DB22T 2876-2018 黑木耳液体菌种生产技术规程　　

备案号：60805-2018DB22DB22/T2876—2018黑木耳液体菌种生产技术规程Productiontechnicalregulationsforliquidspawnonblackwoodear2018-07-30发布2018-08-30实施吉林省质量技术监督局发布I1发酵罐实消fullfermentercultivat2液体菌种菌丝生长旺盛，达到生长对数期时结束培养，在无菌条件下从发酵罐通过传送管在0.154.2.2液体发酵车间要求：动力系统完备需：水、电（停电需配备发电机）、蒸汽、空气四大a)地面应能防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，有适当的排水坡度（1.0%～1.5%）和良好3菌种配制室、灭菌室、无菌接种室、恒温培养室、摇瓶培养室、发酵配料室、发酵罐培养室、化验室和菌种室规模要配套，布局合理，要有调温设施。化验室和菌种室要有相应的实验检测设备和制种用的灭菌设施和常规用具。发酵罐、空气压缩机、空气过滤器、高压蒸汽灭菌锅、净化工作台、恒温回旋式振荡器。应有备用玻璃三角瓶、接种用火环圈、试管、量杯、容量瓶、玻璃漏斗、定量定性滤纸、精密pH试纸等生物实验室常规用品。4.4培养原料应符合NY/T528要求，生物制剂和天然材料的水不溶性固体物料应过40目筛。经省级以上农作物品种审定委员会审(认)定或登记(备案)的品种应符合NY/T528的规定，其他应符合DB22/T2638的规定5生产工艺5.1工艺流程按照图1的工艺流程进行黑木耳液体菌种生产。图1液体菌种生产工艺流程45.2.2.2灭菌121℃,灭菌30min。装容量较大时，灭菌时间要适当延长。灭菌完毕后，应自然降压，不应强制5.2.2.3冷却将灭菌后的液体培养基放入接种室内超净工作台中进行冷却，冷却至25℃~20℃。5.2.2.4接种5.2.2.5培养接种后，恒温回旋式振荡器培养6天～7天，振荡频率每分钟150转～180转，培养温度以25℃~28℃为宜。5.2.2.5.3检查5.2.3.1.2对罐体内、外和全部阀门用流水进行冲洗，达到无死角、内壁无任何培养料残余55.2.3.1.3在发酵罐中加入适量的水），排气管接入下水管道，将无菌空气接入发酵罐底部的进气口，通入无菌空气应符合NY/T528要求。准确掌握加水量，用水符合GB5749要求5.2.3.3.1将原材料分别用水溶解，倒入或用泵抽入发酵罐中。加水定容至所需体积，培养发酵罐内蒸汽压力达到0.105Mpa～0.125Mpa，温度达到121℃~124℃,保持时间1小时。水出口排出。待温度降至100℃,罐压降至0.08Mpa，开始通入无菌空气，打开上排气阀，持续通入冷5.2.3.6接种b)调节排气阀，使罐内压力降至0.0c)培养温度24℃~28℃。a)母种应以每个批号3支～5支，于4℃~6℃下贮存，贮存至经转接的栽培袋正常发菌；6注：样品放置2℃~4℃保存7天。5.2.4.2检验母种、摇瓶液体种和发酵罐液体菌种生产的每个环节应按照DB22/T2638要求，填写详实的录，由具体操作人员现场记录填写，定期由主管领导审核，签字后归档78菌液粘度高，静置基本不分层；菌丝体稠密，菌球悬浮力好、在菌液中分可见黑木耳菌种液体培养中特有的菌丝形态，大量分枝菌丝分布，>0.89黑木耳菌丝在固体培养基上正常生长，