微生物学检验技术 课件汇 胡生梅 项目21 弧菌科鉴定-33-5综合技能训练：尿液标本微生物检验

项目二十一弧菌科鉴定学习目标1．掌握霍乱弧菌和副溶血性弧菌的主要生物学特性、微生物学检验方法及鉴定依据。2．熟悉气单胞菌属和邻单胞菌属主要生物学特性、微生物学检验方法及鉴定依据。3．了解常见弧菌科细菌的临床意义。4．具有正确采集和处理常见弧菌科细菌检验标本及进行相关检测的能力。5．能正确选择试验项目对常见弧菌科细菌进行检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。项目二十一弧菌科鉴定项目二十一弧菌科鉴定一、弧菌属的鉴定项目二十一弧菌科鉴定一、弧菌属鉴定概述1.弧菌属（Vibrio）弧菌属是一类需氧或兼性厌氧，分解葡萄糖产酸不产气，氧化酶阳性，赖氨酸脱羧酶阳性，精氨酸水解酶阴性，嗜碱，耐盐，不耐酸的细菌。本属细菌种类多，分布广泛，尤其是水中最为常见。2.形状短小，约0.5×(1～5)微米，因弯曲如弧而得名。分散排列，偶尔互相连接成S状或螺旋状。革兰氏染色阴性，菌体一端有单鞭毛，运动活泼。无芽胞，无荚膜。3.与人类密切相关的有霍乱弧菌、副溶血性弧菌弧菌，感染后主要症状为腹泻。1.生物学性状（1）形态与染色：革兰氏阴性菌，菌体短小呈逗点状，有单鞭毛、菌毛，部分有荚膜。一、弧菌属鉴定（一）霍乱弧菌1.生物学性状（2）培养特性：营养要求不高，在PH8.8～9.0的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。在碱性平板上菌落直径为2mm,圆形，光滑，透明。在TCBS琼脂平板菌落呈黄色，分解蔗糖。一、弧菌属鉴定（一）霍乱弧菌1.生物学性状（3）生化反应：硝酸盐还原试验阳性，靛基质试验阳性，当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中，产生靛基质与亚硝酸盐，在浓硫酸存在时，生成红色，称为霍乱红反应，埃尔托型弧菌与古典型霍乱弧菌生化反应有所不同。前者Vp阳性而后者为阴性。前者能产生强烈的溶血素，溶解羊红细胞，在血平板上生长的菌落周围出现明显的透明溶血环，古典型霍乱弧菌则不溶解羊红细胞。个别埃尔托型弧菌菌株亦不溶血。一、弧菌属鉴定（一）霍乱弧菌1.生物学性状（4）抗原构造

根据弧菌O抗原不同，分成Ⅵ个血清群，第Ⅰ群包括霍乱弧菌的两个生物型。第Ⅰ群A、B、C三种抗原成份可将霍乱弧菌分为三个血清型：含AC者为原型（又称稻叶型），含AB者为异型（又称小川型），A、B、C均有者称中间型（彦岛型）菌体（O）抗原。一、弧菌属鉴定（一）霍乱弧菌1.生物学性状（5）抵抗力：霍乱弧菌古典生物型对外环境抵抗力较弱，埃尔托生物型抵抗力较强，在河水、井水、海水中可存活1～3周，在鲜鱼，贝壳类食物上存活1～2周。霍乱弧菌对热，干燥，日光，化学消毒剂和酸均很敏感，耐低温，耐碱。湿热55℃，15分钟，100℃，1～2分钟，水中加0.5ppm氯15分钟可被杀死。0.1%高锰酸钾浸泡蔬菜、水果可达到消毒目的。在正常胃酸中仅生存4分钟。一、弧菌属鉴定（一）霍乱弧菌2.临床意义（1）主要致病物质：

霍乱弧菌产生肠毒素，是一种剧烈的致泄毒素。该毒素作用于肠壁促使肠黏膜细胞极度分泌从而使水和盐过量排出，导致严重脱水虚脱；进而引起代谢性酸中毒和急性肾功能衰竭。（2）所致疾病：引起烈性肠道传染病霍乱，为我国的甲类法定传染病。在自然情况下，人类是霍乱弧菌的唯一易感者。主要表现为剧烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高。（3）药物敏感性：霍乱的治疗主要为及时补充液体和电解质及应用抗菌药物如链霉素、氯霉素、强力霉素、复方SMZ-TMP等。一、弧菌属鉴定（一）霍乱弧菌3.微生物学检验（1）标本采集：标本以粪便为主，在发病早期，尽可能在患者用药之前采集标本。用无菌棉拭子采集自然排出的新鲜粪便，亦可采集呕吐物或采集肛门拭子。采集的标本应及时接种于碱性蛋白胨水增菌，不能及时接种者，应将标本置于文腊二氏保存液或卡-布运送培养基中由专人运送。一、弧菌属鉴定（一）霍乱弧菌3.微生物学检验（2）检验程序一、弧菌属鉴定（一）霍乱弧菌粪便、肛拭子、呕吐物增菌（碱性蛋白胨水）直接涂片、革兰染色镜检鱼群状排列的革兰阴性弧菌可初步报告初步鉴定：菌落特征、细菌形态学检查、动力及制动试验最后鉴定：生化反应、血清学鉴定分离培养（碱性琼脂平板、TCBS琼脂平板）报告3.微生物学检验

（一）霍乱弧菌一、弧菌属鉴定（3）检验方法1）直接涂片染色镜检：粪便、肛拭子、呕吐物标本直接涂片革兰染色，油镜下观察到鱼群状排列的革兰阴性弧菌可初步报告。2）制动试验：取急性期患者的水样粪便或碱性胨水增菌培养6小时左右的表层生长物，先作暗视野显微镜检，观察动力。如有穿梭样运动物时，则加入O1群多价血清一滴，若是O1群霍乱弧菌，由于抗原抗体作用，则凝集成块，弧菌运动即停止。如加O1群血清后，不能制止运动，应再用O139血清重作试验。3）分离培养：常用TCBS琼脂平板或碱性琼脂平板。选择可疑或典型菌落，进行鉴定。3.微生物学检验

（一）霍乱弧菌一、弧菌属鉴定（3）检验方法4）血清学鉴定：霍乱弧菌的鉴定按下述3个步骤进行：

确定血清群：取可疑菌落与O1群多价血清做凝集实验，确定属于O1群还是非O1群霍乱弧菌；

确定血清型：若为O1群霍乱弧菌，再取可疑菌落分别与O1群单价分型血清A、B、C做凝集实验，确定血清型；

生物分型：根据生物学特性，做生化试验进行生物分型，确定是古典生物型还是埃尔托生物型。近年来国外亦有应用霍乱毒素基因的DNA探针，作菌落杂交，可迅速鉴定出产毒O1群霍乱弧菌。霍乱弧菌与其他弧菌的鉴别（一）霍乱弧菌一、弧菌属鉴定试验Ⅰ群Ⅱ群Ⅲ群Ⅳ群Ⅴ群Ⅵ群霍乱弧菌拟态弧菌梅氏弧菌辛辛那弧菌豪氏弧菌美人鱼弧菌河流弧菌弗尼斯弧菌溶藻弧菌副溶血弧菌创伤弧菌哈氏弧菌0%NaCl++----------1%NaCl++++++++++++蔗糖+-++--+++--/++/-氧化酶++-+++++++++硝酸盐++-+++++++++甘露醇++++--++++-/++/-葡萄糖产气-------+----精氨酸--+/---+++----赖氨酸++-/++/--+/---++++V-P+/--+--+--+--+/-8%NaCl---/++/---+/-+/-++/---鸟氨酸++------+/-++/--肌醇---/++--------1.生物学特性（1）形态与染色：革兰染色阴性菌，为多形态杆菌或稍弯曲弧菌，无芽孢，无荚膜，有单鞭毛，运动活泼。（2）培养特性：兼性厌氧菌，此菌营养要求不高。温度30℃—37℃，含盐2.5%—3%(若盐浓度低于0.5%则不生长），pH值为8.0—8.5时生长良好。对酸较敏感，当pH6以下即不能生长。在普通食醋中1一3min即死亡。在固体培养基上菌落常隆起，圆形，表面光滑，湿润。在3%一3．5%含盐水中繁殖迅速，每8～9min为一周期。（二）副溶血性弧菌一、弧菌属鉴定1.生物学特性（3）生化反应：该菌在3.5%NaCl培养基中生长良好，盐浓度低于0.5%和高于10%则不生长。从粪便中分离的致病菌株能使人或兔红细胞发生溶血，对马红细胞不容血，称为神奈川现象。（4）抵抗力：该菌嗜盐畏酸，在普通食醋中1一3min即死亡。对高温抵抗力小，50℃20min；65℃5min或80℃1min即可被杀死。对常用消毒剂抵抗力很弱，可被低浓度的酚和煤酚皂溶液杀灭。（二）副溶血性弧菌一、弧菌属鉴定2.临床意义

副溶血性弧菌主要引起的食物中毒，一般表现为发病急，潜伏期2-24h，一般为10h发病。主要的症状为腹痛，优势腹痛在脐部附近剧烈。腹痛是本病的特点，多为阵发性绞痛，并有腹泻、恶心、呕吐、畏寒发热，大便似水样。便中混有黏液或脓血，部分病人有里急后重，重症患者因脱水，使皮肤干燥及血压下降造成休克。少数病人可出现意识不清、痉挛、面色苍白或发绀等现象，若抢救不及时，呈虚脱状态，可导致死亡。一、弧菌属鉴定（二）副溶血性弧菌3.微生物学检验一、弧菌属鉴定（二）副溶血性弧菌（1）标本采集：采集患者粪便、肛门拭子和可疑食物。采集的标本应及送检，如不能及时送检，应将标本置于3.5%NaCl蛋白胨水或卡-布运送培养基中送检。3.微生物学检验一、弧菌属鉴定（二）副溶血性弧菌（2）检验方法1）增菌培养：取0.5-1ml标本于3.5%NaCl蛋白胨水中，350C培养，数小时后若出现明显浑浊，即可分离培养。2）分离培养：将标本或增菌培养物接种于TCBS琼脂平板或3.5%NaCl琼脂平板，350C培养18-24小时观察结果。副溶血性弧菌在TCBS琼脂平板上因不发酵蔗糖，形成1-2mm、绿色或蓝绿色、不透明的菌落。3.微生物学检验一、弧菌属鉴定（二）副溶血性弧菌（2）检验方法3）生化鉴定：根据形态、染色性等特点，以及在选择培养基上的菌落特征，取可疑菌落做进一步生化鉴定。一、弧菌属鉴定（二）副溶血性弧菌生化试验结果生化试验结果氧化酶+0%NaCl中生长-吲哚+1%NaCl中生长+甲基红+7%NaCl中生长+V-P试验-10%NaCl中生长-枸橼酸盐利用-葡萄糖-精氨酸双水解-乳糖-鸟氨酸+麦芽糖+赖氨酸+蔗糖-硫化氢-甘露醇+尿素酶+/-阿拉伯糖+/-副溶血性弧菌的生化特征二、气单胞菌属的鉴定项目二十一弧菌科鉴定二、气单胞菌属的鉴定1.形态与染色

革兰阴性直杆菌，大小为（1～4）μm×（0.1～1）/μm，菌体两端钝圆，单极鞭毛，运动极为活泼（除杀鲑气单胞菌外）。无芽胞，有窄的荚膜。（一）生物学特性二、气单胞菌属的鉴定2.培养特性

需氧或兼性厌氧菌，对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在血琼脂上形成灰白、光滑、湿润、凸起直径约2mm的菌落，多数菌株有β溶血环，3～5天后菌落呈暗绿色；在肠道选择培养基上，大多数菌株形成乳糖不发酵菌落；在TCBS琼脂上生长不良；液体培养基中呈均匀混浊。（一）生物学特性3.生化反应

发酵葡萄糖产酸，氧化酶和触酶试验阳性，在65g/LNaCl中不生长。（一）生物学特性二、气单胞菌属的鉴定试验嗜水气单胞菌豚鼠气单胞菌维隆气单胞菌简达气单胞菌舒伯特气单胞菌易损气单胞菌温和型维隆型吲哚+++++-+葡萄糖产气+-++++-精氨酸+++-+++鸟氨酸---+---V-P+-+++--阿拉伯糖++-----乳糖-+-----蔗糖++++---氨苄青霉素RRRRRRS气单胞菌属主要生化反应

人类接触该菌后可引起感染，是人类急性腹泻的重要病原菌。特别是5岁以下的儿童易发生气单胞菌性腹泻，大多数病例属于这一年龄段。除了胃肠炎，气单胞菌还与伤口感染、骨髓炎、腹膜炎、败血症、呼吸道感染等有关。临床常见的有嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌和维隆气单胞菌等。患严重气单胞菌性腹泻的患者可给予特殊抗菌治疗。嗜水气单胞菌对头孢噻吩、氨苄西林、羧苄西林耐药，四环素敏感性不定，对广谱头孢菌素大多敏感。嗜水气单胞和温和气单胞菌通常对复方磺胺异恶唑、氟喹诺酮、氨基糖苷类抗生素敏感。（二）临床意义二、气单胞菌属的鉴定1.标本采集

根据不同疾病采集粪便或肛拭子、血液、脓汁、脑脊液、尿液等标本。2.检验方法（1）直接涂片：标本涂片革兰染色镜检，呈革兰阴性短杆菌。悬滴标本观察动力，运动活泼。（2）分离培养：血液标本经肉浸液或胰化酪蛋白大豆肉汤内增菌后转种血琼脂平板或含氨苄青霉素血平板；脓汁、分泌物等直接接种血琼脂平板；粪便标本接种肠道选择培养基。另一部分标本可接种于PBS，置4℃冷增菌后，于1、3、5、7、17天移种分离平板上。标本接种后，经37℃培养24～48h后可观察菌落特征。（三）微生物学检验二、气单胞菌属的鉴定2.检验方法（3）生化鉴定：（三）微生物学检验二、气单胞菌属的鉴定1）初步鉴定：挑可疑菌落移种KIA、MIU做初步生化反应，KIA：K/A、产气+/-、H2S-，MIU：++-；氧化酶阳性。2）最后鉴定：氧化酶试验阳性可与肠杆菌科细菌鉴别，发酵葡萄糖可与非发酵菌鉴别。三、邻单胞菌属的鉴定项目二十一弧菌科鉴定1.形态与染色

革兰阴性直杆菌，大小为0.8～1.0μm×3.0μm，菌体两端钝圆，成双或短链状排列，有1-5根极端鞭毛，运动活泼。在血琼脂平板上生长良好，35℃培养18-24小时后可形成灰色平滑、不透明、大小1.5mm的菌落，无溶血现象。可在麦康凯平板上生长，呈不发酵乳糖或迟缓发酵型。在HE琼脂平板上不发酵乳糖菌落呈蓝绿色。三、邻单胞菌属的鉴定（一）生物学特性HE平板大便培养物，其中绿色菌落为类志贺邻单胞菌，橙色为正常菌群三、邻单胞菌属的鉴定（二）临床意义

类志贺邻单胞菌导致肠胃炎，好发于夏季，通常为散发流行，临床症状可以是短时间的水样泻或痢疾样腹泻，患者有进食生水或海产品史。肠道外感染在机体抵抗力下降的人群中发生，可引起菌血症、脑膜炎。邻单胞菌脑膜炎常见于助产分娩的婴儿，病死率高达70%。另外，类志贺邻单胞菌偶尔也可以在伤口分泌液、胆汁、关节液、淋巴结中分离到。三、邻单胞菌属的鉴定（三）微生物学检验

根据不同疾病采集可疑标本送检，尽可能在抗生素使用前采集。标本接种于血琼脂平板上，35℃培养18-24小时，取可疑菌落涂片革兰染色。该菌氧化酶和触酶试验阳性，吲哚试验阳性，硝酸盐还原试验阳性，发酵葡萄糖和其他碳水化合物产酸不产气，赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶试验均为阳性，O/129敏感，肌醇阳性。注意与气单胞菌属鉴别。三、邻单胞菌属的鉴定（三）微生物学检验试验嗜水气单胞菌豚鼠气单胞菌维隆气单胞菌简达气单胞菌舒伯特气单胞菌易损气单胞菌类志贺邻单胞菌温和型维隆型吲哚+++++-++葡萄糖产气+-++++--精氨酸+++-++++鸟氨酸---+---+V-P+-+++---阿拉伯糖++------乳糖-+------蔗糖++++----氨苄青霉素RRRRRRSS类志贺邻单胞菌与气单胞菌属的鉴别弧菌科细菌为革兰氏染色阴性、发酵葡萄糖、氧化酶阳性的无芽孢杆菌。细胞杆状、直或弯曲成弧状；菌体刚硬；通常以极生鞭毛运动，发酵糖类产酸，但不一定产气，对营养要求不高。通常见于淡水或海水中，也可见于人或鱼的肠道中；有的种对鱼或人致病。弧菌属，革兰氏阴性单极毛无芽孢杆菌，吲哚酚氧化酶阳性，发酵葡萄糖产酸不产气，分解甘露醇产酸,赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶阳性。气单胞菌属，广泛分布于淡水中。杀鲑气单胞菌和嗜水气单胞菌都是鱼类致病菌，后者还是爬行类致病菌。邻单胞菌属，仅包括类志贺邻单胞菌1种,是引起人类肠道失调的病原菌，也是水（尤其是淡水）中的自然栖居菌，偶见于正常人的粪便中。项目二十一弧菌科鉴定项目小结项目二十一弧菌科鉴定项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定学习目标1.掌握弯曲菌属和幽门螺杆菌的微生物学检验方法及鉴定依据。2.熟悉弯曲菌属和幽门螺杆菌的主要生物学特性。3.了解常见弯曲菌属和幽门螺杆菌的临床意义。4.具有正确采集和处理常见弯曲菌属和幽门螺杆菌检验标本及进行相关检测的能力。5.能正确选择试验项目对弯曲菌属和幽门螺杆菌进行检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定思维导图弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定微生物学检验生物学特性临床意义弯曲菌属的鉴定幽门螺杆菌的鉴定微生物学检验生物学特性临床意义一、弯曲菌属的鉴定项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定一、弯曲菌属的鉴定概述

弯曲菌属（Campylobacter）细菌是1973年由Veron等建议确定的一个与人类疾病有关的新菌属，属于螺菌科。该菌属细菌是一类微需氧，菌体弯曲呈逗点状、S形或螺旋状，不分解糖类、氧化酶阳性，有动力的革兰氏阴性菌。包括5个种和5个亚种。对人类致病的主要是空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌胎儿亚种。空肠弯曲菌是人类腹泻最常见的病原菌之一，胎儿弯曲菌胎儿亚种在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等。1.形态与染色：革兰氏阴性、细长、螺旋形或海鸥展翅状、S形的弯曲杆菌。陈旧培养物可呈球形或长丝状。大小为（0.5～8）μm×（0.2～0.5）μm。一端或两端具有单鞭毛，运动活泼，有时呈螺旋状运动。一、弯曲菌属的鉴定（一）生物学特性2.培养特性：微需氧菌，营养要求高，在普通培养基上不能生长，需加血液、血清。常用的选择培养基有Skirrow琼脂、Butzler培养基和Campy-BAP培养基。初次分离时，经48小时培养可形成两种菌落：一种为扁平湿润、灰白色半透明、边缘不整齐、常延接种线扩散生长的菌落；另一种为圆形凸起、半透明、针尖状、有光泽、单个细小菌落。两种菌落均不溶血。在布氏肉汤内呈均匀浑浊生长。一、弯曲菌属的鉴定（一）生物学特性3.生化反应：生化反应

该菌属生化反应不活泼。氧化酶均为阳性，大多数弯曲菌还能还原硝酸盐，触酶试验为阳性，空肠弯曲菌马尿酸水解试验阳性。不分解糖类、不液化明胶、不分解尿素，V-P和甲基红试验均阴性。4.抗原结构：有菌体（O）抗原、热不稳定抗原和鞭毛（H）抗原。根据O抗原可将空肠弯曲菌分为42个血清型。5.抵抗力：较弱，56℃5分钟即被杀死。干燥环境中仅能存活3小时。一、弯曲菌属的鉴定（一）生物学特性

主要引起人类肠道感染和各种肠道外感染。本菌属中的空肠弯曲菌是引发散发性细菌性肠炎的最常见菌种之一，胎儿弯曲菌主要引起肠道外感染，其中胎儿亚种为主要的人类致病菌。对红霉素、克林霉素和四环素敏感，多数空肠弯曲菌对氨基糖甙类、氯霉素及氟喹诺酮类敏感，由于可产生β-内酰胺酶，一般对β-内酰胺类药物耐药。一、弯曲菌属的鉴定（二）临床意义1.标本采集：根据不同患者类型采集粪便或肛拭子、血液、脓汁、脑脊液、尿液等标本送检。2.检验方法（1）直接涂片检查1）悬滴标本检查：取新鲜粪便于载玻片上，加生理盐水混合后，覆盖盖玻片置显微镜下观察有无投镖式或螺旋状运动的细菌。脑脊液经3000r/min离心沉淀15min后，制成涂片做悬滴检查。2）革兰染色检查：革兰阴性逗点状、S形或螺旋状小杆菌。一、弯曲菌属的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（2）分离培养：粪便和肛拭子标本直接接种于改良弯曲菌琼脂平板，如改良的Skirrow血琼脂平板和Campy-BAP平板；血液或脑脊液标本接种布氏肉汤增菌后，转种弯曲菌分离培养基，置43℃、37℃，在微需氧环境下培养(24-72)小时，观察菌落特征。一、弯曲菌属的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（3）生化鉴定：单鞭毛具有投镖样或螺旋样动力，需氧环境不生长，微需氧条件下，在弯曲菌选择培养基上形成两种类型菌落，不分解葡萄糖。弯曲菌属的鉴定要点为氧化酶阳性、革兰氏阴性、菌体弯曲或呈S形。最常用的鉴定试验有生长温度（25℃、37℃、42℃）试验、过氧化氢试验、马尿酸盐水解试验、硝酸盐和亚硝酸盐还原试验、硫化氢试验等。一、弯曲菌属的鉴定（三）微生物学检验一、弯曲菌属的鉴定（三）微生物学检验触酶25℃生长42℃生长1%甘氨酸H2S马尿酸盐3.5%NaCl胎儿弯曲菌胎儿亚种++v+---胎儿弯曲菌性病亚种v+-----空肠弯曲菌v-+/-+-vv大肠弯曲菌+-++v--唾液弯曲菌粪亚种+-+++--唾液弯曲菌唾液亚种--+++--黏膜弯曲杆菌--+v+--简明弯曲菌--vv+--弯曲菌属主要菌种的鉴别要点二、幽门螺杆菌的鉴定项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定二、幽门螺杆菌的鉴定

幽门螺旋杆菌是一类革兰氏阴性杆菌，菌体细长，呈弧形、S型和螺旋状，陈旧培养物可呈球杆型。一端多根带鞘鞭毛，运动活泼，无芽胞。微需氧，在含5%O2、10%CO2、和85%N2气体环境中生长良好，在大气中和绝对厌氧条件下不生长。最适温度37℃，最适PH7.0，生长时需要一定湿度，以相对湿度98%为宜。营养要求高，一般需含血液或血清才能生长。生化反应不活泼，不能利用糖类，氧化酶阳性，触酶阳性，尿素酶试验强阳性。主要分布在猕猴、大鼠、猪、犬等动物的胃粘膜组织中，67%-80%的胃溃疡和95%的十二指肠溃疡是由幽门螺旋杆菌引起的。（一）生物学特性

人群中感染幽门螺杆菌非常普遍，胃窦为其定植的最佳部位。幽门螺杆菌的感染与萎缩性胃炎或慢性浅表性胃炎之间的病因关系已确立，流行病学资料表明本菌的感染与胃窦和胃体部位的胃腺癌密切相关。此外，幽门螺杆菌还和胃黏膜相关B细胞淋巴瘤密切关联，针对本菌的治疗可以使淋巴瘤得到缓解。本菌具体发病机制尚不清楚，是多种因素，如细菌的鞭毛、黏附素、尿素酶、蛋白酶、空泡毒素、内毒素等协同作用的结果。（二）临床意义二、幽门螺杆菌的鉴定1.标本采集

通过胃镜用活检钳从近幽门部、胃窦部或病变的邻近处采取多位点样品，置运送培养基中送检，注意防止干燥。如不能及时送检，可置4℃冰箱保存，时间不超过5小时。受检者需术前停服铋剂或抗菌药物一周。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（1）直接显微镜检查1）将活检的组织切碎并研磨均匀，涂片或悬滴，置暗视野或相差显微镜下观察，幽门螺杆菌形态典型，呈典型“投镖样”运动。2）革兰染色检查：将活检的粘膜组织涂片后，革兰染色镜检，发现典型形态的幽门螺杆菌即可诊断。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（1）直接显微镜检查3）组织切片染色镜检：组织块经固定、切片后W-S银染色、吉姆萨染色、HE染色和荧光染色等染色后镜检幽门螺杆菌。4）免疫组化检查：可检出胃黏膜组织切片中完整的幽门螺杆菌及破碎的菌体或抗原成分。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（2）分离培养

应选用新鲜配制的培养基，非选择性培养基可用巧克力琼脂和含5%羊血的Brucella琼脂，选择培养基可用Skirrow琼脂和改良的Thayer-Martin琼脂。将研磨均匀的标本接种培养基后在微需氧、湿润的环境中培养(72-96)小时，方可见细小、圆形、光滑、半透明的菌落。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（3）生化鉴定本菌生化反应不活泼，不能利用糖类，氧化酶阳性，触酶阳性，尿素酶试验强阳性，含尿素酶丰富，可迅速分解尿素释放氨，将标本种入尿素培养基，阳性者培养基由黄变红，可作为鉴定该菌的主要依据。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法（4）尿素呼吸试验尿素呼吸试验是临床用于检测幽门螺杆菌感染的一种方法。被检者空腹，口服含同位素13C或14C的尿素，幽门螺杆菌产生的丰富脲酶可以使尿素分解产生标有同位素的CO2，后试验方法。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验2.检验方法(5)粪便抗原检测可采用酶免方法直接测定粪便标本中的抗原。适用于不能进行胃镜检查和13C或14C标记尿素呼吸试验患者。（6）PCR检查从克隆的幽门螺杆菌染色体DNA的特异性片段中构建引物或从Hp脲酶A基因序列中构建引物，用PCR扩增并结合限制性酶切多态性分析技术鉴别幽门螺杆菌，可检测出不能分离培养的幽门螺杆菌。二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验螺杆菌属主要菌种的特异性二、幽门螺杆菌的鉴定（三）微生物学检验菌种触酶硝酸盐还原碱性磷酸酶脲酶醋酸吲哚酚水解γ-谷氨酰转移酶42℃生长1%甘氨酸萘啶酸头孢噻吩毕氏螺杆菌+++++++-RS犬螺杆菌--+-+++-SI加拿大螺杆菌++/---+-++RR同性恋螺杆菌++-----+SI菲氏螺杆菌+-+-+--+SS幼禽螺杆菌++---ND+-RS幽门螺杆菌+-++-+--RS螺杆菌中“曲挠”菌株+/---+-++-RR温哈门螺杆菌----+ND-+RR

弯曲菌属细菌是一类微需氧菌，不分解糖类、氧化酶阳性，菌体弯曲，有动力的革兰氏阴性菌。包括5个种和5个亚种。对人类致病的主要是空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌胎儿亚种。主要引起人类肠道感染和各种肠道外感染。该菌属中的空肠弯曲菌是引发散发性细菌性肠炎的最常见菌种之一，胎儿弯曲菌主要引起肠道外感染，其中胎儿亚种为主要的人类致病菌。该菌属常对红霉素、克林霉素和四环素敏感。幽门螺杆菌是一类微需氧、对生长条件要求十分苛刻，革兰氏阴性螺旋形杆菌，是目前所知能够在猕猴、大鼠、猪、犬等动物胃中生存的微生物种类。幽门螺杆菌病包括由幽门螺杆菌感染引起胃炎、消化道溃疡、淋巴增生性胃淋巴瘤等。幽门螺旋杆菌阳性的治疗方案包括两大类，一类是常用的药，以抗生素为主，辅加抑酸剂（铋剂）的方案，二是以质子泵抑制剂的方案。常用抗生素羟氨苄青霉素、庆大霉素、克拉霉素和阿莫西林等。项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定项目小结项目二十二弯曲菌属和幽门螺杆菌鉴定项目二十三非发酵菌鉴定学习目标1．掌握铜绿假单胞菌的主要生物学特性、微生物学检验方法及鉴定依据。2．熟悉不动杆菌属和产碱杆菌属主要生物学特性、微生物学检验方法及鉴定依据。3．了解常见非发酵革兰阴性杆菌的临床意义。4．具有正确采集和处理常见非发酵革兰阴性杆菌检验标本及进行相关检测的能力。5．能正确选择试验项目对常见非发酵革兰阴性杆菌进行检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。项目二十三非发酵菌鉴定思维导图项目二十三非发酵菌鉴定一、假单胞菌属的鉴定项目二十三非发酵菌鉴定一、假单胞菌属的鉴定概述1.假单胞菌属（Pseudomonas）为严格需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验均阳性，是假单胞菌科的代表菌属，包括200多个菌种。2.假单胞菌属是一类无芽胞、散在排列的革兰阴性杆菌，菌体直或微弯，有单鞭毛或丛鞭毛，运动活泼，专性需氧。3.与人类关系密切的有铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等，是医院感染的主要病原菌。1.生物学性状（1）形态与染色：革兰阴性细长杆菌，有荚膜，单鞭毛，运动活泼一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌1.生物学性状（2）培养特性：营养要求不高，专性需氧，4℃不生长，42℃可生长。普通培养基上生长，80～90％产生各种水溶性色素，如绿脓素和荧光素。一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌1.生物学性状（3）生化反应：氧化酶阳性，氧化分解葡萄糖、木糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌1.生物学性状（4）抗原构造

菌体（O）抗原

鞭毛（H）抗原外膜蛋白：具有属的特异性脂多糖：具有型特异性一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌1.生物学性状（5）抵抗力：抵抗力强，对干燥、紫外线有抵抗力，对热抵抗力不强，56℃30min可被杀死，对某些消毒剂敏感，1%石炭酸处理5min即被杀死，临床分离菌株对多种抗生素不敏感一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌2.临床意义（1）主要致病物质：

铜绿假单胞菌有多种致病因子，包括结构成分、毒素和酶，如粘附素、多糖荚膜样物质、内毒素、外毒素A、弹性蛋白酶、磷脂酶C等（2）所致疾病：铜绿假单胞菌是条件致病菌，免疫力低下者易感染，是医院内感染的主要菌之一。临床表现多样，引起化脓性感染，如烧伤感染、呼吸道感染、中耳炎、眼角膜炎等，合并败血症者死亡率高。（3）药物敏感性：对抗假单胞菌青霉素类、氨基糖苷类、环丙沙星、头孢吡肟、头孢他定、美罗培能、亚胺培南敏感。医院获得性铜绿假单胞菌较社区分离株有较高的耐药性，常显示多重耐药。一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌3.微生物学检验（1）标本采集：根据疾病及检查目的分别采集不同的临床标本，如血液、痰液、脑脊液、胸（腹）水、尿液、脓液、分泌液、粪便等。医院环境检测可从空气、水、物体表面等处采样。一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌3.微生物学检验（2）检验程序标本增菌

分离培养（血平板）最后鉴定可疑菌落（性状、色素）初步鉴定涂片染色镜检血标本涂片镜检氧化酶菌落特征绿脓素气味42℃生长分型生化鉴定：O/F

O枸櫞酸盐利用＋精氨酸双水解＋乙酰胺酶＋明胶液化＋一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌3.微生物学检验（3）检验方法1）直接镜检：涂片、革兰染色2）分离培养：直接接种或增菌后接种血平板和MAC3）鉴定：根据菌落特征、色素、菌体形态、生化反应等作出鉴定。对无色素菌株应与其他假单胞菌鉴别一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌与其他假单胞菌的鉴别

铜绿假单胞菌荧光假单胞菌恶臭假单胞菌韦龙氏假单胞菌产碱假单胞菌氧化酶999710010096溴化-16-烷基-3-甲胺生长948987ND156.5%氯化钠生长6543100ND4142℃生长1000000硝酸盐还原9819010054青脓素6596931000精氨酸双水解酶1009710010012尿素水解575275250明胶水解821000130葡萄糖产酸971001001000枸橼酸盐9593100ND65一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌1.生物学特性（1）形态与染色：为革兰氏阴性杆菌，大小为0.7～0.8μm×2.3～2.8μm，有鞭毛，无芽孢，有数根极生鞭毛。（2）培养特性：需氧，最适生长温度是25～30℃，4℃生长，42℃不生长，在血平板上30℃孵育24h后形成灰白色、扁平稍隆起、湿润、光滑、边缘整齐的菌落，无溶血，挑取菌落呈黏丝状。能分泌黄绿色荧光色素发出荧光一、假单胞菌属的鉴定（二）荧光假单胞菌2.临床意义

荧光假单胞菌具有嗜冷性，可在血库储存的血中繁殖，若输入含有此种细菌的库存血液或血制品，可导致败血症、感染性休克或血管内凝血等严重后果，其内毒素的磷脂部分，可导致输血后不可逆的休克。3.微生物学检验

荧光假单胞菌生化能力活跃，氧化酶阳性，触酶阳性，能利用葡萄糖和果糖，有些菌株能从蔗糖合成果聚糖，液化明胶。在4℃生长和液化明胶(4～7d)，这两个特性可与恶臭假单胞菌相鉴别，后者均阴性。一、假单胞菌属的鉴定（二）荧光假单胞菌1.生物学特性（1）形态与染色：革兰阴性杆菌，有些菌株为卵圆形，单端丛毛菌，运动活泼。（2）培养特性：专性需氧，最适生长温度25～30℃，4℃和42℃均不生长，在血平板上形成光滑、湿润、边缘整齐的灰色菌落，不溶血，菌落与铜绿假单胞菌相似，但只产生荧光素，不产生绿脓素，借此可与铜绿假单胞菌相区别，其陈旧培养物有腥臭味。一、假单胞菌属的鉴定（三）恶臭假单胞菌2.临床意义

恶臭假单胞菌为鱼的一种致病菌，常从腐败的鱼中检出，可作为人类咽部的正常菌群，是人类少见的条件致病菌，偶从人类尿道感染、皮肤感染和骨髓炎标本中分离出，分泌物有腥臭味。恶臭假单胞菌感染通常病情较重。

3.微生物学检验

恶臭假单胞菌氧化酶、过氧化氢酶、枸缘酸利用阳性，精氨酸双水解酶阳性，硝酸盐还原、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、明胶酶、尿素酶、V-P反应、吲哚反应阴性。一、假单胞菌属的鉴定（三）恶臭假单胞菌1.生物学特性（1）形态与染色：革兰氏阴性菌杆菌，直径0.5μm×2～3μm；有极生单鞭毛。（2）培养特性：最适生长温度35℃，专性需氧，在血平板上形成圆形，边缘整齐，隆起，表面光滑，湿润的菌落。一、假单胞菌属的鉴定（四）产碱假单胞菌2.临床意义

产碱假单胞菌为自然界腐生菌，广泛存在于多种水源中，是医疗用水污染的主要原因，如污染新生儿温箱湿化用水和氧气湿化用水，极容易导致新生儿呼吸道感染甚至败血症等。还可引起化脓性脑膜炎、尿道炎、肺炎、心内膜炎、新生儿败血症、脓胸眼部感染及脓肿等感染性疾病。3.微生物学检验

产碱假单胞菌氧化酶阳性，O/F试验为产碱型，42℃不生长，不产色素，不分解尿素，不液化明胶。一、假单胞菌属的鉴定（四）产碱假单胞菌二、不动杆菌属的鉴定项目二十三非发酵菌鉴定二、不动杆菌属的鉴定1.形态与染色

革兰阴性杆菌，常成双排列，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。2.培养特性专性需要，营养要求不高，最适温度35℃，鲍曼不动杆菌42℃可生长。（一）生物学特性2.培养特性血平板上菌落圆形凸起，中等大小，光滑、边缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈粘液状，不产色素；在麦康凯平板上形成粉红色菌落。二、不动杆菌属的鉴定（一）生物学特性醋酸钙不动杆菌菌落（MAC）鲍曼不动杆菌菌落（MAC）二、不动杆菌属的鉴定（一）生物学特性3.生化反应

氧化酶阴性，触酶阳性，硝酸盐还原阴性，O/F为氧化型。动力、甲基红、V-P、H2S和硝酸盐还原试验阴性。不同的菌种对糖的氧化分解能力不同，醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌氧化分解葡萄糖和乳糖产酸，多数菌种能利用枸橼酸盐。二、不动杆菌属的鉴定（一）生物学特性1.致病物质

致病机制尚不完全清楚，未发现不动杆菌能分泌毒素或细胞溶解素，其致病力主要由荚膜、菌毛、产物酶、脂质及载体等组成。2.所致疾病

本属细菌为条件致病菌，在非发酵菌中本菌的分离率仅次于铜绿假单胞菌，也是医院感染的主要病原菌之一，常引起呼吸道、消化道及泌尿生殖道感染。3.药物敏感性

对青霉素、氨苄西林和头孢拉啶耐药；多数菌株对氯霉素耐药；对复方新诺明、哌拉西林/他唑巴坦、多西环素、和氟喹诺酮类较敏感。二、不动杆菌属的鉴定（二）临床意义1.标本采集

呼吸道、泌尿道及化脓感染的患者可采集尿液、痰液及脓液等标本；对疑为菌血症和脑膜炎的患者可采集血液和脑脊液标本。2.检验方法

（1）显微镜检查：

涂片革兰染色镜检，革兰阴性球杆菌，常成双排列，有荚膜，有菌毛。

（2）分离培养：在血琼脂培养基上，醋酸钙不动杆菌菌落较大，洛菲不动杆菌菌落较小，圆形、凸起、表面光滑、边缘整齐、灰白色、有黏性的β溶血菌落。在麦康凯琼脂平板上，醋酸钙不动杆菌形成粉红色的菌落，而洛菲不动杆菌形成黄色菌落。（3）生化反应：一般不产生色素，少数菌株可产生色素，氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐还原试验阴性，触酶阳性。

二、不动杆菌属的鉴定（三）微生物学检验

醋酸钙不动杆菌鲍曼不动杆菌溶血不动杆菌琼氏不动杆菌约翰逊不动杆菌洛菲不动杆菌葡萄糖氧化＋＋＋／－－－－木糖氧化－＋＋／－－－－乳糖氧化＋＋－＋＋＋精氨酸双水解酶＋＋＋＋－／＋－鸟氨酸脱羧酶＋＋－－－－苯丙氨酸脱氨酶＋＋－－－－丙二酸盐利用试验＋＋＋－－／＋－柠檬酸盐利用试验＋＋＋＋／－＋－明胶液化－－＋－－－37℃生长＋＋＋＋－＋42℃生长－＋－－－－不动杆菌属主要菌种的鉴别要点二、不动杆菌属的鉴定（三）微生物学检验三、产碱杆菌属的鉴定项目二十三非发酵菌鉴定1.形态与染色革兰阴性短杆菌，成对或链状排列，有周鞭毛，无芽胞，多数无荚膜。三、产碱杆菌属的鉴定（一）生物学特性2.培养特性专性需氧，最适生长温度25～35℃，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，麦康凯和SS平板亦可生长。三、产碱杆菌属的鉴定（一）生物学特性1.致病物质

本属中临床分离最常见的是粪产碱杆菌，大部分感染是条件致病，主要来自潮湿环境，如雾化器、呼吸机和灌洗液等，血、痰、尿、脑脊液等是常见的发现部位，是医院感染的病原菌之一。其致病物质主要是菌体成分如内毒素等。2.所致疾病

可致抵抗力低下的患者发生菌血症，也可引起呼吸道、泌尿道及中枢神经系统感染。3.药物敏感性

药物敏感试验的药物选择与假单胞菌相同。临床治疗可用哌拉西林及替卡西林。三、产碱杆菌属的鉴定（二）临床意义1.标本采集

根据临床疾病不同采集不同的标本，如血液、尿液、痰液、脓汁、脑脊液等。2.检验方法（1）显微镜检查：

脑脊液、尿液离心取沉淀涂片，脓汁和痰液可直接涂片革兰染色镜检，为革兰阴性短杆菌，有周鞭毛.（2）分离培养：在血平板上可形成大小不等、灰白色、扁平、边缘稍薄的湿润菌落，粪产碱杆菌部分菌株有水果香味；在麦康凯和SS平板上形成无色透明菌落。（3）生化反应：不分解任何糖类，O/F不分解糖类呈碱性，氧化酶阳性，触酶阳性，分解胺类产碱。三、产碱杆菌属的鉴定（三）微生物学检验

粪产碱杆菌皮乔特产碱杆菌粪产碱杆菌Ⅱ型木糖氧化产碱杆菌42℃生长－－－＋亚硝酸盐还原＋－－＋硝酸盐还原－＋－＋丙二酸盐＋＋－＋木糖－－－＋常见产碱杆菌的特性鉴别三、产碱杆菌属的鉴定（三）微生物学检验

非发酵革兰阴性杆菌是一群不能利用葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌，多为条件致病菌，已成为引起院内感染的重要致病菌。

铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种，可导致皮肤、呼吸道、泌尿道、眼部及烧伤创面等感染，亦可导致菌血症和败血症，是医院感染最常见病原菌之一，常引起ICU、血液及神经内科等重症病房患者感染。铜绿假单胞菌培养物有典型的生姜气味，可产生多种色素，主要为绿脓素和荧光素；有较高的耐药性，常显示多重耐药。主要依据菌落特征、色素、生姜气味及生化反应进行鉴定，氧化酶阳性，氧化分解葡萄糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐并产生氮气，能利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性为其生化反应特征。

不动杆菌属在临床标本中的分离率仅次于铜绿假单胞菌，临床分离绝大多数是鲍曼不动杆菌，也是医院感染的主要病原菌之一，常引起呼吸道、消化道及泌尿生殖道感染。一般不产生色素，氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐还原试验阴性为其生化反应特征。

产碱杆菌属中临床分离最常见的是粪产碱杆菌，血液、痰液、尿液、脑脊液等标本中常可检出该菌，是医院感染的病原菌之一。不分解任何糖类，O/F培养基上不分解糖类呈碱性，氧化酶阳性，触酶阳性，分解胺类产碱为其生化反应特征。项目二十三非发酵菌鉴定项目小结项目二十三非发酵菌鉴定项目二十四厌氧菌鉴定学习目标1．掌握破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌的生物学特性、微生物学检验方法及致病机制。2．熟悉无芽胞厌氧菌的形态特征及初步鉴别。3．了解厌氧菌感染的条件及临床特征。4．具有正确采集和处理常见厌氧菌检验标本及进行相关检测的能力。5．能正确选择试验项目对常见厌氧菌进行检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。项目二十四厌氧菌鉴定思维导图项目二十四厌氧菌鉴定概述必须在无氧环境下才能生长繁殖的细菌。根据能否形成芽胞分为两大类:有芽胞厌氧菌（外源性感染—致病菌）

无芽胞厌氧菌（内源性感染—条件致病菌）有芽胞厌氧菌只有1个属即梭菌属。破伤风梭菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌艰难梭菌共同特点G+杆菌，有芽胞，抵抗力强，厌氧感染条件是伤口厌氧微环境，产外毒素致病无荚膜(产气荚膜梭菌除外)细菌所致疾病破伤风梭菌破伤风产气荚膜梭菌气性坏疽、食物中毒、坏死性肠炎等肉毒梭菌肉毒中毒艰难梭菌假膜性结肠炎一、破伤风芽胞梭菌（一）生物学特性1.形态与染色

菌体细长G+杆菌，周鞭毛，无荚膜。芽胞大于菌体，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状，为本菌的典型特征。芽胞芽胞鞭毛2.培养特性

专性厌氧，在血平板上可呈薄膜状生长，菌落半透明、灰白色、边缘疏松似羽毛状，伴β溶血。在庖肉培养基中，肉渣变黑，有腐败性恶臭。3.生化反应

大多生化反应阴性。4.抵抗力很强，土壤中可存活数十年，能耐干热150℃1h，煮沸100℃1h方可杀灭。繁殖体对青霉素敏感。（二）微生物学检验根据破伤风病人典型的临床表现即可诊断，特殊需要时才进行细菌学检查。1.标本从可疑的感染伤口采取浓汁、组织液或坏死组织块等。2.鉴定

直接涂片厌氧培养毒力试验（三）临床意义感染途径：创伤感染条件：厌氧微环境致病物质：破伤风痉挛毒素和破伤风溶血毒素典型症状：牙关紧闭、苦笑面容、角弓反张112破伤风痉挛毒素作用机理防治原则：及时处理伤口,扩创、清创人工自动免疫，白百破三联菌苗（DPO）或类毒素人工被动免疫，紧急预防注射破伤风抗毒素(TAT)，大剂量青霉素（四环素、红霉素）及使用镇静解痉药作对症处理。二、产气荚膜梭菌（一）生物学特性1.形态与染色

G+粗大杆菌，无鞭毛，在机体内可形成明显的荚膜。芽胞直径小于菌体宽度，位于中央或近极端。2.培养特性

生长迅速，代谢活跃，45℃生长最好血琼脂平板：双层溶血环卵黄琼脂平板：Nagler反应（α毒素）牛奶培养基：“汹涌发酵”卵黄琼脂平板Nagler反应双层溶血环汹涌发酵Nagler反应

产气荚膜梭菌在卵黄琼脂平板上，由于细菌可产生α毒素（卵磷脂酶）分解卵磷脂，使菌落周围出现乳白色浑浊圈，是鉴定本菌的简易方法。3.生化反应发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇，产酸产气明胶液化试验（+），H2S试验（+），卵磷脂酶（+）在乳糖蛋黄牛奶血琼脂上分解乳糖，有双层溶血环（二）微生物学检验1.标本避免正常厌氧菌群的污染和接触氧气2.鉴定涂片镜检:G+大杆菌，有荚膜，白细胞少，并伴有杂菌，有初步诊断价值。分离培养：厌氧培养，如有菌生长，取可疑菌落进行形态学和生化反应鉴定。（三）临床意义感染途径：创伤和消化道感染条件：厌氧微环境致病物质：外毒素、多种侵袭性酶和荚膜所致疾病：气性坏疽、食物中毒、坏死性肠炎防治原则：及时处理伤口,扩创、清创早期可用多价抗毒素血清抗生素使用三、肉毒芽胞梭菌（一）生物学特性1.形态与染色

专性厌氧，芽胞直径大于菌体，位于次极端，使细菌呈汤匙状或网球拍状。2.培养特性

严格厌氧，营养要求不高。厌氧血平板上形成2-4mm菌落，毛玻璃样，β-溶血。庖肉培养基中生长能消化肉渣，使之变黑，有腐败恶臭气味。3.生化反应生化特性随毒素型不同而有所差异。4．抵抗力很强，能耐热100℃1h以上，干热180℃2h高压蒸汽灭菌30min芽胞可被杀死。肉毒毒素不耐热，经56℃30min可灭活。（二）微生物学检验1.标本及时取可疑食品、呕吐物、粪便等。2.鉴定涂片镜检：G+大杆菌，菌体呈汤匙状或网球拍状。分离培养：庖肉培养基中能消化肉渣使之变黑，有腐败恶臭气味。肉毒素检测（+）。（三）临床意义感染途径：创伤和消化道感染条件：厌氧微环境致病物质：肉毒毒素（毒性最强）所致疾病：肉毒素中毒防治原则：加强食品管理和监督食品进食前加热煮沸治疗应尽早注射多价抗血清四、艰难梭菌革兰阳性粗大杆菌，有些菌株有周身鞭毛，芽胞位于菌体次极端，严格厌氧，营养要求较高，不易培养。临床意义：假膜性肠炎

艰难梭菌是人类肠道中的正常菌群，当长期使用氨苄青霉素、头孢菌素、红霉素、氯林可霉素以及抗肿瘤化学制剂引起菌群失调，引发抗生素相关性腹泻（假膜性结肠炎）。临床表现：严重腹泻、腹痛、伴有全身中毒症状，常并发有毒素性巨结肠的形成。治疗：可用万古霉素或甲硝唑，并口服调整正常菌群的制剂。（一）脆弱类杆菌

占临床厌氧菌分离株的25%，居临床厌氧菌分离株的首位。在一定条件下可引起人体内源性感染，如脑脓肿、腹膜炎、阑尾炎、女性生殖系统及盆腔感染。五、无芽胞厌氧杆菌脆弱拟杆菌的两极浓染及菌体的多形性（二）产黑色素普雷沃菌条件致病菌，可引起内源性感染，常与其他厌氧菌、需氧菌或兼性厌氧菌引起混合感染。是引起口腔与牙周感染、肺部感染及女性生殖系统感染常见菌之一。产黑色素普雷沃菌培养特性（三）不解糖紫单胞菌

不解糖紫单胞菌主要分布于人类口腔、泌尿生殖道和肠道，在正常人体的检出率较低。主要引起人类牙周炎、牙髓炎、根尖周炎，也可引起胸膜炎、阑尾炎和细菌性阴道炎，尚可引起头、颈部和下呼吸道感染。（四）革兰阳性无芽胞厌氧杆菌共同特点革兰阳性，菌体与类棒状杆菌相似，多呈“X”、“Y”、“人”、“川”等形状，大小不一、长短不等，多形性明显。pH6．5～7．8生长良好，但乳杆菌属最适pH5．5左右、甚至pH3亦能生长。各菌生化反应不一，多数能发酵葡萄糖，触酶（-），吲哚试验（-）。菌属主要特征（G＋C）%丙酸杆菌属主要代谢产物丙酸53～67乳杆菌属唯一的代谢产物乳酸32～53双岐杆菌属代谢产物乙酸＞乳酸55～67真杆菌属主要代谢产物乙酸、丁酸、甲酸30～40放线菌属代谢产物琥珀酸、乳酸、少量乙酸和甲酸57～69确定为厌氧菌后，在排除芽胞的前提下，进行鉴别

厌氧感染的重要病原菌，约占临床厌氧菌分离株的25%，其中主要包括革兰阳性的消化球菌、消化链球菌和革兰阴性的韦荣球菌。1.消化球菌属本菌是人体正常菌群之一，常与其他细菌引起混合感染，包括腹腔感染，肝脓肿，外阴、阴道及盆腔感染，肺部和胸膜感染，口腔感染，颅内感染以及皮肤和软组织感染等。（五）厌氧球菌2.消化链球菌属临床厌氧菌分离株中占比例较高，仅次于脆弱类杆菌，居第2位。3.韦荣球菌属口腔、咽部、胃肠道和女性生殖道正常菌群，为条件致病菌，引起人体内源性感染，感染多为混合感染。

厌氧菌是一群在有氧环境中不能生长或生长不良而在无氧环境中生长得更好的细菌。包括厌氧革兰阳性球菌、革兰阴性球菌、革兰阳性杆菌和革兰阴性杆菌，革兰阳性杆菌的芽胞位置和特征是厌氧菌重要的分类和鉴定依据。局部组织缺血、缺氧造成氧化还原电势（Eh）低、深部组织创伤和深部脓肿等厌氧环境是临床厌氧菌感染的重要因素。正确的标本采集和转运是厌氧菌分离培养的关键环节，其要点是避免正常菌落的污染和尽量减少标本在有氧环境中的暴露时间。梭状芽胞杆菌的种类最多，包括破伤风梭菌、产气荚膜梭菌和肉毒梭菌，分别引起破伤风、气性坏疽和肉毒毒素中毒等。

革兰阴性厌氧杆菌常见于人体与外界相通腔道的正常菌群，也是这些部位内源性感染的重要病原菌，常见的革兰阳性无芽胞杆菌有丙酸杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌和优杆菌，厌氧球菌占临床厌氧菌分离株的25%，常见的厌氧阳性球菌有消化球菌和消化链球菌，阴性球菌有韦荣球菌。项目小结项目二十四厌氧菌鉴定项目二十四厌氧菌鉴定项目二十五分枝杆菌鉴定学习目标1．掌握结核分枝杆菌的主要生物学特性、微生物学检验方法及鉴定依据。2．熟悉麻风杆菌主要生物学特性、微生物学检验方法及鉴定依据。3．具有正确采集和处理常见结核分枝杆菌感染后检验标本及进行相关检测的能力。4．能对结核分枝杆菌各种检验结果的正确判断和分析试验结果并发出检验报告。项目二十五分枝杆菌鉴定项目二十五分枝杆菌鉴定思维导图一、分枝杆菌属的概述项目二十五分枝杆菌鉴定一、分枝杆菌属的概述概述1.分枝杆菌属（Mycobacterium）为一类细长或略弯曲、有时呈分枝状的杆菌。是分枝杆菌科内唯一菌属，DNAG+Cmol%为62~70，种类很多，有结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌及其他分枝杆菌。2.分枝杆菌属专性需氧，主要特点是细胞壁含有大量脂质，可占其干重的60%，一般不易着色，需要用抗酸染色法进行染色，染色后呈红色。3.分枝杆菌属无荚膜，无芽胞，不产生外毒素、内毒素及侵袭性酶，其致病主要与菌体成分有关，引起的疾病呈慢性。二、结核分枝杆菌的鉴定项目二十五分枝杆菌鉴定1.生物学性状（1）形态与染色：菌体细长或略微弯曲，无荚膜，无鞭毛，无芽胞，革兰阳性，但不易着色，一般用齐-尼抗酸染色法染色，菌体呈红色。二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌1.生物学性状（2）培养特性：专性需氧，营养要求高，需在含有血清、蛋黄、甘油、马铃薯等培养基（如罗氏培养基）上才能生长35℃~40℃均可生长，最适PH值6.5~6.8，生长缓慢，需要2~4周才能长出菌落，菌落呈干燥颗粒状，不透明，米白色或米黄色，表面粗糙，似菜花。二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌1.生物学性状（3）生化反应：该菌不发酵糖类，能产生触酶，而耐热触酶试验大多为阴性，非结核分枝杆菌则大多为耐热触酶试验阳性。人型结核分枝杆菌烟酸试验，硝酸盐还原和烟酸试验均为阳性，可借此与牛型结核分枝杆菌进行鉴别二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌1.生物学性状（4）抵抗力

三耐：耐干燥---细胞壁的脂质可防止菌体内水分丢失在干燥痰中可存活数月耐酸或碱----对3%盐酸或6%硫酸及4%庆阳环有抵抗力耐染料-----对结晶紫（1：75000）和孔雀绿（1：13000）有抵抗力三敏感：对乙醇敏感对湿热敏感（62℃~63℃，15min或煮沸即可杀死）对紫外线敏感

二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌1.生物学性状（5）变异性

1）形态变异

2）菌落变异

3）毒力变异-----卡介苗（BCG）

4）免疫原性变异

5）耐药性变异二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌2.临床意义（1）主要致病物质：

结核分枝杆菌不产生内、外毒素，其致病性与细菌在组织细胞内大量繁殖引起炎症，菌体成分及代谢产物以及机体对菌体成分产生的免疫损伤有关。

1）脂质：脂质含量与毒力关系密切

2）蛋白质

3）多糖二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌2.临床意义（2）所致疾病：该菌通过呼吸道、消化道和受损皮肤进入机体引起结结核病。其中肺结核最多见。（3）免疫学与超敏反应

1）免疫性结核杆菌是胞内感染，免疫是以T细胞为主的细胞免疫，接合的免疫属于带菌免疫。机体感染结核分枝杆菌后，也可产生多种抗体，但这些抗体对机体无保护作用。

2）超敏反应机体在抗结核免疫的同时，也形成了对结核分枝杆菌的迟发型超敏反应。

3）结核菌素试验二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌1、原理：用结核菌素进行皮肤试验，来检测受试者对结核分枝杆菌是否具有免疫功能及迟发型超敏反应的一种试验。2、方法：用旧结核菌素（OT）5U或结核菌素衍生物PPD5U注射于前臂屈侧皮内，48~72小时后观察结果。3、结果：观察注射部位是否出现红肿或硬结无红肿或硬结<5mm为阴性，表示受试者无免疫力红肿或硬结≥5mm，为阳性，表示受试者有免疫力红肿或硬结≥15mm，为强阳性，提示受试者有结核分枝杆菌感染4、临床意义：1）卡介苗接种效果判断；2）作为婴幼儿结核病的辅助诊断；

3）测定肿瘤患者等细胞免疫功能二、结核分枝杆菌的鉴定附：结核菌素试验3.微生物学检验（1）标本采集：根据感染部位的不同，可采取不同的标本，结核病患者各感染部位的标本中大多混有其他杂菌，为此采取能抑制污染菌的方法，若需分离培养，必须使用灭菌容器，患者应停药1~2天后再在即标本。二、结核分枝杆菌的鉴定（一）铜绿假单胞菌3.微生物学检验（2）检验程序二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌3.微生物学检验（3）检验方法1）直接镜检：①直接涂片：涂片、抗酸染色(薄涂片+厚涂片）

②集菌涂片③荧光显微镜检查法：金胺“O”染色二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌二、结核分枝杆菌的鉴定附：结核分枝杆菌镜检报告方式染色方法报告方式镜检结果抗酸染色法（×1000）

—仔细观察至少300视野未发现抗酸菌±300个视野发现1~2条抗酸菌（全部涂膜镜检3遍）＋100个视野发现1~9条抗酸菌（全部涂膜镜检1遍）2＋10个视野发现1~9条抗酸菌3＋每个视野发现1~9条抗酸菌4＋每个视野发现9条以上抗酸菌荧光染色法（×400）—仔细观察至少300视野未发现抗酸菌±70个视野发现1~2条抗酸菌（全部涂膜镜检1~2遍）＋50个视野发现1~2条抗酸菌（全部涂膜镜检1遍）2＋10个视野发现4~36条抗酸菌3＋每个视野发现4~36条抗酸菌4＋每个视野发现36条以上抗酸菌3.微生物学检验（3）检验方法2）分离培养：

①标本处理：因标本杂菌多，需进行接种前处理，一般用4%氢氧化钠、

4%硫酸或胰酶-苯扎溴铵处理标本。

②培养基选择：

培养基种类多，一般固体分离培养选择罗氏培养基，液体培养选择米德尔布鲁克7H9培养基

③培养：37℃培养，一周内每天观察一次，一周后每周观察一次，直至6~8周。二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌二、结核分枝杆菌的鉴定附：结核分枝杆菌培养结果记录与报告方法报告方式

培养结果+

斜面上生长20个菌落以上，占斜面1/4以下2+

斜面上菌落生长面积占斜面1/4以上，1/2以下3+

斜面上菌落生长面积占斜面1/2以上4+

斜面上菌落生长密集成菌苔4.防治原则国际卫生组织提出控制结核病的方法有1）发现及治疗痰菌阳性的患者2）新生儿接种卡介苗二、结核分枝杆菌的鉴定结核分枝杆菌简称麻风杆菌，是麻风的病原菌。1.生物学性状麻风杆菌菌体比结核分枝杆菌短而粗，抗酸染色呈红色，常成束或成团排列，属于胞内寄生菌，被麻风杆菌感染的细胞呈泡沫状，称为麻风细胞（有诊断意义）。麻风杆菌体外人工培养未获成功。三、麻风分枝杆菌的鉴定麻风分枝杆菌2.临床意义

人是麻风杆菌的唯一宿主，也是唯一传染源，人因接触而引起感染，麻风病可分为两类：结核样型和瘤型。结核样型麻风多见，传染性小；瘤型麻风少见，传染性强。3.微生物学检验

涂片检查是目前最主要的诊断方法。从病变部位采集样本，经抗酸染色后镜检。金胺染色可提高阳性检出率。三、麻风分枝杆菌的鉴定麻风分枝杆菌四、非典型分枝杆菌的鉴定非典型分枝杆菌群名名称主要种名生长速度ⅠⅡⅢⅣ光产色菌暗产色菌不产色菌速生菌堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、猿分枝杆菌瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌等鸟-胞内分枝杆菌、蟾分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、胃分枝杆菌、嗜血分枝杆菌偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、耻垢分枝杆菌缓生缓生缓生速生项目二十五分枝杆菌属鉴定项目二十六其他细菌鉴定学习目标1．掌握流感嗜血杆菌、白喉杆菌及炭疽秆菌的生物学性状、微生物学检验的检验程序与鉴定要点。2．熟悉百日咳鲍特菌、军团菌、布鲁菌及李斯特菌属、丹毒丝菌属、芽胞菌属、阴道加特纳菌属的检验程序与鉴定要点。3．了解流感嗜血杆菌、百日咳鲍特菌、军团菌、布鲁菌及其他棒状杆菌的检测。4.具有正确采集和处理常见革兰阳性杆菌检验标本及进行相关检测的能力。5．能正确进行各种细菌染色的操作、结果判断与分析试验结果并发出检验报告。项目二十五其他细菌鉴定一、其他革兰阴性杆菌的鉴定项目二十六其他细菌鉴定项目二十六其他细菌鉴定一、嗜血杆菌属嗜血杆菌属概述嗜血杆菌属是一群没有动力、不形成芽胞、菌体呈球杆状的革兰阴性小杆菌，生长需求较高，在人工培养时需新鲜血液才能生长，故称嗜血杆菌。一、嗜血杆菌属分类流感嗜血杆菌（H.influenzae）副流感嗜血杆菌（H.parainfluenzae）溶血嗜血杆菌(H.haemolyticus)副溶血嗜血杆菌（H.parahaemolyticus）杜克嗜血杆菌（H.ducreyi）埃及嗜血杆菌（H.aegyptius）嗜沫嗜血杆菌（H.aphrophilus）副嗜沫嗜血杆菌(H.paraphrophilus)迟缓嗜血杆菌（H.segnis）一、嗜血杆菌属几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病常栖部位及所致疾病流感嗜血杆菌

原发化脓性感染及继发性感染，包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎、鼻窦炎及中耳炎等。副流感嗜血杆菌口腔及阴道正常菌群，偶尔可引起心内膜炎、尿道炎。溶血嗜血杆菌鼻咽部正常菌群，常引起儿童上呼吸道感染。副溶血嗜血杆菌口腔、咽部正常菌群，偶可引起咽炎、化脓性口腔炎和心内膜炎杜克雷嗜血杆菌软下疳，为性传播病菌。常引起外阴脓疱、溃疡、淋巴结肿大。埃及嗜血杆菌急性亚急性结膜炎、儿童巴西紫癜热嗜沫嗜血杆菌菌种副嗜沫嗜血杆菌咽部及阴道正常菌群，偶可引起亚急性细菌性心内膜炎、败血症、甲沟炎、、脑脓肿、脑膜炎。1.生物学性状（1）形态与染色：G-小杆菌，呈多形性：球杆、长杆、丝状无芽胞、无鞭毛、多数有菌毛，毒力株有荚膜嗜血杆菌属微生物检测一、嗜血杆菌属1.生物学性状（2）培养特性：专营养要求高需要X、V因子生长温度为35℃最佳培养基：巧克力琼脂。一、嗜血杆菌属嗜血杆菌属鉴定菌落特征：巧克力琼脂培养基小、无色透明菌落二、嗜血杆菌属鉴定嗜血杆菌属鉴定流感嗜血杆菌巧克力琼脂养基菌落1.标本采集在疾病早期采取标本，立即送检。在取标本时以肉汤湿润，防止干燥。对心内膜炎、患者取血液标本。痰液标本应洗涤、消化，再接种。不能立即送检应室温保存，不要冷藏二、嗜血杆菌属鉴定嗜血杆菌属临床检验程序二、嗜血杆菌属鉴定嗜血杆菌属临床检验程序血液脑脊液脓汁痰

分离培养(巧克力琼脂)

涂片、镜检荚膜肿胀试验（初步报告）标记抗体检测抗原涂片、荚膜肿胀试验（初步报告）菌落形态、卫星现象、血清学现象报告结果增菌培养DNA探针杂交（快速检测）2.分离培养在血液、骨髓：增菌后接种巧克力色血琼脂平板有杂菌标本接种选择培养基：巧克力琼脂中加入抗生素(万古霉素、杆菌肽、氯林可霉素)二、嗜血杆菌属鉴定嗜血杆菌属临床检验程序3.鉴定菌落形态、涂片染色特点血平板卫星试验Ⅹ、Ⅴ因子需求试验一、嗜血杆菌属鉴定嗜血杆菌属临床检验程序二、嗜血杆菌属鉴定卫星现象当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血平板上共同培养时，由于金黄色葡萄球菌能合成较多的Ⅴ因子，并弥散到培养基中，可促进流感嗜血杆菌生长，故在葡萄球菌周围生长的菌落较大，越远越小。卫星现象(satellitephenomenon3.鉴