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DB22DB22/T3090—2019绵羊幼畜超排技术规程Juvenileinvitroembryotransfertechnologystandardsregulationsonsheep吉林省市场监督管理厅发布I本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。12将胚胎植入到同期发情的母羊输卵管或子宫内的过程。精子在体外经获能因子诱导，增加精子受精能力，改变膜的通透性，降低顶体膜稳定性，使精子辨识卵子，穿入卵子受精的过程。4技术流程图绵羊幼畜超排技术流程如图1所示。获得的卵母细胞和胚胎在体外进行操作时，应置于37℃恒温台上，所用液体试剂应预热至38.5℃再进行使用。4-8周龄羔羊(供体)4-8周龄羔羊(供体)成年母羊(受体)图1绵羊幼畜超排技术流程图5卵母细胞采集3间隔12h间隔12h栓第14天，手术法暴露供体卵巢，用含有2mL吸卵缓冲每孔30枚～40枚，培养条件为38.5℃,5%CO2，95%空气，饱和湿度，成熟时间为24h。4CO2培养箱中上游孵育获能处理20min～30min，显微镜下观察精子将成熟培养24h的卵丘—卵母细胞复合体移入含0.2%透明质酸酶的Hepes-TCM199溶液中。×105个/mL。受精条件为38.5℃,5%CO2，95%空气，饱和湿度，受精时间20h～24h。件为38.5℃,5%CO2，5%O2，90%N2，饱和湿度。每孔20枚～30枚胚胎，再进行胚胎鉴定和分级，将2～4细胞期胚胎培养24h，转入预先在CO2培养箱中平衡2h以上的四孔细胞培养皿中，每孔培养条件为38.5℃,5%CO2，5%O2，90%N2，饱和湿度。培养48h后间隔6h～8h观察胚胎发育56

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