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备案号：56318-2017DB22DB22/T2705—2017牛瑟氏泰勒虫病检测方法LAMP法LAMPassayfordetectionofbovineTheileriasergenti2017-09-30发布2017-11-30实施吉林省质量技术监督局发布I1GB/T6682—2008分析实验室环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplificationLAMP)：针对靶基因的6个区域设计4种特异性引物，利用一种链置换DNA聚合酶在62℃~65℃等温条件下，保温30min～60min，使得链5.1.1BstDNAPoly2GTGCATATCCGAACTGAACCCACTCATGCCAAGCAGGAAACCAAGGATCTCGATGCGGCATCAGCAGCAAAAA标准阳性样品为牛瑟氏泰勒虫基因组DNA提取物，DNA浓度为10mg～30mg。制备方法见附录B。标3BstDNAPolymeraseBu取样品反应物2µL加入到1.5%琼脂凝胶板的样品孔中，并设置标准阳性、阴性和标准分子量DNAMarker。将凝胶在150V恒定电压下电泳30min后，置于凝胶成像仪观察。阳性样品应呈现特征性梯状45表A.60.5mol/L乙二铵四乙酸（EDTA.6.2TAE缓冲液（50×)的配制见表A.7。表A.7TAE缓冲液（50×)配制0.5mol/LpH6.8三羟甲基氨基甲67(规范性附录)2图C.1LAMP扩增后加入SYBRGreenI紫外

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