DB22T 396-2014 保健用品毒理学评价程序与检验方法　　

备案号：42265-2014DB22DB22/T396—2014保健用品毒理学评价程序与检验方法Toxicologyassessmentprocedureandtestmethodsforhealthproduct2014-05-04发布2014-06-01实施吉林省质量技术监督局发布I 1 1 1 1 2 2 7 ——补充了经皮保健用品毒性试验，皮肤急性毒性试验中的皮肤——增加了经皮保健用品毒性试验，皮肤急性毒——调整了经皮保健用品毒性试验，皮肤刺激性试验中实验1）；2.2.1保健用品的材料为常用原料，使用期限不超过二周者，仅进行第一阶22.2.3保健用品的受试人群与妊娠或儿童有关，影响胎儿及子代发育，在长2.2.4保健用品在致突变试验中，有一项或一项以上试验为阳性者，需作第1十 2 十 3——十4—十—5—十十6 十7 十8±——9—±—±±±±±±±±±±±±±±±—±—a)动物：选用两种性别的成年小鼠和/或大鼠b)受试物溶液的配制:常用蒸馏水或食用植物油为溶剂。若受试物是体积较小不溶于水或油的粉末剂，可用0.5%羧甲基纤维素钠、10%阿拉伯胶、植物油制成混悬液。矿化容器类3d)环境条件：环境温度控制在20℃~25℃之间。一般分为5个～6个剂量组。每组动物数10只，根据所选LD50计算方法而定。各正式试验时将动物称重，并随机分组，然后用特制的灌胃针估计受试物毒性较低，一次给受试物容积太大，也可一日内多次给予（每次间隔4h～6h，24h内不超过3次，尽可能达到最大剂量，合并作为一次剂量计算）。给予受试物后，密切观察动物反应情况，每天观察一次，连续观察7d，逐日记录鼻眼标签标识以及判定受试物经消化道摄入后引起动物死亡可能性大小的依据。引用LD50值时一定验动物的种属、性别、染毒途径、观察期限等，评价应包括动物接触受试物与动物异常表现(包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致死效应与其它毒性作用)的发生率和严重程度之间的关系。根据43.1.2.2.3最大耐受量确定后，应推算出相当于临床给受试物日剂量的倍5用5周龄～6周龄大鼠。试验开始时，体重差异应在20%范围内，雌雄各半，按性别、体重随机区间分再加1%左右羧甲基纤维素钠或10%左右阿拉伯胶助悬、植物油制成混悬液。临用前摇匀，避免混设三个或三个以上的剂量组。高剂量组应有少数动物出现严重毒性反克/体重计算）。如因受试物体积过大，达不到这一要求时，最低不能低于临床剂量的30倍，且必量一般为1ml～2ml/100gBW，各剂量组间应采用等容量a)死亡：死亡是动物最明显的表现，但须注意鉴别确系受试物中毒死亡，而与自然死亡或死亡区别开来。发现死亡动物应立即进行尸检，寻找死亡原因。最好在动物中毒临终前活杀6d)毒性症状：给受试物后应每天注意有无毒性症状出现，专人负责观察和记录。物第一周内，毒性症状出现最多，必须严密观察，及时发现。如一般行为，运动功能，呼吸的频率和性质，有无腹泻、腹痛、便血、眼、耳、鼻、口腔、外阴部有无异常或分泌物。群养时应将发现中毒反应的动物及时取出单笼饲养，重点观察。毒性症状有些只在给受试物后的一定阶段出现，以后逐渐自行消失或减轻；有些则随时间而进行性发展。因此必须列表逐日或逐周（逐个动物）记录，以便看出症状发生、发展的过程，以及各种症状出现的先后次b)脏器称重和计算脏器系数：心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、辜丸、卵巢和可能的靶器官称重并计算脏器系数。急性毒性试验未发现明显毒性者，至少应测k=m1........................................(2)2m2c)病理组织学检查：取材后立即放进10%福尔马林中固定。并根据所含中药的性、味、先作高剂量组和对照组的组织学检查，其他剂量组可取材10%福尔马林中固定保存，在高剂7的剂量-反应(效应)关系。评价受试物最小观察到有害作用剂量和最大未观察到有害作用剂量及毒性作一般分3个剂量组，其中一个为赋形剂对照组，两个给受试物组，高剂量组剂量为低剂量的2倍。为了提高给受试物剂量可提高浓度或增加24h内给受试物次数。大鼠或豚鼠每组10只，家兔每组48级和标签标识以及判定受试物经皮肤吸收后引起动物死亡可能性大小的依据。引用LD50值实验动物的种属、性别、染毒途径、观察期限等，评价应包括动物接触受试物与动物异常表现(包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致死效应与其它毒性作用)的发生率和严重程度之间的关系。毒>2180选用成年健康家兔、豚鼠或大鼠。家兔体重2kg左右；豚鼠300g左右，大鼠200g～300g。受试9的剂量-反应(效应)关系。评价受试物最小观察到有害作用剂量和最大未观察到有害作用剂量及毒性作和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。实验动物至少要用4只。实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间。实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。选用常受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5可以不再进行皮肤刺激试验。此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50小于200mg/kgb)取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层硫酸纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。另一侧皮肤作对照。采用封闭试敷用时间为4h。可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。对用后冲洗的产物可能引起严重刺激或腐蚀作用，可采取分段试验，将三个涂有受试物的纱布块同时或先后01234012348a)试验前将实验动物背部脊柱两侧皮肤的毛剪掉，去毛范围各为3cm×3cm，涂抹面积2.5b)取受试物约0.5mL(g)涂抹在一侧皮肤上，当受试物物无刺激性溶剂配制时，另一侧涂溶剂K∑K∑kn2。取受试物0.2mL(或g)，涂在动物左侧背部脱毛区皮肤上，以二层纱布和一层硫酸纸覆于末次给受试物致敏后14d～28d，将受试物约0.2mL（或g）涂于豚鼠背部右侧脱毛区3.2.4.3.2如激发接触所得结果仍不能确定，应于第一次激发后一周，给予第0123401237弱轻中强在受试者上背部或前臂屈侧皮肤上，再用玻璃纸覆盖，用无刺012312345b)受试物为强酸或强碱（pH≤2或≥11.5或已证实对皮肤有腐蚀性或强a)轻轻拉开家兔一侧眼睛的下眼睑，将受上、下眼睑被动闭合1s，以防止受试物丢失。另一侧眼睛不处理作自身对照。滴入受试物除了对角膜、虹膜、结膜进行观察外，其它损害效应均应当记录并报告。在每次检查中均应012340皱褶明显加深，充血、肿胀、角膜周围有轻度充血，12012301234健康的大鼠、豚鼠或家兔，大鼠体重180g级和标签标识以及判定受试物经鼻吸收后引起动物死亡可能性大小的依据。引用LD50值时一验动物的种属、性别、染毒途径、观察期限等，评价应包括动物接触受试物与动物异常表现(包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致死效应与其它毒性作用)的发生率和严重程度之间的关系。毒性>2180健康的大鼠、豚鼠或家兔，大鼠体重180g将受试物直接滴鼻或喷雾吸入，受试物同黏膜至少接触4h。然后于24h处死动物，取出鼻黏膜观0123012310只，家兔每组4只。如果受试物毒性较小，不能求得LD50时，可求明实验动物的种属、性别、染毒途径、观察期限等，评价应包括动物接触受试物与动物异常表现(包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致死效应与其它毒性作用)的发生率和严重程度之间的关系。按3.3.4.2.1方法进行。受试物与阴道黏在受试物作用4h后，再经1h处死，取出阴道组织，观察有无充血、肿胀等现象；若有变化，必要一般每日一次，每次接触4h，连续一周。0123>2.5，为重度刺激性。一般采用5mg/皿，最低剂量一般为1μg/皿或0.1μg/皿。但如应用诱导剂混合物处理后的哺乳动物肝脏微粒体酶（S9进行体外代谢活化试验，即在加测试之前，应测定受试物对培养细胞ID50，以受试物作用24h为准。对于无细胞毒性的化至少设三个剂量组，并设阴性和阳性对照组。高剂量组以1/2LD50为准。如无），阴性对照组的倍量或经统计有显著性意义，并有剂量反应关系常用试验动物为大鼠、小鼠和家兔。传统致畸应选用健康性成熟(90d初次试验可设一阳性对照组。每组至少12只孕鼠。常用阳性对照物有敌枯双（0.5mg/kg～1.0mg/kg体重）、五氯酚钠阿斯匹林(30mg/kg体重)及维组，并称重和编号，在受孕的第7d～16d，每天经口给予受试物（按0.5m1/100g～1.0m1/100g体重计）。受孕的0d、7d、12d、16d、20d称体重，并计算给受试物的量。动物交配期室温在20℃~大鼠于妊娠20d，小鼠第18d，兔第29d处死。大鼠用2g/l00mL硫喷妥钠1mL/只～1.5mLa)经口从舌与两口角向枕部横切(切面1),可观察大脑、间脑、正脑、舌及颚裂；b)在眼前面作垂直纵切(切面2)、可见鼻部；c)从头部垂直通过眼球中央作纵切(切面3),沿头部最大横位处穿过脑作切面(切面4),可观d)沿小颚水平通过颈部作横(切面5),可观察气管、食管和延脑或脊髓，以后自腹中线剪开i=k..................mi——致畸指数；k=m1........................................(5)2m2试验无中毒死亡，其体重增长不低于对照组10%，机体一般状况和实验室检查变化不至少应采用两种动物进行试验，常用小鼠和大鼠。各试验组和对照组，每组大鼠24个月以上，小鼠18个月以上。此时对照组和低剂量组一般还应有50%以上动物存在，次。应尽量减少肿瘤以外的死亡率。各组的存活率不少于50%。试验期末解剖或怀疑有血液疾患时，最3.4.4.1.3根据保健用品的不同性质，斑贴试验时可选用保健用品原物、或将012343.4.4.4.3去除受试物斑试器后间隔30min30例受试者中出现2级皮肤不良反应的人数多于2例（除臭产品斑贴试验2级皮肤不良反LD50计算方法预备试验：通常采用10mg/kg，100mg/kg和1000mg/kg的剂量，各剂量使用2只～3只动物。根据正式试验:按预试所确定大概的致死剂量范围选用一组适宜的剂量系列，根据四个剂量当直线划定后，由图直线上50%死亡率(机率单位为5)的相应剂量对数值先求LD50的标准差S按式（A.1s=x2y2x2、x1相当于y2=6、y1=4（概率单位）时相应的X轴上的对数剂量。估计logLD50的标准误按式(A.2)2s2log