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文档简介
第52讲基因工程的基本工具和基本操作程序考点3(探究·实践)DNA的粗提取与鉴定和DNA片段的扩增及电泳鉴定一、DNA的粗提取与鉴定1．实验原理酒精2mol/L蓝色0DNA溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L第52讲基因工程的基本工具和基本操作程序2．实验步骤白色丝状物二苯胺不可选用哺乳动物成熟红细胞（无DNA）低温抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出溶解杂质，析出DNA现配现用变蓝色第52讲基因工程的基本工具和基本操作程序PCR扩增DNA片段的实验操作（P84)微量移液器微量离心管使反应液集中在管的底部微量离心管PCR仪微量移液枪离心机第52讲基因工程的基本工具和基本操作程序1．实验基础(1)电泳：DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷_____的电极移动，这个过程就是电泳。相反PCR扩增DNA片段的电泳鉴定第52讲基因工程的基本工具和基本操作程序1．实验基础(2)PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的___________等有关。大小和构象samIsamI分子量越小，迁移速度越快已知长度的DNA样本通过与标准样本比较来确定目的DNA的位置和长度未知长度的DNA样本第52讲基因工程的基本工具和基本操作程序电泳鉴定步骤①根据待分离DNA片段的大小，用___________配制琼脂糖溶液，一般配制质量分数为0.8%～1.2%的琼脂糖溶液。在_______或微波炉内加热至琼脂糖熔化。稍冷却后，加入适量的_________混匀。电泳缓冲液沸水浴核酸染料第52讲基因工程的基本工具和基本操作程序电泳鉴定步骤②将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，以形成加样孔。③待凝胶溶液完全凝固后，小心拔出梳子，取出凝胶放入_______内。电泳槽第52讲基因工程的基本工具和基本操作程序④将电泳缓冲液加入电泳槽中，电泳缓冲液没过凝胶______为宜。⑤将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液(内含指示剂)混合，再用___________将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。留一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物。1mm微量移液器溴酚蓝确定电泳进程，分子量非常小跑的最快，指示剂到边缘时停止电泳⑥接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为1～5V/cm。待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时，停止电泳。⑦取
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