课堂讲义系列高中生物浙科版选修三文档325动物的克隆

第5课时动物的克隆

【选考报告】

知识内考试属性及

考情解读

容要求

1.简述动物细胞、组织培养；说出动物组织培养技术的发

展历程；描述细胞系及细胞株的含义。

2.简述动物的克隆培养法。

3.描述动物细胞全能性的表现程度，说出动物难以克隆的

动物的

加试(a)原因。

克隆

4.简述动物的细胞融合技术及应用。

5.简述动物细胞核移植的概念和程序。

6.列举动物细胞培养与动物细胞核移植的应用和发展前

景。

课堂导学夯实基础，以例求法

一、动物细胞的培养和克隆形成

【知识梳理】

1.动物克隆的技术基础

动物克隆的技术基础是动物的细胞和组织培养。

2.动物细胞培养

⑴培养过程

I组织块，的切取I

；」।,---------,「机械消化|

|组织呷的分散再强

表现出生长、分裂、接触抑制和有

I细胞培养规律的衰老、死亡等生命活动现象

⑵原代培养和传代培养

将动物组织通过酶或机械方法分散成单个细胞后进行的初次培养，称为原代培养。初次培养

的细胞生长、繁殖一定时间后，由于空间不足或细胞密度过大导致营养枯竭，影响细胞的生

长，因此需要重新用胰蛋白酶等处理，进行分瓶扩大培养，称为传代培养。

小贴士细胞贴壁和接触抑制

(1)细胞贴壁：将培养液中分散的动物细胞放入培养瓶中，置于适宜的条件下培养，细胞很快

会贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。

（2）接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称

为细胞的接触抑制。

注意①打破接触抑制现象的方法：将贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继

续培养，让细胞继续增殖。②癌变细胞没有接触抑制现象。

3.动物组织培养

⑴概念：动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生是特性。

⑵结果：由于细胞的运动、变化，使得培养物的组织成分发生变化，长期的培养结果最终成

了简单的细胞培养。

⑶在广义的组培中还包括器官培养，即器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外和人工

控制的条件下得以保存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及分化能力。

4.细胞系和细胞株

⑴细胞系：可连续传代的细胞。原代培养物在首次传代时就成为细胞系，能连续培养下去的

细胞系称为连续细胞系,不能连续培养下去的细胞系称为有限细胞系。二倍体细胞通常为有

限细胞系。连续细胞系被认为是发生转化了的细胞系，大多数具有异倍体核型。有的连续细

胞系是恶性细胞系,具有异体致瘤性；有的连续细胞系获得了不死性，但保留接触抑制现象,

不致癌。

⑵细胞株：通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细

胞称为细胞株。细胞株一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等。

可以连续多次传代的细胞株称为连续细胞株，可传代次数有限的细胞株称为有限细胞株。

5.克隆培养法（或细胞克隆）

⑴概念：把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。

⑵结果：由于来源于一个共同的祖细胞，所以称为纯系,也就是克隆。

⑶提高细胞克隆形成率的措施：选择适宜的培养基、添加血清（胎牛血清最好）、以滋养细胞

支持生长、激素（胰岛素等）刺激、使用C02培养箱、调节pH等。

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A

【典例剖析】如图是动物细胞培养的基本过程示意图，请据图回答。

⑴动物细胞培养的理论基础是(A.细胞分化B.细胞增殖C.细胞全能性D.细胞

膜流动性)。

(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是,然后用酶处理，这

是为了使细胞分散开来。这样做的目的是。

(3)培养首先在B瓶中进行。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，到这时的培养

称为。

(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配制成,再分装。

(5)在C瓶中正常培养细胞的过程称为。

解析(1)动物细胞培养理论基础是细胞增殖。(2)在进行培养时应尽量使细胞分散，便于与培

养液充分接触进行物质交换，使其分散需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。(3)培养的过程分

为原代培养和传代培养两个大阶段。当培养到第10代左右，出现许多细胞衰老死亡现象，这

时为原代培养。(4)用胰蛋白酶处理使细胞从玻璃瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液继续培

养。(5)在C瓶中的培养属于传代培养。

答案(1)B

(2)剪碎组织(机械消化)胰蛋白使细胞与培养液充分接触(3)原代培养

⑷胰蛋白酶细胞悬浮液

(5)传代培养

【防错笔记】

动物细胞培养中的“四个2”

(1)培养过程为“2”：原代培养、传代培养。

(2)传代细胞为“2”：细胞株、细胞系。

(3)细胞生长特点为“2”：贴壁生长、接触抑制。

（4）胰蛋白酶使用为“2”：分散组织块、分散贴壁生长的细胞。

【变式训练】下列动物细胞培养过程中，属于原代培养的是（）

A.用胰蛋白酶使组织分散成单个细胞的过程

B.从机体取得细胞后立即进行培养的过程

C.出现接触抑制现象后取下的细胞的培养过程

D.生物制药厂通过细胞培养的方法生产细胞产物

解析原代培养是指从动物机体组织取出细胞后的立即培养，直到细胞出现接触抑制为止。

因为细胞的接触抑制，细胞停止分裂增殖，并逐渐走向衰亡，所以要想继续细胞培养，必须

将细胞取下分装后才能进行，分装后的细胞培养是传代培养。生物制药厂通过细胞培养法，

用于生产细胞产物的细胞一般具有无限增殖的能力，属于传代培养。

答案B

二,动物的细胞融合技术及其应用

【知识梳理】

L细胞融合与细胞杂交

⑴细胞融合

①概念：是指在一定的条件下将2个或多个动物细胞融合为一个细胞的过程。

②原理：细胞膜的流动性。

③诱导融合的方法

a.物理方法和化学方法：电激法、聚乙二醇等。

b.生物方法：灭活的病毒（如灭活的仙台病毒）。

（2）细胞杂交

①概念：基因型不同的细胞间的融合就是细胞杂交。

②过程

多核体一杂交细胞瑞嚏猛

③应用：由于细胞杂交中染色体容易丢失，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产

物（蛋白质）减少的对应关系可以进行基因定位。

小贴士灭活病毒诱导融合法

只能用灭活的病毒作为诱导剂，这是因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子

重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合；不能用不灭活的病毒作为诱导剂是因为不灭活的病

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毒会感染细胞，而不能诱导细胞融合。

2.杂交瘤技术和单克隆抗体的制备

⑴制备过程

小鼠注射抗气B淋巴细胞、

诱导多种选择培养基杂交克隆化培养

‘融合"细胞—福疯

抗体检测、

骨髓瘤细胞/

筛选

体外从培养液中提取

能分泌所需/培养

大量单克

抗体的杂交工

4隆抗体

瘤细胞、体内/

培养从小鼠腹水中提取

①用外界抗原刺激动物,使其发生免疫反应，使（效应）B淋巴细胞产生抗体。

②利用灭活的仙台病毒或聚乙二醇等作介导,使经免疫的动物的脾细胞与可以无限传代的食

髓瘤细胞融合。

③经过筛选、克隆培养，获得来自单一细胞的既能产生特异抗体、又能无限增殖的杂交瘤细

胞克隆。

⑵单抗的运用：可作为特异探针,研究相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及其功能。

小贴士血清抗体与单克隆抗体比较

项目分泌细胞特点生产

单克隆抗体杂交瘤细胞特异性强、灵敏度高产量高，易纯化分离

各种（效应）

血清抗体特异性差、灵敏度低产量低，分离困难

B淋巴细胞

【典例剖析】狂犬

病病毒是RNA病毒，G蛋白和N蛋白是狂犬病病毒的主要抗原，它们刺激人体后可诱导人

体产生相应的抗体和细胞免疫反应。如图表示用生物工程制备抗狂犬病病毒单克隆抗体的过

程。请回答下列问题。

（1）图中细胞1是小鼠体内注入________后而获得的细胞，细胞2为细胞。

细胞1具有产生_______的功能，细胞2的突出特点是-诱导细胞1和2融合的诱

导剂通常是或聚乙二醇。

⑵若细胞1基因型为HH,细胞2基因型为SS,则细胞3的基因型应该是o在两两

融合后的众多细胞中，基因的组合类型还可能有。

⑶培养液的配方通常含有糖、氨基酸、无机盐、微量元素等，与植物细胞培养基有所不同的

是，还含有。细胞在培养瓶中贴壁生长，随着细胞的增多，需要定期用使

细胞从瓶壁上脱离下来，以便于分装到更多的培养瓶中继续培养。

(4)图中制备抗狂犬病病毒单克隆抗体过程利用了(不定项选择：A.动物细胞培养B.

动物细胞融合C.核移植D.转基因)技术。

解析B淋巴细胞能够产生特异性抗体，但不能在体外大量增殖，骨髓瘤细胞能够无限增殖

但不能产生抗体，二者融合成的杂交瘤细胞不仅能够在体外大量繁殖，而且能够产生与相应

的抗原进行特异性结合的抗体。通过特定的选择培养基可将杂交瘤细胞筛选出来，进行克隆

化培养，便可大量制备单克隆抗体。单克隆抗体的制备利用了动物细胞培养技术和动物细胞

融合技术。

答案(1)狂犬病病毒(G蛋白抗原或N蛋白抗原)B淋巴骨髓瘤特异性抗体能够无限

增殖灭活的仙台病毒(2)HHSSHHHH、SSSS(3)动物血清胰蛋白酶(4)AB

【防错笔记】

⑴免疫处理：取B淋巴细胞的动物必须预先经过免疫处理，否则不会产生特异性抗体。

⑵融合手段：动物细胞融合特有的诱导方式为灭活的病毒处理，其他物理、化学诱导融合的

手段与植物体细胞杂交过程中原生质体融合方法相同。

(3)杂种细胞：在诱导剂的作用下进行细胞的诱导融合，形成的杂种细胞有三种：AA型、BB

型、AB型，只有AB型才是我们所需要的杂种细胞，所以需要用选择培养基进行筛选。

(4)杂交瘤细胞：制备单克隆抗体时选用一种抗原处理的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融

合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性一在体外培养条件下能不断增殖，同

时能产生某种特异性的抗体。

(5)两次筛选：第一次筛选：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合之后，有三种融合情况：B淋巴细

胞与B淋巴细胞融合、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合、B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。而只

有B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的细胞才是需要的杂种细胞。

第二次筛选：对杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需

抗体的杂交瘤细胞。

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（6）获取单克隆抗体的场所：若在培养基中进行杂交瘤细胞培养，则从培养液中提取；若在小

鼠或其他动物腹腔中培养，则从腹水中提取。

【变式训练】用a表示骨髓瘤细胞，b表示B淋巴细胞，则细胞融合过程中两次筛选的目的

分别为（）

A.a、aa、ab、bb>b-a、aa、ab-ab细胞

B.a、aa、ab>bb>b-ab、bb、bfab细胞

C.a、aa、ab>bb、b—ab一产生特定抗体的ab细胞

D.a、aa、ab、bb、b—aa—能无限增殖的aa细胞

解析第一次筛选是为了获得杂交瘤细胞，即ab。第二次筛选是为了获得能产生特定抗体的

杂交瘤细胞。

答案C

三、动物的克隆繁殖

【知识梳理】

L动物细胞全能性的表现程度

（1）在动物发育过程中，细胞的发育潜能逐渐变窄。

⑵全能性大小：

受精卵〉胚胎细胞〉干细胞>高度分化的体细胞。

低等动物细胞>高等动物细胞。

2.动物难以克隆的根本原因

来自动物的体细胞均已发生了分化，基因组中基因的活动很不完全,不能像受精卵那样发挥

细胞的全能性，即细胞分化使得细胞发生了基因的差异性表达,以此为起点进行动物克隆，

难度很大。

3.细胞核移植实验和动物的克隆繁殖

白色芬兰母羊

、苏格兰黑面母羊

•）卵细胞

乳腺细胞

细胞质细胞核

细胞核移植

重组细胞

•）（融合后的卵细胞）

动物组培

（卵裂3次）1

早期胚胎（即八细胞胚）

胚胎移植|

置入另一头苏格兰黑面母羊子宫

产下羊羔（克隆羊“多莉”）

原理和主要技术：利用细胞核的全能性进行核移植,将动物的一个细胞核移入一个已经去掉

细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个

体(克隆动物)。

小贴土动物细胞全能性的理解

(1)动物体细胞由于发生了分化，基因组中的基因活动不完全，即有的基因开放，有的基因关

闭，细胞全能性受到限制，很难表达。

⑵由于细胞核中含有该物种的完整基因组，若给予促进细胞核表达全能性的物质和营养条

件，动物细胞的细胞核仍可表现出全能性。

【典例剖析】世界上第一只克隆绵羊“多莉”的培育程序如图所示，请据图回答下列问题。

I重组细胞I

电脉冲剌激

I早号胚胎I

一河移植

I另一头母绵羊子图

I克隆绵*“多莉T

⑴图中a所指的细胞工程名称为0

⑵实施细胞工程a时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞或卵母细胞的原因是

⑶“多莉”面部的毛色是,请根据遗传原理说明判断的依据：

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

(4)继植物组织培养之后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细胞核也具有。

(5)请举一例，说明克隆羊培育成功的实际意义。

(6)若黑面绵羊的基因型为AA,白面绵羊的基因型为aa,则所得克隆羊的基因型为。

解析细胞内的绝大部分遗传物质(DNA)存在于细胞核内的染色体上，所以生物的绝大部分

性状如性别、毛色等是由核基因来控制的。

答案(1)核移植(2)细胞大，易操作且含有促使细胞核表达全能性的蛋白质因子(3)白色

“多莉”的全部核基因均来自白面绵羊(4)全能性

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（5）保存濒危物种，繁育优良品种，医学上克隆器官（答出任一项均可）（6）aa

【防错笔记】

（1）在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，必须先去掉受体卵母细胞的细胞核，原因是

使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。

（2）体细胞核移植方法生产的克隆动物并不是对体细胞供体动物进行了100%的复制，因为克

隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵

母细胞。

I知识卡片I

1.动物克隆的技术基础是动物的细胞和组织培养。

2.动物胚胎或幼龄动物的组织、器官朦蛋出单个细胞悬浮液加培养液原代培养.传代培

养。

3.提高细胞克隆形成率的措施是选择适宜的培养基、添加血清、以滋养细胞支持生长、激素

刺激、使用CO2培养箱、调节pH等。

4.

B淋巴细胞、rBB细胞

选择一杂交瘤

B瘤细胞

骨髓瘤细胞/诱导培养细胞

、瘤瘤细胞

克隆九六户4mg注入f小鼠体内培养提取

杂交瘤细胞一*一-单克隆抗体

〔体外培养

5.“多莉”的生产过程运用了核移植、胚胎体外培养和胚胎移植等技术。

随堂检测分类演练，点点突破

1.判断正误

（1）从机体取得细胞后立即进行的培养过程属于原代培养。（V）

（2）生物制药厂通过细胞培养的方法生产细胞产物，属于原代培养。（X）

（3）细胞培养过程中可用胃蛋白酶使组织分散成单个细胞。（X）

（4）单抗的制备运用了动物细胞培养技术和动物细胞融合技术。（J）

（5）细胞核移植是体细胞克隆的关键步骤。（J）

（6）将雄羊的体细胞核移入雌羊的卵细胞中，产生的克隆羊发育成熟后分泌雌激素。（X）

2.关于动物细胞和组织培养的叙述，错误的是（）

A.动物细胞和组织培养是动物克隆技术的基础

B.用于培养的细胞最好取自幼龄或胚胎动物体内的组织细胞

C.将所取的组织先用胰蛋白酶进行处理，使其分散成单个细胞

D.动物细胞、组织通过培养最终在体外能发育成一个新个体

解析动物细胞的全能性随分化程度的提高而受到限制，分化潜能变弱。动物细胞和组织在

体外不能发育为成熟的动物个体。

答案D

3.关于细胞克隆的说法错误的是（）

A.细胞克隆的遗传性状均一，表现的性状相似

B.细胞克隆的最基本要求是保证克隆后的后裔细胞均来源于单个细胞

C.细胞克隆过程中需要。2，不需要C02

D.细胞克隆的最主要用途之一就是从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系

解析细胞克隆是把一个单细胞单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体，由于细胞进行有

丝分裂，后裔细胞的遗传性状均一，表现的性状相似；细胞克隆的主要用途就是分离出突变

细胞系。在细胞克隆过程中不仅需要02,还要使用C02培养箱用以调节pH。

答案c

4.利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正

确的是（）

A.用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体

B.体外培养单个效应B细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体

C.将等量效应B细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞

D.利用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出病毒感染者

解析经过抗原刺激后的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，产生杂交瘤细胞，克隆化培养

后的杂交瘤细胞能产生特异性强、灵敏度高的单克隆抗体。SARS病毒感染者体内有病毒核

衣壳蛋白质，用相应的单克隆抗体与之发生特异性结合的方法可加以诊断。

答案D

5.人的血清白蛋白在临床上需求量很大，通常从人血中提取。由于艾滋病病毒（HIV）等人类感

染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。如果将人的血清白蛋白基因

导入奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁来生产血清白蛋白就成为可能。大致过程如下：

a.将人的血清白蛋白基因导入雌奶牛胚胎细胞，形成重组细胞①；

b.取出重组细胞①的细胞核，注入牛去核卵细胞中形成重组细胞②；

电脉冲刺激重组细胞②，促使其形成早期胚胎;

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d.将胚胎移植到母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。

（1）重组细胞①的获得是利用了技术，它实现了奶牛胚胎细胞中的DNA与

的重组。

⑵重组细胞②的获得是利用了克隆技术中的技术，使重组细胞①的细胞核与牛的

________融合O

⑶由图可知，动物克隆技术的基础是（A.动物细胞融合B.动物细胞的全能性C.

动物细胞和组织培养D.核移植）。

（4）利用转基因牛乳汁提取药物工艺简单，甚至可直接饮用治病。如果将药物蛋白基因移到动

物（如牛）的膀胱上皮细胞中，利用转基因牛的尿液生产提取药物比乳汁提取药物的更大优越

性是：、。

（5）重组细胞②培养成早期胚胎利用了动物细胞培养技术。下列与动物细胞培养技术无密切关

系的是（A.细胞全能性的揭示B.噬菌体的研究C.细胞周期调节控制机理的分析

D.对癌变机理和衰老原因的研究）。

解析（1）基因工程可将目的基因——人的血清白蛋白基因与受体细胞牛胚胎细胞的DNA进

行重组。（2）克隆技术中的细胞核移植技术可将去核的牛卵细胞与含有目的基因的供体细胞核

融合构建重组细胞②。（4）建立膀胱生物反应器的好处是可以不分动物的性别及不同生长发育

期，均可产生所需药物。（5）噬菌体是细菌病毒，无细胞结构，A、C、D项所述的内容都与细

胞培养技术密不可分。

答案（1）基因工程人的血清白蛋白基因（2）核移植去核卵细胞（3）C（4）处于不同发

育时期的动物都可生产雌性和雄性动物都可生产（5）B

教材问题详解助教兴学，教材通关______________________________________________________

［思考与练习］（第38页）

一、判断题

1.X［细胞系指可连续传代的细胞，细胞株是指通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物

或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞。］

2.X［细胞克隆的最基本要求是必须保证分离出来的细胞是一个而不是多个，即必须肯定所

建成的克隆来源于单个细胞。］

3.V

4.X［“多莉”是利用体细胞进行核移植克隆的。］

二、简答题

L制备单克隆抗体时，B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖,

但不能产生抗体，只有二者融合形成的杂交瘤细胞才能既无限增殖，又能产生抗体。杂交瘤

细胞用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核

的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖,

又能产生特异性的抗体。对上述经选择性培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经

多次培养筛选就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。

2.克隆的细胞来源不同：前者是动物胚胎细胞，后者是动物体细胞。克隆的方法不同：前者

是胚胎细胞直接克隆，后者是体细胞核移植到去核卵细胞中进行克隆。克隆的结果不同：前

者是胚胎细胞无性繁殖的结果，其本质还是两性生殖细胞结合后的有性生殖产物；后者是与

体细胞核的遗传物质相同的重建合子发育的产物，是真正意义上的克隆。

课时作业课后训练，练出高分___________________________________________________________

（时间：30分钟满分：50分）

—v选择题（共8小题，每小题2分，共16分）

1.实验小鼠皮肤细胞培养（非克隆培养）的基本过程如图所示。下列叙述错误的是（）

A.甲过程需要对实验小鼠进行消毒

B.乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化

C.丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型

D.丁过程得到的细胞具有异质性

解析进行细胞培养前需要对提供实验材料的动物进行消毒，A正确；进行培养的组织需先

用胰蛋白酶处理，使其消化分散成单个细胞，B正确；丙过程属于原代培养，细胞的核型稳

定，C错误；丁过程属于传代培养，期间细胞属于细胞系，具有异质性，D正确。

答案C

2.下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（）

A.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞

B.克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变

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C.二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的

D.恶性细胞系的细胞可进行传代培养

解析动物细胞在培养过程中有接触抑制现象，细胞在培养瓶中会贴壁生长，形成一层细胞,

相互接触后停止生长。克隆培养法培养过程中，仅有极少数细胞的基因型会发生改变。二倍

体细胞的传代培养一般传至10代后就不易传下去了。恶性细胞系的细胞具有不死性，可以进

行传代培养。

答案D

3.下列关于动物克隆的叙述中，错误的是（）

A.动物细胞培养获得的有限细胞株大多数具有异倍体核型

B.细胞克隆可以从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系

C.提高动物细胞克隆形成率需要以滋养细胞支持生长及激素刺激等条件

D.核移植形成的重组细胞在初次分裂时核基因不转录

解析连续细胞系被认为是发生了转化的细胞系，大多数具有异倍体核型。

答案A

4.胃癌是我国发生率很高的一种恶性疾病，制备抑制胃癌细胞增殖的单克隆抗体对治疗胃癌

具有重要意义。抗胃癌单克隆抗体制备过程如下图。以下说法正确的是（）

’的胃迪小虹甲

癌细胞融合；笳选,丙（专一抗体一抗胃癌单

骨髓腐细胞A）克隆化培养检验阳性）克隆抗体

A.诱导骨髓瘤细胞与甲融合，可用的诱导因素只有灭活的病毒

B.在甲、乙、丙及骨髓瘤细胞中，乙、丙经培养后，均可获得大量的抗胃癌单克隆抗体

C.用人的胃癌细胞反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体

D.单克隆抗体制备过程中需加入血清

解析诱导动物细胞融合的因素除了灭活的病毒外，还有振动、离心、聚乙二醇、电激等；

只有细胞丙既能无限增殖又能产生抗胃癌单克隆抗体；动物细胞培养过程中需要向合成培养

基中加入血清，因为动物细胞生长过程中需要一些未知天然成分，而血清中含有这些天然成

分。

答案D

5.将基因型为Aa和基因型为Bb的动物体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理后，不可能获得

下列哪种基因型的细胞（）

A.AAaaB.AaBb

C.AabbD.BBbb

解析基因型为Aa和基因型为Bb的动物体细胞之间可以自由融合，在两两（即Aa和Aa、

Aa和Bb、Bb和Bb）融合的情况下，可产生AAaa、AaBb、BBbb三种基因型的细胞。

答案C

6.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量的单克隆

抗体。与骨髓瘤细胞融合的细胞是（）

A.经过特定抗原免疫的B淋巴细胞

B.不经过免疫的B淋巴细胞

C.经过特定抗原免疫的T淋巴细胞

D.不经过免疫的T淋巴细胞

解析骨髓瘤细胞必须与经过特定抗原免疫的B淋巴细胞融合，形成杂交瘤细胞，才能大量

增殖并产生能够与相应的抗原特异性结合的单克隆抗体。

答案A

7.下图为克隆羊“多莉”的培育过程示意图：

一

一

重

甲羊的乳早

组

期

腺细胞核宜植入丙羊子宫.克隆羊

一

细

胚

件发育、分娩"“多莉”

胞

乙羊的去胎

一

核卵细胞一

下列各项有关表述错误的是（）

A.克隆羊“多莉”的主要性状与甲羊一致，因为其细胞核基因来自甲羊

B.克隆羊“多莉”的培育过程中采用的生物技术有核移植技术和胚胎移植技术等

C.乙羊的去核卵细胞为重组细胞的基因表达提供了细胞内的环境条件

D.此过程说明高度分化的动物细胞具有全能性

解析生物的性状主要由细胞核中的遗传物质控制，克隆羊的性状与提供细胞核的个体基本

一致，A正确；甲羊的体细胞核移植到去核的卵细胞中形成重组胚胎后，在体外适宜条件下

培养至早期胚胎，再移植到第三只羊的子宫内完成妊娠、分娩等过程，B正确；选择去核卵

细胞的原因是因为其细胞大，易操作，且细胞质中含有使体细胞核表达全能性的物质，C正

确；此实验只能说明高度分化的动物体细胞的细胞核具有全能性，D错误。

答案D

8.下列有关克隆技术的叙述正确的是（）

A.动物细胞培养时，保留接触抑制的连续细胞系获得不死性，但不致癌

B.由于植物细胞具有全能性，水稻等在多次传代培养后，细胞全能性的表达能力不变

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c.从个体中分离出单个组织进行培养是细胞克隆最基本要求

D.原生质体的获取需在较低渗透压的环境下进行

解析动物细胞培养时，保留接触抑制的连续细胞系获得不死性，但不致癌，A正确；从个

体中分离单个细胞进行培养，是细胞克隆最基本要求，C错误。

答案A

二、非选择题（共4小题，共34分）

9.（9分）动物器官的体外培养技术对于研究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。如图是

一个新生小鼠的肝脏小块培养装置示意图。请回答下列问题。

玻

璃盖

脏

肝

块

小

纸

滤

液

养

培

室

气

⑴肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细胞

（2）气室中充入5%CO2气体的主要作用是

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

⑶如果经细胞培养形成的皮肤组织移植给患者，培养的细胞来源最好是

______________________________________________________________,以避免移植后发生

免疫排斥现象。

⑷动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面_______时，细胞会停止分裂增殖,

这种现象称为细胞的。此时，瓶壁上形成的细胞层数是,要使贴壁的细胞

从瓶壁上分离下来，需要用酶处理。

（5）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现现象;

但极少数细胞可以连续增殖，而被称为。

解析（1）肝脏切成小薄片，有利于肝脏细胞透过滤纸从培养液中吸收营养物质。同时有利于

与外界进行气体交换和自身代谢废物的排出。（2）组织培养时5%CO2有维持培养液pH的功能。

（3）皮肤克隆就是皮肤细胞进行有丝分裂增殖，其遗传物质没有改变，培养的细胞来源最好是

患者本人的健康皮肤，以防移植后发生排斥现象。（4）在动物细胞培养时，当贴壁细胞分裂生

长到相互接触时，就会停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制。瓶壁上形成的细胞成单层排

列，要使贴壁生长的细胞从瓶壁上分离下来，需用胰蛋白酶处理，溶解细胞间的蛋白质。（5）

随着细胞传代次数增多，绝大部分细胞分裂停止，出现衰老或死亡现象。

答案（1）吸收氧气和营养物质、排出代谢废物（2）维持培养液适宜的pH（3）患者本人的健

康皮肤（4）相互接触接触抑制单层（或一层）胰蛋白（5）衰老甚至死亡连续细胞系

10.（8分）下图为单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请据图回答下列问题。

O**.O

已产生免疫反应注射特定抗原培养骨髓杂交瘤体外培养阳

的B淋巴细胞瘤细胞细胞性细胞

ABCDE

骨髓瘤细胞单克隆抗体阳性的细胞射到小鼠体内

FGHI

⑴请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来：

⑵在单克隆抗体制备过程中选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞

具有、的特性。

⑶由图中可以看出，在单克隆抗体制备过程中运用了和