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文档简介
DB22DB22/T3172.1—2020流感病毒HA和NA基因荧光RT-PCR检测第1部分：H7N9亚型禽流感病毒Real-timeRT-PCRdetectiononHAandNAgenesofinfluenzavirusPart1：H7N9subtypeavianinfluenzavirus吉林省市场监督管理厅发布I1Ct值：每个反应管内的荧光信号达到的设定的阈值时所RT-PCR：反转录聚合酶链反应（Reversetranscription-pTaq酶：Taq脱氧核糖核酸聚合酶（Thermusaquatic根据H7N9亚型禽流感病毒HA基因和NA基因序列设计特异引物和探针，探针结合部位在扩增片段内部。HA基因和NA基因探针分别在5’端标记发出的荧光信号被淬灭基团所吸收，仪器检测不到荧光信号；而反应进行到延伸阶段时，Taq酶发挥25’–TGCACAGGGAGAGGGAACTG–3’5’–CAAATTGTTGGTTGGTTTTTGC–3’38.1.2除商品化棉拭子、采样袋外，上述采样工具应经121℃±2℃,15min高压灭菌并烘干或经8.2.1.1根据动物的种类，可采集咽喉拭子、泄殖腔拭子（禽）或鼻拭子（猪等其他动样品在震荡器上充分混合后，将拭子中的液体挤出，3000r/min离心5min，吸取上清液转入无用无菌的剪刀和镊子剪取待检样品2.0g于研钵中充分研磨，再加10.0mLPBS（含有青霉素和链4反应体系配制见表2与表3，每份检测样品的荧光RT-PCR体系为25µL。用旋涡振荡器进行混匀，RTEnzymeMix5U/µL（6.1RTEnzymeMix5U/µL（6.15Ct值均≤30.0，且HA基因与NA基因同时扩增出特定的扩增曲线，判为阳性，报告样品中
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