仪器分析培训教学课件：紫外可见分光光度计

一、光度分析的几种方法二、光电比色法三.分光光度计的组成四、分光光度计的类型紫外可见分光光度计第二单元：紫外可见分光光度计学习要求了解光度分析方法的发展了解和掌握分光光度计的主要部件了解和掌握分光光度计的主要类型及其分析特点方便、灵敏，准确度差。1.目视比色法c4c3c2c1c1c2c3c4一、光度分析的几种方法二、光电比色法(colorimetry)

通过滤光片得一束窄范围的光(>10nm)光电比色计结构示意图灵敏度和准确度较差三.分光光度计的组成美国PE紫外--可见分光光度计光源单色器样品室检测器显示分光光度计的基本部件光源碘钨灯氘灯单色器测量池参比池样品池光电倍增管数据处理和仪器控制光路示意图三.分光光度计的组成三、分光光度计的主要部件1.光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度,稳定。可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm)紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm)三、分光光度计的主要部件2.单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。棱镜:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm光栅:波长范围宽,色散均匀,分辨性能好,使用方便三、分光光度计的主要部件棱镜:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm三、分光光度计的结构之——单色器3.1棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同入射狭缝准直透镜棱镜聚焦透镜出射狭缝白光红紫λ1λ2800600500400棱镜单色器的缺点是色散率随波长变化，得到的光谱呈非均匀排列，而且传递光的效率较低。3.2光栅在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm)。原理：利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光.M1M2出射狭缝光屏透镜平面透射光栅光栅衍射示意图三、分光光度计的结构之——单色器三、分光光度计的主要部件光栅:由大量等宽等间距的平行狭缝构成的光学器件称为光栅（grating）。精制的光栅，在1cm宽度内刻有几千条乃至上万条刻痕。透射光栅，反射光栅。三、分光光度计的主要部件光栅:波长范围宽,色散均匀,分辨性能好,使用方便。3.2光栅光栅单色器在整个光学光谱区具有良好的几乎相同的色散能力。因此，现代紫外-可见分光光度计上多采用光栅单色器。四.吸收池(cell）用于盛待测及参比溶液。玻璃（Glass）—能吸收UV光，仅适用于可见光区石英（

Quartz）—不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）玻璃吸收池360nm2.25mm石英吸收池200nm2.5mm吸收池的形状可拆卸圆形测量池两面透光圆形测量池两面透光1cm长方形测量池两面透光气体测量池两面透光微量测量池两面透光流动测量池两面透光吸收池的尺寸4.吸收池(cell）使用注意事项：1、选2、拿3、擦4、装5、洗6、存5.检测器(detector)检测光信号，即将光信号转变为电信号。现在使用的分光光度计大多采用光电管和光电倍增信号管以及光电二极管阵列作为检测器光电池，光电管，光电倍增管，光二极管阵列5、检测器之——硒光电池硒光电池5、检测器之——光电倍增管1个光电子可产生106～107个电子5、检测器之——CCD光二极管阵列检测器光源碘钨灯氘灯单色器测量池CCD检测器数据处理和仪器控制5.指示器（显示器）

低档仪器：刻度显示或液晶面板显示中高档仪器：数字显示，自动扫描记录；可由计算机反控四、分光光度计的类型chopper四、分光光度计的类型——单光束优点：简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度。缺点：一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。单光束分光光度计应用在非扫描型（单光束）的紫外-可见分光光度计上，人工绘制吸光物质的UV-VIS吸收光谱过程中需要注意的事项：

改变波长都要用参比溶液调节T=100%；固定光谱通带与仪器参数；选择合适的溶液浓度与参比。四、分光光度计的类型——双光束四、分光光度计的类型——双光束2.双光束优点：自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。缺点：仪器复杂，价格较高。

将不同波长的两束单色光(λ1、λ2)快束交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交替信号。无需参比池。△

=1～2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。光源检测器单色器单色器切光器吸收池双波长分光光度计示意图四、分光光度计的类型——双波长双波长分光光度计

优点：可以测定较高浓度的样品溶液；利用吸光度差值定量可以扣除背景吸收（样品池、浑浊等）；比切光器的频率慢的光源、检测器的波动不影响；导数吸收光谱曲线（

=1～2nm)。优点：⑴利用吸光度差值定量：△A＝（ελ1－ελ2）cb；⑵消除干扰和吸收池不匹配引起的误差（即可以扣除背景吸收）；

⑶可以测定较高浓度的样品溶液。四、分光光度计的类型——双波长双波长分紫外-可见吸收光谱紫外可见分光光度计（单光束）上海精科UV759紫外-可见分光光度计