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ICS65.020B16DB43DB43/T1371—2017RegulationforIntegratedPreventionandControlTechnologyoftheCucurbitVegetableVirusDiseases2017-12-31发布2018-03-31实施湖南省质量技术监督局发布I Ⅱ 2规范性引用文件 本标准按照GB/T1.1—2009给出请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准起草单位：湖南省植物保护研究所、广东省农业科学院植物瓜类蔬菜病毒病综合防控技术规程凡是确定不会出现预期结果的处理，称为阴性对照。瓜类蔬菜病毒病的危害症状主要有叶片花叶、黄化、泡状突起、皱缩、畸形等症状药的使用角度开展综合防控，实现蔬菜生产安全、蔬菜生态环境安全和蔬菜产（粉虱、蓟马）时开始用药，选用高效、低毒、低残留、环境友好的药剂进行防治。农药使用应符合附录A(资料性附录)瓜类蔬菜病毒病症状主要为叶片花叶、黄化、泡状突起、皱缩、畸形等，见图A1。畸形畸形图A1瓜类蔬菜感染病毒病的主要症状5附录B(规范性附录)病毒生物学检测和分子生物学检测一、病毒生物学检测1.病毒摩擦接种方法将少许感染病毒的病叶放于消毒的研钵中，加入适量接种缓冲液，充分研磨；将金刚砂(400～500目)均匀撒到待接种的叶片表面，左手食指和中指托住叶片，用无菌棉签蘸取少许研磨的病叶汁液，在待接种叶片上沿一个方向轻轻均匀地涂擦，一般从叶基到叶尖方向；用清水冲洗接过种的叶片，将植株放于网温室，在营养钵内插上标签，注明处理及接种时间。用缓冲液接种植株作为阴性对照。2.病毒分离与纯化采用上述摩擦接种方法，将汁液中病毒接种于枯斑寄主上；待寄主表现单斑后，将单个枯斑切下，用接种缓冲液研磨，再接种枯斑寄主；第二次出现单斑后，再次切取单个枯斑，接种于枯斑寄主；第三次出现枯斑，切取单个枯斑，接种于系统寄主，出现系统症状，取叶片进行检测(图B1、B3)。3.病毒的保存取纯化后的发病叶片，采用冷冻干燥的方法处理，写明标签，置于-80℃冰箱中长期保存。将经分离纯化的病毒分离物分别接种到寄主植物敏感品种上，测定其致病力的强弱(图B2、B4)。图B1ZYMW分离物接种枯斑寄主和系统寄主的症状a.苋色藜上枯斑；b.普通烟上系统花叶bb二、病毒分子生物学检测 9条带有无和条带大小。4.检测结果判定4.1ZYMV检测结果判定RT-PCR扩增产物大小为430bp和511bp。阳性对照有目标条带而阴性对照和空白对照无目标条带时，检测结果有效。扩增片段与预期目标条带大小一致，则结果判定为阳性，无目标条带则为阴性，见性对照，CK-:阴性对照，8:空白对照)4.2CMW检测结果判定RT-PCR扩增产物大小为773bp。阳性对照有目标条带而阴性对照和空白对照无目标条带时，检测结果有效。待测样品在结果有效。待测样品在773bp出现核酸条带，表明样品为阳性，无目标条带则为阴性，见图B6。(

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