DB22T 2915-2018 供血犬血液检测技术要求　　

DB22DB22/T2915—2018供血犬血液检测技术要求Technicalrequestforcanineblooddetection吉林省市场监督管理厅发布I14.1.1供血犬血液应为210mOsmol/kg〜4023A.2.1仪器A.3.1样品测定前，取校正用缓冲液对仪器进行校正,温度(℃)0545取基准氯化钠试剂，于500℃~650℃干燥40min～50min，置干燥器（硅胶）中放冷至室温。6灵敏度0.125EU/支，2℃~8℃保存，有效期为12个月。待检样品检测，选用鲎试剂灵敏度λ0.125EU，稀释80倍检测。取原液先10倍稀释7胶不能保持完整，并从管壁滑脱者为阴性（-），样品管均为阴性判定为符合规定，如两管均为阳性判8D.3.2分别精密量取供试品溶液与标准蛋白质溶液各0.5mL置玻璃试管中，分别加双缩脲试剂4.0D.3.3按照紫外-可见分光光度法，在波长540nm处检测吸光度。另精密量取水0.5mL，自“加双B...........................9外源病毒检验E.2.2.4将冻存管用75%酒精棉擦拭2遍，用吸管在无菌下取出细胞，缓慢加入含细胞培养基心管内，在1000r/min速度下离心5培养瓶中，置37℃二氧化碳培养箱中静置培养，观察生长情况。培养3d～5d，细胞长成致密单层去PBS，加入适量消化液（一般情况下，T25培养瓶不超过0.5mL～0.8mL；T75培养瓶1.0mL～同时同步接种F81细胞T25细胞瓶1瓶，每瓶接种1mL,另分别设1瓶E.2.3.2最后一次继代（至少为第3代）时，每种培养物传出3组培养物：3组T25培养瓶E.2.3.3如果样品传代培养期间，任何一代培养细胞出现细胞病变，而正常细胞未出现病变E.2.4致细胞病变检查和红细胞吸附检查取样品进行最后一次继代时，取上一代经2次冻融的培养物吸附接种已长成70%-80%细胞单层MDCK、Vero和NA细胞各3瓶，同步接种F81细胞3瓶，每瓶接种1mL，吸附接种的细胞于37℃吸附1种F81细胞板（检测CPV）1块，每块板接种对照毒株、RABV阳性对照毒株，CPV阳性对照毒株稀释为100TCID50～30细胞板、MDCK细胞板、NA细胞培养板，同步接种F81细胞板，每块板接种2孔，每孔200μL，并设正常将E.2.4接种的一组细胞培养瓶弃去培养液，用PBS洗涤3遍，加入2mL姬姆萨染色液，室温下染色15min～30min，然后用PBS洗涤3次，置显微镜检查单层细胞，观察包涵体、巨细胞他由病毒引起的细胞病变（CPE）是否存在，当正常对照细胞未出现CPE，而被检样品出现CPE，则判为将E.2.4接种的另二组细胞培养瓶弃去培养液，用无钙镁离子的PBS洗涤3遍，向每一细胞培养瓶中加入2mL0.2%的豚鼠红细胞和0.5%猪红细胞的等量混合物，将培养瓶同时在2℃~8℃和20℃~25℃放置30min，然后用无钙镁离子的PBS洗涤3次，用30倍～60倍显微镜检将E.2.5接种的细胞培养板弃去培养液，用无钙镁离子PBS洗涤2次～3次。每次洗涤时，每孔加每孔加入2mL冰预冷的80%丙酮溶液，2℃~8℃冰箱固定30mi