DB32T-茅苍术工厂化育苗技术规程

DB32/TXXXX-XXXXDB32/TXXXX-XXXX前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由南京师范大学提出并归口。本文件起草单位：南京师范大学、南京倍萜源生物科技有限公司、江苏靖博生物技术有限公司。本文件主要起草人：周家宏、陈飞、吕吉、王光胜、汤萌。茅苍术工厂化育苗技术规程范围本文件规定了茅苍术工厂化育苗生产的组织培养、炼苗和穴盘苗生产、种苗标准、包装运输、生产档案等内容。本文件适用于茅苍术工厂化育苗技术与管理的全过程。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB3095环境空气质量标准《中国药典》2020年版，第一部药材和饮片，168苍术术语和定义下列术语和定义适用于本文件。茅苍术Atractylodeslancea(Thunb.)DC.菊科苍术属多年生草本植物，根茎是著名的传统中药。主要分布于江苏、湖北和河南等省份，江苏茅山地区及其周边的江苏西南部丘陵地区是茅苍术道地药材的产区。组培苗tissuecultureplantlets是根据植物细胞具有全能性的理论，利用外植体，在无菌和适宜的人工条件下，培育的完整植株。炼苗temperingseeding通过控水、减肥、增光、降温等措施，使植物无菌组培苗逐渐适应外界环境，从而在生理、形态、组织上发生相应的变化，使之更适合于自然环境，从而保证组培苗的种植成功。工厂化育苗industrialseedculture以先进的育苗设施和设备装备种苗生产车间，将现代生物技术、环境调控技术、信息管理技术贯穿于种苗生产过程，从而实现种苗的规模化生产。无菌组培苗培养外植体处理选择健壮、无病虫害的野生或栽培茅苍术植株，外植体进行表面灭菌处理：取其叶芽，流水冲洗，在超净台中将叶芽依次浸泡于75%乙醇、9%次氯酸钠溶液、75%乙醇，随后无菌水冲洗3遍。分化培养将冲洗干净的叶芽转移至含MS无菌分化培养基的组培瓶中。分化培养基组成为：MS培养基+6-苄氨基嘌呤(2mg/L)+1-萘乙酸(0.3mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(10g/L)的固体培养基，每45天转接1次。组培室培条件为：光照强度3400lm/m2；光照时间12h/天，培养温度28/18℃。生根培养剪取分化培养基上茅苍术组培苗的丛生芽，移入生根培养基中。生根培养基的组成为：1/2MS培养基+1-萘乙酸(0.3mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(10g/L)，培养时间为60天。培养的环境条件同分化培养条件。炼苗与穴盘苗生产炼苗与穴盘培养将组培瓶在温室中封口放置2~3天，再瓶口半打开放置2~3天，最后瓶口完全打开放置1~2天。取出组培苗，放入水温为20℃左右的清水中，漂洗去除根部培养基，移栽至穴盘基质中并稍压紧。宜采用72孔育苗穴盘，穴盘的尺寸为54cm×28cm，穴盘基质为灭菌后的蛭石和营养土混合基质（体积比1:1）。穴盘中施入适量生根培养液，其组成为：1/2MS+1-萘乙酸(0.3mg/L)，每周洒水2~3次，湿润即可，培养60天。温室培养条件为：温度20℃左右，光照强度为18000lm/m2~20000lm/m2，相对湿度50%~70%。病虫害防治防治对象主要是蚜虫，以物理防治为主，采用粘虫板、杀虫灯诱杀害虫。种苗检测外观叶片≥15片，株高≥10cm，根长≥5cm，无损伤、无烂根、无病害。活性成分气相色谱检测种苗化学成分特征，应能检测出苍术酮、茅术醇、β-桉叶油醇和苍术素4种成分。具体检测方法为：安捷伦7890A气相色谱仪，色谱柱为HP-5毛细管柱（30m×0.320mm×0.1μm），检测器为火焰离子检测器，并按照以下升温程序进行样品检测：70℃保持1min，8℃/min升温至200℃，20℃/min升温至300℃保持5min，总运行时间27.25min。进样口温度240℃，检测器温度350℃，载气为高纯度氮气，流速0.92266mL/min，柱前压70KPa，进样量为1μL。变异率取种苗植株叶片，CTAB法提取DNA，PCR扩增茅苍术特异性分子标记基因matK序列（扩增引物：trnK-3914F:GCTCCAGAAGATGTTGATCG;matK-1541R:GGGGTTGCTAACTCAACGG），比较其与野生或栽培茅苍术的序列差异，判断变异率。包装、运输穴盘苗应装在与穴盘尺寸相应的纸箱内，每层穴盘间应用纸托盘隔开；箱体应带有透气孔，在纸箱上贴上标签，注明品种、数量、规格、生产单位和日期；装车时切勿倒置，运输过程避免日晒、雨淋