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DB22DB22/T3172.3—2020流感病毒HA和NA基因荧光RT-PCR检测第3部分：H3N8亚型马流感病毒Real-timeRT-PCRdetectiononHAandNAgenesofinfluenzavirusPart3：H3N8subtypeequineinfluenzavirus吉林省市场监督管理厅发布I1Ct值：每个反应管内的荧光信号达到的设定的阈值时所RT-PCR：反转录聚合酶链反应（Reversetranscription-pTaq酶：Taq脱氧核糖核酸聚合酶（Thermusaquatic根据H3N8亚型马流感病毒HA基因和NA基因序列设计特异引物和探针，探针结合部位在扩增片段内部。HA基因和NA基因探针分别在5’端标记FAM和CY3荧光素作为报告荧光基团，3’端分别标记MGB和BHQ1发出的荧光信号被淬灭基团所吸收，仪器检测不到荧光信号；而反应进行到延伸阶段时，Taq酶发挥25’–CTCCAAGAGGGGAAGATGCT–3’5’–CTGACCTGGAGGTTCGACTA–3’3将拭子经前侧鼻道伸入鼻腔深部蘸取呼吸道黏液，取出后立即放入盛鼻拭子样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24h；若需长期保存，应放置-70℃冰箱中，但应避在PCR溶液配制区，反应体系配制见表2与表3，每份检测样品的荧光RT-PCR体系为25µL。用旋涡2×RT-PCRBuffer（6.1RTEnzymeMix5U/µL（6.12×RT-PCRBuffer（6.1RTEnzymeMix5U/µL（6.14Ct值均≤30.0，且HA基因

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