DB4117T 320-2021 动物病原微生物实验室菌种保存和活化技术指南

4117I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定上蔡县农业综合行政执法大队、许昌市建安区1动物病原微生物实验室菌种保存和活化技术指南本文件规定了动物病原微生物实验室常用的菌种保藏和活化的术语和定义、要求、标准菌株GB/T27025检测和校准实验室能力的GB/T27476.1检测实验室安全第1部SN/T2660食品微生物实验室菌种保藏人工采集的、经鉴定具有保藏价值的含有动物病原微生物的体液、组织、排泄物、分泌物、污染菌种活化就是将保藏状态的菌种放入适宜的培养24基本要求4.2针对动物病原微生物菌种特性选择适宜的保存方法，宜采用两种或两种以上的方法保存，以保持4.3动物病原微生物菌种保存所使用的器皿要求清洁4.4根据动物病原微生物菌种保存需要选择适合培养基。4.5动物病原微生物菌种保存过程中应4.7动物病原微生物菌种保存期间，要定期检查菌种存放设施的温度和湿度、菌株有无污染、绵塞有4.8动物病原微生物菌种保存工作不能对周围环境造成污染和危害。5.1获取途径5.1.1标准菌种的获取可通过国家级菌种5.1.2从上级机构下发的质控盲样中分离出的菌株，被证明结果是正确的、且从考核机构获得该菌种5.1.3从其他有效的，经过资质认证的商5.2验收5.3标准菌种保存3a)接种：以无菌操作将菌株纯培养物接种到固体培养基（斜面）或液体培养基中，接种固体培b)培养：在所保存菌种的最适培养条件下将细胞培养至稳定期或成熟期，并进行纯度检查。c)保存：培养好的菌种于4℃~6℃保存，需室温保存的菌种在室温（25℃)下保存。保存培每3-6个月移植一次。有特殊要求的按其规定移植。易保存于相对湿度为50%～70%的环a)灌入石蜡：将无菌的液体石蜡在无菌条件下注入刚培养好的新鲜培养斜面培养物上，液面高b)保存：注入液体石蜡的菌种斜面以直立状态置低温（4℃~6℃)干燥处保存，需室温保存a)菌种准备：在所保存菌种的最适培养条件下将细胞采用斜面培养、液体培养等方式培养至稳b)分装：分装菌液应在无菌条件下操作。采用较长的滴管，直接将菌液滴入安瓿管或冻存管底部，每管分装量约0.1mL～0.2mL。若是球形安瓿管，装量为半个球部。分4d)冷冻干燥：将预冻后的样品安瓿瓶迅速置于已充分预冷的冷冻干燥机样品舱内按照程序冷冻干燥。完毕后取出样品管置于干燥器内，备用。冷冻干燥时e)安瓿管封口及真空检验：从干燥器中火焰将管拉细后将管口连接到与真空安瓿管泵相连的橡皮管上，打开真空泵，在真空下用喷射火焰对准管细颈部加热熔封。熔封后的干燥管可采用f)保存：封口完全的冷冻干燥管保存于4℃~10℃。b)在无菌状态下打开冷冻管，在所保存菌种的最适培养条件下降细胞培养至稳定期或成熟期，进行纯度检查后，将菌种新鲜培养物加入到培养基中制成混悬液，无菌操作将混悬液转入到d)菌种吸附于瓷珠上后，将多余的混悬液吸出；如使用商业化的细胞冻存管，此时应按照产品7.2.1定期移植法保存菌种取样后直接接种于固体培养基或适量的液体培养基中进行7.2.3冷冻干燥法保存的菌种复苏先用70%酒精棉擦拭57.2.4瓷珠保存法保存菌株在无菌条件下打开冷冻管，用无菌针或接种环取出一粒瓷珠。封好冷冻管并尽快将其送回低温条件下保存。将瓷珠直接接种于固体培养基或适量的液8.1微生物菌种保藏和