医学教材 艾滋病筛查实验室规范化建设和质量管理

艾滋病筛查实验室规范化建设和质量管理艾滋病检测实验室工作依据《全国艾滋病检测技术规范》2015年修订版《全国艾滋病检测工作管理办法》2006年颁布全国艾滋病检测工作管理办法第一章总则

第二章艾滋病检测实验室的设置第三章艾滋病检测实验室的验收

第四章艾滋病检测工作要求

第五章艾滋病检测工作中的生物安全

第六章实验室质量管理第七章监督管理

第八章附则

附：艾滋病检测实验室基本标准艾滋病实验室规范化建设

开展艾滋病检测工作的实验室要经过技术和条件验收，未经验收或验收不合格的实验室不得开展艾滋病检测工作。

------《全国艾滋病检测工作管理办法》2010年广州市卫生局出台文件，要求二级及以上医疗机构必须建立艾滋病筛查实验室。孕产妇HIV抗体免费筛查医疗机构必须建立艾滋病筛查实验室或检测点。辖区病例超过30例的社区或乡镇医院必须建立艾滋病筛查实验室或检测点。艾滋病检测筛查实验室类别及管理筛查实验室检测点医疗、采供血机构等12个区疾控中心筛查中心实验室实验室建设两个基本条件条件一：人员要求、建筑要求、仪器设备要求条件二：质量管理体系构建艾滋病筛查实验室的基本条件一1．人员条件至少由3名医技人员组成，具有中级卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级或省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。2．建筑条件实验区域和办公区域分置，实验室或检测区域应分为清洁区，半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。3．仪器设备条件配备艾滋病抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪（或发光检测仪）、洗板机、加样器（仪）、普通冰箱、低温冰箱、离心机、温箱或水浴箱、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。生物安全柜实验污染区半污染区清洁区公共走廊应急门实验室分区布局图紧急撤离路线紧急撤离路线清洁实验物品柜水槽污染白大衣挂放处细菌室生化实验区域免疫实验区域生物安全柜的选择：内循环类型（单人、双人）不需要安装排风管。30%外排类型（单人、双人）需要安装排风管。1.人员条件

至少由2名经过艾滋病检测技术培训并获得培训证书的专业人员组成。2.建筑条件

实验区域和办公区域分置，需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简便、快速检测。3.设备条件

需配备快速试验所必须的物品，包括普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用品。

艾滋病检测点的基本条件一生化实验区域实验操作区免疫实验区域细菌室检测点实验室布局门应急门人员进出物品进出要求:1、实验区域与办公区域分开2、实验室内部环境要求：实验室清晰划分生化、临检、细菌操作区；实验仪器摆放位置合理、安全；保持实验室环境整洁，避免杂物随处堆放；不可放置生活物品，如水杯、茶叶、饮用水等等。艾滋病筛查实验室、检测点的基本条件二质量体系构建：质量手册程序文件标准操作规程（SOP）和记录纲领性文件指导性文件实施性文件实验室质量体系文件应覆盖检测前、检测、检测后整个过程，包括质量手册、程序文件、标准操作规程（SOP）和记录。质量管理体系文件内容写我所做，做我所写一、主要工作制度初筛实验室工作制度；安全工作制度；样品、试剂管理制度；

仪器使用维护和校准制度；

检测数据的记录和保存制度；保密制度

；事故处理制度；

疫情报告制度。二、主要技术规范（流程）检测及结果报告操作程序；

质量管理操作程序；实验室安全标准操作程序；样品采集、处理和上送操作程序

；废弃物处理和消毒操作程序

；职业暴露处理流程；母婴艾梅乙项目艾滋病检测流程。三、实验仪器和实验方法SOP文件酶标仪操作细则

；生物安全柜操作细则

；高压灭菌器操作细则；酶联方法检测细则

；发光方法检测细则

；快速方法检测细则。四、主要记录表格ELISA质量控制图／表抗-HIV检测登记表初筛试验原始记录实验差错登记表酶标仪使用和维护记录生物安全柜使用和维护记录高压灭菌器使用和维护记录事故登记表环境温湿度登记表冰温箱登记表人员健康监护记录职业暴露个案登记表废弃物登记表“已统一制定”五、需上墙的规范筛查实验室工作制度安全工作守则或制度初筛试验流程图职业暴露处理流程图操作程序文件（SOP编写格式）封面（1）标题（2）编写、审核、批准人及相应日期（3）修改内容、修改日期、修改批准人正文（1）标题和编号（2）目的、应用范围和方法或程序（3）支持性文件（4）相应记录（5）附录，包括相关的附加文件如记录表格、设备和试剂盒说明书等。SOPSOPSOPSOP

作业指导书目录

编号标题GZCDC/WDAD01艾滋病病毒抗体酶联免疫吸附法（ELISA）检测细则GZCDC/WDAD02艾滋病病毒抗体明胶凝集法（PA）检测细则GZCDC/WDAD03梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附法（ELISA）检测细则GZCDC/WDAD04艾滋病类样品的管理制度GZCDC/WDAD05DENLEY-DRAGON(MK-2)全自动酶标仪操作规程GZCDC/WDAD06艾滋病类样品采集、收检程序GZCDC/WDAD07科室安全防护和内务管理程序GZCDC/WDAD08艾滋病实验室生物安全防护GZCDC/WDAD09HIV职业暴露后预防GZCDC/WDAD10艾滋病病毒抗体酶联免疫吸附法（ELISA）检测细则（国产）GZCDC/WDAD11艾滋病病毒1+2型抗体免疫印迹试验(HIV1+2WesternBlot)GZCDC/WDAD12FormaclassⅡB2生物安全柜操作规程广州市疾病预防控制中心（广州市卫生检验中心）作业指导书

标题：艾滋病病毒操作危害风险评估文件编号：GZCDC/WDAD29版号：第1版编写：审核：批准：

年月日年月日年月日修改页码修改内容修改人批准人生效日期修改记录广州市疾病预防控制中心作业指导书文件编号：GZCDC/WDAD29标题：艾滋病病毒操作危害风险评估版号：第1页共2页1.目的明确艾滋病病毒操作危害风险，避免发生生物安全事故。2.使用范围本操作规程适用于本实验室危害风险评估及事故处理。3.职责操作人员：按照相关危害风险评估及事故处理进行正确实验操作。质量监督员：负责监督实验是否按危害风险评估及事故处理原则进行。科室负责人：负责综合管理。4.危害风险评估按照《实验室生物安全通用要求》（GB19489－2004），艾滋病病毒属于危害等级Ⅳ病原微生物，艾滋病病毒主要通过血液传播、性接触传播、母婴传播三种途径传播，一般不通过气溶胶传播。根据标本中艾滋病病毒含量和操作危险性评估本实验室危害风险。4.1艾滋病血清学检测：艾滋病病毒含量较低、操作危险性较低，在BSL－2级实验室内，在普通操作台或生物安全柜内操作，实验人员做好个人防护。4.2HIV感染者淋巴细胞分离：艾滋病病毒含量较高、操作危险性较高，在BSL－2级实验室内，在生物安全柜内操作，实验人员做好个人防护。4.3HIV感染者CD4T淋巴细胞检测：艾滋病病毒含量较高、操作危险性较高，在BSL－2级实验室内，标本前处理部分须在生物安全柜内操作，实验人员做好个人防护。4.4艾滋病病毒核酸提取：艾滋病病毒含量较高、操作危险性较高，在BSL－2级实验室内，标本前处理部分须在生物安全柜内操作，实验人员做好个人防护。4.5艾滋病病毒分离：艾滋病病毒含量较高、操作危险性较高，在BSL－3级实验室操作，实验人员做好个人防护。4.6根据危害风险评估制定相应实验的操作规程。4.7实验人员严格按相应操作规程进行操作。4.8制定紧急事故处理办法。广州市疾病预防控制中心作业指导书文件编号：GZCDC/WDAD29标题：艾滋病病毒操作危害风险评估版号：第2页共2页5.事故处理5．1建立标本种丢失、破坏或实验室偶发事故应急处理办法，制定相应记录。5．2实验室内备有75%酒精、高效氯等消毒剂。5．3制定事故登记表及事故上报程序。6.支持性文件6.1《科室安全防护和内务管理程序》（文件编号：GZCDC/WDAD07）6.2《中华人民共和国传染病防治法实施办法》6.3《实验室生物安全通用要求》（GB19489－2004）6.4《全国艾滋病检测技术规范》7.附录7．1《艾滋病防制科生物危害评估表》艾滋病防制科生物危害评估表微生物种类

来源

传播途径

致病性

稳定性

预防

治疗

实验项目生物危害评估

GZCDC/WDAD29-01

筛查实验室验收程序申报单位填写《艾滋病检测筛查实验室技术与条件验收申请表》申报单位将区、县级市卫生行政部门已盖章的《艾滋病检测筛查实验室技术与条件验收申请表》报广州市疾病预防控制中心申报单位将《艾滋病检测筛查实验室技术与条件验收申请表》报所在区、县级市卫生行政部门初审，盖章。现场验收，加具意见。上报市卫生行政部门审核市卫生行政部门审核通过后下发批准文件报所在区、县级市疾病预防控制中心现场初评，加具意见。

检测点验收程序申报单位填写《艾滋病检测筛查实验室技术与条件验收申请表》申报单位将区、县级市卫生行政部门已盖章的《艾滋病检测筛查实验室技术与条件验收申请表》报广州市疾病预防控制中心申报单位将《艾滋病检测筛查实验室技术与条件验收申请表》报所在区、县级市卫生行政部门审核，盖章。广州市疾病预防控制中心加具意见。上报市卫生行政部门审核市卫生行政部门审核通过后下发批准文件报所在区、县级市疾病预防控制中心现场评审，加具意见。

质量管理工作执行落实写我所做，做我所写质量管理体系文件宣贯学习

组织所有在岗或新上岗实验人员学习，力求每位科员清楚了解科室质量管理要求，并在工作过程中严格执行。根据实验工作进展，对质量管理体系文件进行修订，修订后重新组织学习质量管理体系文件学习纳入科室常规培训内容。一、人员管理人员岗位相对稳定经培训，并考核合格，持证上岗

上岗证原件或复印件由科室统一保存。每年至少组织1次内部生物安全培训

保留培训记录，包括人员签到、课件、考试卷等。不定期内部业务技术和质量管理知识培训新技术新方法培训建立实验室工作人员培训和健康档案工作记录人员健康监护记录

工作人员上岗前必须进行HIV抗体和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒标志物检测，应接种乙肝疫苗。应每年对工作人员采血检测HIV抗体，血清应长期保留。检测结果记录长期保留。职业暴露个案登记表

如有职业暴露发生须填写。二、实验室设置管理实验区域和办公区域分置；实验区域人员进出通道和样本、废弃物进出通道分置；筛查实验室实验区域规范设置清洁区、半污染区、污染区三区，严格执行三区功能管理，清洁区和半污染区、半污染区和污染区不可混用，不可任意堆放无关物品。三、仪器设备管理每台仪器设备设唯一编号，设仪器设备管理人员；必须经国家法定部门定期（每年至少1次）校准的仪器至少包括：酶标仪/洗板机，加样器，温度计，高压灭菌器。加样器、温湿度计须经计量部门校准；其他仪器，如生物安全柜，离心机等也必须定期（每年1次）校准，可请生产厂家校准；酶标仪与洗板机定期维护、清洗；离心机，生物安全柜，高压灭菌器等，每次使用前检查仪器是否处于正常运转状态，并做好记录，发现故障必须立即停用并及时维修或更换。操作人员接受仪器设备操作技能培训，具备相应的合格证书或能力；每次使用仪器设备均记录使用情况和仪器状态。工作记录酶标仪使用和维护记录

每次使用均要填写。生物安全柜使用和维护记录

每次使用均要填写。高压灭菌器使用和维护记录

每次使用均要填写。冰箱温度登记表

每天记录。四、试剂管理设试剂管理人员；试剂采购记录；按试剂放置温度要求妥善保存；定期检查清理过期试剂，实验前检查试剂有效期；对于室温放置的试剂，要对放置环境温度进行温控。五、样品管理设样品管理人员；所有检测样品必须有对应病例信息记录（纸质或电子版），妥善保存至少10年；按检测项目（抗体、CD4、核酸）保存样品；试剂、样品分冰箱放置；样品处理等高危操作在生物安全柜中进行；有复检要求的样品按保存条件专用冰箱放置；筛查实验室（检测点）不可留存HIV阳性样品。工作记录HIV检测标本登记记录

可纸质版或电子版（如实验室lims系统）记录。六、环境条件管理室温条件（18-25℃）反应试验，如快检试验，过高或过低温度都会直接影响实验反应结果；对室温条件放置试剂（如4-30℃）进行温控；室内湿度过大，试剂、仪器设备、滤光片等容易受潮发生霉变，金属设备易生锈，湿度较大的季节需对环境进行湿度控制；安装空调设备，保证恒温恒湿。工作记录环境温湿度登记记录每天记录。七、检测流程试剂选择：按国家要求，根据不同目的、不同检测对象和人群流行率等选择质量高的试剂。若某种试剂持续出现假阳性，应考虑更换试剂种类；筛查实验室可选择ELISA、发光方法、快检方法等检测方法，检测点选择快检方法。常规流程和临床孕妇流程；按照试剂盒说明书操作，不可随意或擅自变更实验条件，如阴阳对照孔数量、反应时间、反应温度、反应步骤等。ELISA方法不可肉眼判结果。工作记录初筛试验原始记录包括试验初筛原始记录、初筛阳性复核试验原始记录；使用ELISA、发光方法和金标、硒标等任何方法均需试验原始记录；ELISA试验OD结果打印字迹需清晰；用热敏感纸打印，注意字迹掉色问题。ELISA质量控制图／表实验差错登记表事故登记表酶免或发光法抗体检测的室内质量控制室内质控品：为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，质控品定值必须为弱阳性。快速法抗体检测质控室内质控品对照：外部质控品可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳性样品和阴性样品。（《全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版）》P18-22页）室内质控品

室内质控其他方式—“即刻法”质控“即刻法”只能在前20次内使用，超出即可采用L-J质控图方法。

制定质控计划每月分析质控情况每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。八、结果报告管理

分析结果及发出检测报告前，应注意须在试剂盒及外部质控品结果满足要求的前提下，对样品进行分析。试剂盒及外部质控品不合格，样品需要重新检测。筛查阴性－－出具“HIV抗体阴性”报告筛查阳性－－出具“HIV感染待确定”报告注：（1）不能出阳性报告或带有“阳性”字样的报告。（2）不可口头报告结果，必须发放纸质报告。（3）医务人员直接把报告交给病人或病人自行打印报告。1.