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DB22DB22/T2988—2019白灵菇和杏鲍菇菌种真实性鉴定ITS-RFLP法VerificationofgenuinenessforPleurotustuoliensisandPleurotuseryngiistrain—ITS-RFLP吉林省市场监督管理厅发布I126.41mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris6.7异戊醇（C5H12O避光、密封、4℃保存。7.5低温离心机：温度参数范围应满足0℃~4℃需求，转数达到15000r/min。7.6恒温水浴锅：温度参数范围应满足28℃~40℃需求。7.7生化培养箱：温度参数范围应满足18℃~28℃需求。7.9冰箱：温度参数范围应满足-20℃~4℃需求。3无菌条件下，将斜面培养基上的菌株接种至100mL装有4将样品放置恒温水浴锅或者恒温培养箱，37℃培养4h～6h。9.4.1.1将煮沸的的琼脂糖凝胶液冷却至65℃后缓慢倒入干燥的制胶容器内，使其均匀覆盖在容器底层，室温冷却至凝固，琼脂糖溶液浓度为1.0%(用于DNA浓度和PCR检测)和1.8%(用于酶切检测)。9.4.1.2凝固后的胶板置于电泳槽内，缓慢、垂直拔出梳子，添加1×TAE电泳缓冲液，直至没过胶在点样板上混合样品与上样缓冲液按比例5:1混匀，每加完一个样品均更换移液器的枪头。电压在3V/cm～5V/cm之间，样品由负极向正极移动，当溴酚蓝移动至胶板2/3处，停止电泳。将凝胶转入玻璃或塑料容器中，加入0.5ug/mL核酸染料(EB、goldview等)中染色15min~重复处理提取样品重复处理提取样品重复处理三重复处理一重复处理15白灵菇和杏鲍菇的DNA片段大小在均在660bp±20bp。重复处理一重复处理二重复处理一重复处理二重复处理三杏鲍菇白灵菇杏鲍菇白灵菇杏鲍菇白灵菇杏鲍菇白灵菇10.3.1白灵菇酶切后的两条片段大小分别为为510bp和150bp。10.3.2杏鲍菇酶切后的两条片段大小分别为430bp和230bp。酶切处理酶切处理杏鲍菇酶切处理白灵菇酶切处理杏鲍菇酶切处理白灵菇酶切处理杏鲍菇酶切处理白灵菇酶切处理杏鲍菇酶切处理白灵菇重复实验一重复实验二重复实验三11鉴定bp,杏鲍菇酶切后两条片段大小分别为430bp±10bp、230±106）

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