者心肺功能衰竭,有400余名65岁以上的老人因此而死亡。此外，植物大面积受损，车祸增多。血红蛋白又是如何提取的呢?本课题将告诉你蛋白提取的秘密。知识预览一、基础知识1.凝胶色谱法（1）概念：凝胶色谱法也称作，是根据分离蛋白质的有效方法。(2）原理：大多数凝胶是由构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时,的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程______，移动速度______；而的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在移动，路程,移动速度。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离.2.缓冲溶液(1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制对溶液______的影响，维持pH基本不变。（2）配制：通常由种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的______________就可以制得的缓冲液.3。电泳（1)概念：带电粒子在的作用下发生的过程。(2）原理：许多重要的生物大分子，如______、______等都具有的基团，在一定pH下，这些基团会带上______或______。在电场的作用下，这些带电分子会向着______________________移动。电泳利用了分离样品中各种分子以及分子本身的______、______不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。答案：1。（1）分配色谱法相对分子质量的大小(2)多糖类化合物相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快2.（1）外界的酸和碱pH（2）1～2使用比例不同pH范围内使用3。（1）电场迁移（2）多肽核酸可解离正电负电与其所带电荷相反的电极带电性质差异大小性状迁移速度二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。1。样品处理血红蛋白由______肽链组成，包括两个和两个.每条肽链环绕一个基团，此基团可携带或。血红蛋白因含有血红素而呈现。（1）红细胞的洗涤①目的：去除。②方法：离心，如500r·min-1离心2min,然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层的红细胞液体倒入______，再加入的生理盐水,缓慢搅拌______,低速短时间离心，如此重复洗涤______，直至上清液中没有______,表明红细胞已洗涤干净。（2）血红蛋白的释放：将洗涤好的红细胞倒入烧杯中,加到原血液的体积，再加40％的，置于上充分搅拌10min。(3)分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合液离心后可观察到试管中溶液分为4层：将液体用_______过滤，除去,于中静置片刻后，分出下层的________液体。（4)透析：取1mL的溶液装入中，将其放入盛有300mL的20mmol·L—1的中（pH=_______），透析12h。2。凝胶色谱操作（1）凝胶色谱柱的制作①柱底部的制作Ⅰ.选择合适的橡皮塞，中间打孔。Ⅱ.在橡皮塞顶部切出锅底状的_______，在0.5mL的头部切下______长的一段,插入橡皮塞孔内，上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。Ⅲ。剪尼龙网小圆片覆盖在。用大小合适的目的尼龙纱将橡皮塞_____________包好,插到玻璃管一端。Ⅳ.色谱柱下端用移液管头部作，连接一细的，并用控制尼龙管的_________与________，另一端放入收集的收集器内。②柱顶部的制作:插入安装了玻璃管的橡皮塞。(2)凝胶色谱柱的装填①填充材料：交联葡聚糖凝胶。②方法:凝胶用充分溶胀后，配成,在与色谱柱下端连接的尼龙管打开的情况下，一次性缓慢倒入.装填完后，立即连接，在高的操作压下,用300mL的20mmol·L—1的磷酸缓冲液充分平衡凝胶12小时，使凝胶装填。(3）样品的加入和洗脱①加样前：打开流出口，使柱内凝胶面上的下降到与平齐，关闭出口。②加样：用_______将1mL的样品加到色谱柱的_______.③加样后：打开,使样品渗入凝胶床内,等完全进入后，关闭下端出口。小心加入缓冲液到__________，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口，进行洗脱，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每收集一管，连续收集。3。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳判断_____的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质的鉴定.答案:样品处理粗分离纯化纯度鉴定1。四条α肽链β肽链亚铁血红素一分子氧一分子二氧化碳红色（1）①杂蛋白②低速短时间黄色血浆暗红色烧杯五倍体积10min三次黄色（2)蒸馏水甲苯磁力搅拌器（3）无色透明脂溶性物质白色血红蛋白红色暗红滤纸脂溶性沉淀层分液漏斗红色透明（4）血红蛋白透析袋磷酸缓冲液702。(1)①Ⅱ凹穴移液管