细胞生物学教案(完整版)

第1页共55页细胞生物学教案前言第一章绪论第二章细胞结构概观第三章研究方法第四章细胞膜第五章物质运输与信号传递第六章基质与内膜第七章线粒体与叶绿体第八章核与染色体第九章核糖体第十章细胞骨架第十一章细胞增殖及调控第十二章细胞分化第十三章细胞衰老与凋亡前言

依照高等师范院校生物学教学计划，我们开设细胞生物学。

一、学科本身的重要性

要最终阐明生命现象，必须在细胞水平上。细胞是生命有机体最基本的结构和功能单位，生命寓于细胞之中，只有把各种生命活动同细胞结构相联系，才能在细胞水平上阐明各种生命现象。世界著名生物学家Wilson（德国人）曾说过：“一切生物学问题的答案最终要到细胞中去寻找”。

二、学科发展特点

细胞生物学涉及知识面广、内容浩繁且更新迅速。它同生物化学、遗传学形成生命科学的鼎立三足，既是当代生命科学发展的前沿，又是生命科学赖以发展的基础。

三、欲达到的目的

通过系统地学习细胞生物学，丰富细胞学知识，以适应当代人类社会知识结构发展的需求，也是为考研做准备。

本课程讲授51学时，实验21学时，共72学时。

第一章绪论

教学目的1掌握本学科的研究对象及内容；

2了解本学科的来龙去脉（发展史及发展前景）；

3掌握与本学科有关的重大事件和名词。

教学重点本学科的研究对象及内容

教学方法讲授法

教学过程

第一节细胞生物学研究内容与现状

一、细胞生物学是现代生命科学的重要基础学科

（一）细胞学（Cytology）：是研究细胞的结构、功能和生活史的科学

（二）细胞生物学（CellBiology）：运用近代物理学和化学的技术成就以及分子生物学的概念与方法，从显微水平、亚显微水平和分子水平三个层次上，研究细胞的结构、功能及各种生命活动规律。

二、细胞生物学的主要研究内容

1细胞核、染色体及基因表达基因表达与调控是目前细胞生物学、遗传学和发育生物学在细胞和分子水平相结合的最活跃领域。

2生物膜与细胞器的研究膜及细胞器的结构与功能问题（“膜学”）。

3细胞骨架体系的研究胞质骨架、核骨架的装配调节问题和对细胞行使多种功能的重要性。

4细胞增殖及调控控制生物生长和发育的机理是研究癌变发生和逆转的重要途径（“再教育细胞”）。

5细胞分化及调控一个受精卵如何发育为完整个体的问题。（细胞全能性）

6细胞衰老、凋亡及寿命问题。

7细胞的起源与进化。

8细胞工程改造利用细胞的技术。生物技术是信息社会的四大技术之一，而细胞工程又是生物技术的一大领域。目前已利用该技术取得了重大成就（培育新品种，单克隆抗体等），所谓21世纪是生物学时代，将主要体现在细胞工程方面。

三、当前细胞生物学研究的总趋势与重点领域

1染色体DNA与蛋白质相互作用关系；

2细胞增殖、分化、凋亡的相互关系及其调控；

3细胞信号转导的研究；

4细胞结构体系的装配。

第二节细胞生物学发展简史

1细胞学创立时期19世纪以及更前的时期（1665—1875），是以形态描述为主的生物科学时期；

2细胞学经典时期20世纪前半世纪（1875—1900），主要是实验细胞学时期；

3实验细胞学时期（1900—1953）；

4分子细胞学时期（1953至今）。

总过程概括为：细胞发现→细胞学说建立→细胞学形成→细胞生物学的发展

（1665）（1838—1839）（1892）（1965）

R.HookeSchleiden、SchwannHertiwigDeRobertis

一、细胞的发现（discoveryofcell）

二、细胞学说的建立及其意义（Thecelltheory）

1838年，德国植物学家施莱登（J.Schleiden）关于植物细胞的工作，发表了《植物发生论》一文（BeitragezurPhytogenesis）.

1839年，德国动物学家施旺（T.Shwann）关于动物细胞的工作，发表了《关于动植物的结构和生长一致性的显微研究》一文，论证了所有动物体也是由细胞组成的，并作为一种系统地科学理论提出了细胞学说。

○1细胞是生物体的基本结构单位（单细胞生物，一个细胞就是一个个体）；

○2细胞是生物体最基本的代谢功能单位（动、植物的各种细胞具有共同的基本构造、基本特性，按共同规律发育，有共同的生命过程）；

○3细胞只能通过细胞分裂而来。

三、细胞学的诞生（细胞学的经典时期和实验细胞学时期）

1原生质理论的提出

2关于细胞分裂的研究

3重要细胞器的发现

4遗传学方面的成就

四、细胞生物学的兴起

1965年，D.Robetis将他原著的《普通细胞学》更名为《细胞生物学》（第四版），率先提出这一概念。

五、分子细胞生物学

参考资料

1庄孝惠从胡克到细胞生物学，细胞生物学杂志，1987，2

2王亚辉细胞生物学的发展历史和现状，细胞生物学杂志1986，1

3王亚辉细胞生物学的趋向和发展战略，大自然探索，1987，6（27）12~17

第二章细胞基本知识概要

教学目的1掌握有关细胞的几个概念（细胞、原生质、细胞器等）和几个问题；

2了解细胞的共同特征；各种化学成分在细胞中的造形等；

3真、原核细胞的一般结构特点。

教学重点和难点真、原核细胞的主要区别

讲授与讨论

第一节细胞的基本概念

一、细胞和原生质的概念

（一）细胞：细胞是由膜包围的，能进行独立繁殖的最小原生质团，是生命活动的基本单位，是生物体最基本的形态结构和功能活动单位。

（二）原生质（Protoplasm）：指细胞内所含有的生活物质（构成细胞的生活物质），真核细胞包括细胞膜、细胞质和细胞核。

细胞质（Cytoplasm），指质膜以内核以外的原生质。它不是匀质的，其结构大体划分为两部分，一部分是有形结构，称为细胞器（Organelle），另一部分是可溶相，称细胞质基质（Cytoplasmicmiatrix）。

细胞器（Organelle）：指存在于细胞中，用光镜或电镜能够分辩出的，具有一定形态特点，并执行特定功能的结构。

细胞质基质（Gytoplasmicmatrix），是细胞质的可溶相，是作为细胞器的环境而存在的。

细胞核（nucleus）：遗传物质的集中区域，在原核生物细胞称拟核（nucleoid）或类核区。

第二节非细胞形态的生命体——病毒（略）

第三节原核细胞与真核细胞

原核细胞（Prokaryoticcell）具有两大特点：

○1遗传信息量少（仅有一个环状DNA）○2无膜围细胞器及核膜

1、最小、最简单的细胞——支原体（mycoplasma）

为何说支原体是最小的细胞？

2、原核细胞的两个代表——细菌和蓝藻

细菌（bacteria，bacterium）主要来自对大肠杆菌（E.coli）的研究。

细菌是原核细胞的典型代表，特点是：无典型的细胞核，有细胞壁，细胞质中除核糖体外无其它细胞器。

蓝藻（Blue-greenalgae）

又称蓝绿藻或蓝细菌，是绿色植物中最原始的自养类型，含有兰色素、红色素、黄色素、叶绿素等，故不一定都是兰色。

第四节真核细胞基本知识概要

大约在12—16亿年前在地球上出现，是具有典型细胞核和核膜、核仁，体积较大，结构较复杂，进化程度较高的一类细胞。

一、真核细胞的基本结构体系

生物膜系统以脂质及蛋白质成分为基础构建而成。

遗传信息表达结构系统以核酸与蛋白质为主要成分构建而成。

细胞骨架系统由特异蛋白质分子装配而成。

综合原核细胞和真核细胞的特点，二者的根本区别可归纳为下面两条：

第一，细胞膜系统的分化与演变

真核细胞以膜分化为基础，分化为结构更精细，功能更专一的单位——各种膜围细胞器，使细胞内部结构与职能分工。而原核细胞无此情况。

第二，遗传信息量大与遗传装置的复杂化

真核细胞的遗传信息可达上万个基因，并具重复序列，染色体功能具二倍性或多倍性。原核细胞为单倍性。仅为一条环状DNA分子，细菌只有几千个基因。

二、细胞的大小及其分析

原核细胞多在1—10或1—5μm，细菌多在3—4μm，支原体只有0.1μm。

动物细胞多在（10—100μm，20—30μm，15—70μm）。最大的细胞要属鸵鸟卵，可达10cm，卵黄只有5cm。隆鸟卵直径可达20cm。

那么，细胞的大小是怎样决定的呢？

首先，细胞的核质比与细胞大小有关，决定细胞上限。

其次，细胞的相对表面积与细胞大小有关。

最后，细胞内物质的交流与细胞大小有关。

三、细胞形态结构与功能的关系

细胞的形态结构与功能的相关性和一致性是多数细胞的共性。

四、细胞的化学成分及在原生质中的造形

膜系统：主要以脂蛋白构成，包括细胞膜、核膜，以及一系列细胞器膜。

颗粒系统：由蛋白质或核蛋白组成，如存在于线粒体内膜上的基本颗粒（F因子），亦称内膜亚单位（innermembranesubunits）和核糖核蛋白体，分别是氧化磷酸化和合成蛋白质的场所。

纤维系统：由蛋白质和核酸组成。

第三章细胞生物学研究方法

（研究方法和工具）

教学目的1了解主要工具和常用方法，侧重掌握基本原理和基本应用；

2认识工具和方法与学科发展的相关性。

教学重点仪器方法的基本原理和基本应用

教学难点电镜制样及分子杂交技术

教学方法讲授、参观

第一节细胞形态结构的观察方法

一、光学显微镜技术

（一）普通复式光学显微镜技术

（二）荧光显微镜（fluorescencemicroscope）

（三）暗视野显微镜（darkfieldmicroscope）

（四）相差显微镜（phasecontrastmicroscope）

（五）激光共焦点扫描显微镜（略）

（六）微分干涉显微镜（略）

二、电子显微镜技术

（一）电镜设计原理及分类

（二）电镜的种类

（三）透射式电子显微镜

（四）光镜与电镜的主要区别

综上可见，电镜与光镜区别主要在于：

（1）光源不同光镜为可见光或紫外线；电镜为电子束

（2）透镜不同光镜为玻璃；电镜为电磁透镜

（3）真空

（4）显示记录系统

（五）扫描式电子显微镜

扫描电镜的特点

扫描电镜的基本结构

（六）电镜样品制备技术

1超薄切片技术（详见光盘）

2负染色（negativestaining）技术

3核酸大分子的制样技术（大分子铺展技术，Kleinschmidt法）

4整装细胞电镜技术

5电子显微镜细胞化学技术

是能过特殊的细胞化学反应，使待测物转变成某种不溶性的电子致密沉淀物，并利用电镜在超微结构水平上对产物进行定位和半定量。主要有各种酶的定位，其次是核酸、蛋白质、脂肪、碳水化合物等的定位。

酶的化学定位技术

免疫细胞化学电镜技术（见本编第十一章）。

6冰冻蚀刻技术（freezeetching）

7扫描式电镜制样技术

第二节细胞组分的分析方法

（生化分析法）

一、超速离心技术分离细胞（组分）及生物大分子

（一）各种离心技术——分离细胞器、生物大分子

离心方法：根据分离对象和目的不同，采用不同的离心方法，制备离心和分析离心。

（1）制备离心(preparativecentrifuge)分离和纯化亚细胞成分和大分子，目的是制备样品。

差速离心法：是最常用的方法，根据不同离心速度所产生的不同离心力，将各种亚细胞组分和各种颗粒分离开来。

密度梯度离心（区带离心法）

a、速率区带离心法（蔗糖密度梯度离心）

b、等密度梯度离心法（氯化铯密度梯度离心）

（2）分析离心（analyticalcentrifuge）分析和测定制剂中纯的大分子的种类和性质，如浮力密度和分子量、生物大分子的构象变化、分析样品的纯度等。此工作必须是在制备离心的基础上进行。

（二）细胞的选择性抽提（分离蛋白质、核酸大分子）

（三）柱层析的技术（分析蛋白质和核酸）

（四）电泳技术

（五）色谱分析技术（色谱学——分离纯化样品）

（六）氨基酸分析技术

二、细胞化学技术

（一）组织化学和细胞化学法

基本原理：利用某些化学物质和某些细胞成分发生化学结合，从而显示出一定的颜色，进行定性和定位研究的方法。

（二）免疫细胞化学法（特异蛋白抗原的定位与定性）

基本原理：此项技术是将免疫学中抗原、抗体以及补体间专一性反应结合显微或亚显微组织学的一些研究方法的统称。是免疫学原理与光镜或电镜技术的结合。

抗体的标记

抗体标记的方法很多，有铁蛋白标记法、免疫酶标记法、免疫金标记法、杂交抗体标记法、搭桥标记法、同位素标记法、荧光标记法等。

三、细胞内特异核酸序列的定位与定性

（一）DNA序列测定技术

（二）核酸分子杂交技术（moleculargbridizationtechnique）

（特异核酸的定性定位）

概念两条具有互补核酸顺序的单链核酸分子片断，在适当的实验条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双链分子的过程。

印迹杂交(blothybridization)

用已知的带有标记的特定核酸分子（或抗体、蛋白质分子）作为探针，与通过印迹被转移的核酸分子（或抗原、蛋白质分子）片段杂交的过程。

（1）Southernblotting（DNA印迹法）将分离的DNA片段通过毛细管作用转移到硝基纤维素膜上，用DNA探针与之杂交的过程。是以发明此项技术的人名命名的（E?M?Southern）。是体外分析特异DNA序列的方法。

（2）RNA印迹术（Northernblotting）

（3）蛋白质印迹术（Westernblotting）

（4）Easternblotting（Westernblotting的变形）当用凝胶进行抗原抗体反应，再进行印迹的方法）。

（5）DNA与蛋白质的体外吸附技术（Southwesternblotting）结合了Western印迹与southern印迹两种实验方法的特点而设计的一种检测序列特异性DNA结合蛋白的实验方法（翟P51）。

（6）原位杂交（Insituhybridization）用已知的带有标记的特定核酸分子作为探针，来测定与之成互补关系的染色体DNA区段的位置。

四、电镜放射自显影技术

原理这是一种利用放射性同位素作为标记物对细胞化学物质进行超显微结构的定位、定性或定量的实验技术。

五、定量细胞化学分析技术

（一）显微分光光度测定技术

第三节细胞培养、细胞工程与显微操作技术

一、细胞培养

（一）动物细胞培养

（二）植物细胞的培养包括单倍体细胞的培养和原生质体培养

“全能性”—指生物体的每一生活细胞，处于适当条件下，都具有进行独立生长发育，并形成一个完整生物个体的能力。

1单倍体细胞的培养

2原生质体培养

3植物细胞杂交（融合）

（三）突变株和非细胞体系在细胞生物学研究中的应用

二、细胞工程

概念应用细胞生物学和分子生物学的理论、方法和技术，按人们的预定设计蓝图有计划的保存、改变和创造细胞遗传物质，以产生新的物种和品系，或大规模培养组织细胞以获得生物产品。

该技术在细胞和亚细胞水平上开辟了基因重组的新途径，不需分离、提纯、剪切、拼接等基因操作，只需将遗传物质直接转入受体细胞，就可形成杂交细胞。

主要技术领域

细胞（组织、器官）培养：invivo在体、活体、生物体内

invitro离体、生物体外

细胞融合（体细胞杂交、细胞并合）

细胞拆合（细胞质工程、细胞器移植）

染色体（组）工程

繁殖生物学技术（胚胎冷冻技术、试管婴儿、生物复制、胚胎移植、发育工程、胚胎工程、胚胎分割技术、胚胎融合技术、嵌合体）

组分移植技术将细胞的组分（核、质、染色体、甚至基因）直接移植到另一个细胞中去的技术

第四章细胞膜与细胞表面

教学目的1掌握质膜的分子模型

2了解流动镶嵌模型的主要特点

3掌握细胞连接的方式和特点

教学重点流动镶嵌模型结构要点

教学难点细胞连接的超微结构

教学方法讲授、讨论

第一节细胞膜与细胞表面的特化结构

一、细胞膜的结构模型

细胞膜（Cellmembrane）指围绕在细胞最外层，由脂类和蛋白质组成的薄膜。是所有细胞共有的包被（原生质，细胞质）的一层膜。又有原生质膜（Plasmalemma）之称，通常简称质膜（Plasmamembrane）。

1、双分子片层模型（bimolecularleafletmodel）

这一模型是Danielli&Davson于1935年提出的，因此又称Danielli&davson模型。

2、单位膜模型（Theunitmembranemodel）

这个模型是1957~1959年，英国伦敦大学的罗伯逊（Robertson），通过电镜观察后提出的。

3、流动镶嵌模型（fluidmosaicmodel）

这个模型的主要内容可归纳为：

○1脂类物质以双分子层排列，构成膜的骨架；

○2镶嵌性蛋白质分子镶嵌在脂双层的网架中。存在方式有内在蛋白（整体蛋白）和外在蛋白（边周蛋白）。○3不对称性蛋白质分子和脂质分子在膜上的分布具不对称性，膜两侧的分子性质和结构不同。

○4流动性脂质双分子层和蛋白质是可以流动或运动的

脂质分子的运动性：有实验表明，类脂分子的脂肪酸链部分在正常生理状态下，可作多种形式的运动：旋转、振荡、摆动、翻转，同时整个分子可作侧向扩散运动。

蛋白质分子的运动性：有侧向扩散和旋转两种方式，受周围膜质性质和相态的制约。荧光抗体免疫标记可观察。

综合流动镶嵌模型之内容，不难看出，其突出特点在于，流动性、镶嵌性、不对称性和蛋白质极性。由此造成各种膜的功能差异。

4、晶格镶嵌模型（蛋白液晶膜模型）

5、板块镶嵌模型

最近有人提出脂筏模型（Lipidraftsmodel）。目前认为，这些模型并无本质区别，只是对流动镶嵌模型的进一步补充说明，不能作为膜的通用模型。

二、质膜的化学组成

细胞膜几乎全都是脂类（50%）和蛋白质（40%），仅含少量糖类（2~10%糖脂和糖蛋白）和微量核酸（细菌质膜、核膜、mit、chl内膜），结合方式及存在意义尚不清楚。

（一）膜脂（Lipids）

（二）蛋白质（Protein）（膜蛋白）

（三）糖类（Carbohydrate）

三、质膜的功能（functionofc.m）

质膜与外界环境隔离开，通过它保持着一个相对稳定的细胞内环境，在细胞生命活动中行使着多种重要功能，概括为：物质运输，能量转换，信息传递，细胞识别，细胞连接，代谢调控，膜电位维持等。

四、骨架与细胞表面的特化结构

膜骨架（membraneassociatedcytoskeleton）

指质膜下与膜蛋白相连的由纤维蛋白组成的网架结构，参与维持细胞质膜的形状并协助质膜完成多种生理机能。早期有人称膜下溶胶层，实质为膜骨架。

第二节细胞连接

细胞连接可分为三大类：即

一、封闭连接

紧密连接（tightjunction）为典型的封闭连接，又称结合小带或封闭小带（zonulaoceludens），是相邻两细胞膜紧紧靠在一起的连接方式，中间无空隙，并且两质膜外表面互相融合，所以电镜下观察呈三暗夹两明的五层结构。

二、锚定连接

通过这种连接方式将相邻细胞的骨架系统或将细胞与基质相连成一个坚挺、有序的细胞群体。

1、桥粒和半桥粒（与中间纤维有关）

○1桥粒（desmosme，maculaeadherens）指相邻细胞间形成的“钮扣”样结构，联结处约有30nm的间隙，间隙充满丝状的粘多糖性物质，其中有一层电子密度较高的接触层，或称中央层（桥粒蛋白）将间隙等分为二。

○2半桥粒：位于表皮基细胞与基膜接触的一面，由于相对应的为基膜而不是细胞，因而称半桥粒（hemidesmosome）。

2、粘着带与粘着斑（与肌动蛋白丝有关）

○1粘着带介于紧密连接与桥粒之间，亦称为中间连接。是相邻细胞间有较宽（15~20nm）间隙的一种联结方式。

○2粘着斑是肌动蛋白纤维与细胞外基质之间的连接方式。如贴壁细胞的贴壁行为，通过粘着斑贴在瓶壁上。

三、通讯连接

1间隙连接（gapjunction）

又有缝隙联结或接合斑（nexus）、缝管连接或封闭筋膜（fasciaoccludens）之称，是相邻细胞间有2-3nm间隙的一种连接方式。电镜下观察联结处呈四暗夹三明的七层结构之称。

2植物细胞的连接——胞间连丝（Plasmodesma）

在植物细胞，两相邻细胞的壁之间靠一层称作胞间层（中胶层middletamella）的果胶类（Pectin）物质粘合在起，但在有些部位，细胞壁及胞间层并不连续，在此有原生质丝通过而勾通相邻两细胞，这便是植物细胞特有的连接方式——胞间连丝，是指相邻植物细胞穿通细胞壁的细胞质通路。

3化学突触：是可兴奋细胞之间的连接方式，通过释放神经递质（如乙酰胆碱）来传导神经冲动，电信号→化学信号→电信号

（四）细胞表面的粘着因子

第三节细胞外被与细胞外基质

一、细胞外被（Cellcoat）

又称糖萼（glgcocalyx），指由细胞产生的、与细胞膜外表面联系密切的粘多糖类物质。由于它林立在细胞表面，与质膜中蛋白质和脂类结合，故可认为它是质膜的组成部分，但有其独立性。有人将细胞外被与质膜比喻成“毛”与“皮”的关系。

二、细胞外基质（extracellularmatrix）

分布于细胞外空间（如细胞之间或细胞表面），由细胞分泌的蛋白和多糖构成的网络结构。与膜关系不密切，功能在于：○1细胞间粘着；○2保护作用；○3维持细胞外环境（调节细胞周围的物质浓度）；○4过滤作用等等。在形态发生中作用重大，包括：细胞迁移、增殖、形态变化、分化、保护、组建等。

主要包括四大类物质

（一）胶原（collagen）：属糖蛋白类物质，为纤维状蛋白多聚体，含量最高，具刚性，抗张强度大，构成细胞外基质的骨架体系。

（二）氨基聚糖（glycosaminoglycanGAC）和蛋白聚糖（proteoglycan，PG）（粘多糖，粘蛋白）

（三）层粘连蛋白（Lamimin，LN）（较大的糖蛋白分子）和纤粘连蛋白（fibronectin，FN）（由两条或更多的肽链及一些低聚糖组成。对细胞迁移作用大）。

（四）弹性蛋白

参考文献：

1、方思明间隙连接和细胞间物质交流，细胞生物学杂志，1984.1

2、岳奎元细胞连接，细胞生物学杂志，1985.4

3、岳奎元细胞膜的不对称性和流动性，生物学通报，1986.8

4、岳奎元细胞膜钠—钾泵生理学，生物通报，86.8

5、徐信细胞连结，生物学通报，86.7

6、林元藻生物膜的主动转运功能，同上

7、杨福愉生物膜的流动性，生物化学与生物物理进展，1981.5第五章物质的跨膜运输与信号传递

第一节物质的跨膜运输

一、被动运输（Passivetransport）

指通过简单扩散或协助扩散实现物质从浓度高处经质膜向浓度低处运输的方式。运输速率依赖于膜两侧被运送物质的浓度差及其分子大小、电荷性质等。不需要细胞代谢供应能量。

（一）简单扩散（simplediffusion）

指物质顺浓度梯度的扩散，不需要消耗细胞本身的代谢能，也不需专一的载体（膜蛋白），只要物质在膜两侧保持一定的浓度差，物质便扩散穿膜，又称自由扩散（freediffusion）。特点：

（二）协助扩散（facilitateddiffusion）

又称促进扩散。绝大多数在细胞代谢上非常重要的生物分子，如各种极性分子和某些无机离子（糖、氨基酸、核苷酸及细胞代谢物等）是不溶于脂的（非脂溶性物质），但它们可以有效地进入细胞，只是扩散速度并不总是随浓度梯度的增大而加快，而是在一定限度内同物质浓度成正比，超过一定限度，即使提高浓度差，扩散速度也不会再高。分析知它们是通过另一种被动运输方式——协助扩散进行的。这种运输方式除了依赖物质浓度差以外，还必须依赖于专一性的膜运输蛋白（转运膜蛋白）。

膜运输蛋白（memberantransportpr.）:镶嵌在质膜上的、与物质运输有关的跨膜蛋白质称膜运输蛋白，是一种横穿脂双层的跨膜分子，包括两类：

1隧道蛋白（channelpr.）（通道蛋白、槽蛋白）：以其亲水区构成亲水通道和离子通道，允许水及一定大小和电荷的离子通过。

离子通道（亦称门孔、门隧道）通常呈关闭状态，只有当膜电位或化学信号物质刺激后才开启通道。膜电位刺激开放的离子通道称电位门通道；化学信号物质刺激开放的通道称配体门通道。

2载体蛋白（carrierpr.）：识别结合特异性底物后通过构象变化实现物质转移。类似于酶与底物的作用，故又称“透性酶”（Permease）。

综上，凡是借助于载体蛋白和通道蛋白顺浓度梯度的物质运输方式称facilitateddiffusion、或促进扩散或易化扩散。葡萄糖进入红细胞，进入小肠上皮细胞通常以这种方式。

协助扩散有三个特点：○1低浓度时比简单扩散速度快；○2存在最大转运速度；○3有转运膜蛋白存在，故具有选择性、特异性。

二、主动运输（activetransport）

又称代谢关联运输（metabolicallylinkedtramsport），是物质运输的主要方式。包括由ATP直接提供能量和间接提供能量两种运输方式。

（一）ATP直接提供能量的主动运输—离子泵

所谓离子泵是一种位于细胞膜上的ATP酶，是一（穿膜）内在蛋白，能将ATP水解成ADP+pi，同时释放能量，ATP酶构象发生变化，带来离子的转位，将物质逆浓度梯度运输。

在质膜上，作为“泵”的ATP酶很多，它们都具有专一性，不同的ATP酶运输不同的物质或离子，因此，我们可以分别称它们为某物质的泵。如运输Ca++，叫钙泵（肌质网膜）；运输H+，叫氢泵（细菌质膜）等等，质子泵又分为P型（真核质膜上）、V型（溶酶体膜）、H+—ATP酶（线、叶、细菌质膜）。现以钠—钾泵为例，说明离子泵的工作机制。

Na+—K+泵是存在于质膜上的由∝和β二个亚基组成的蛋白质。在有Na+、K+、Mg2+存在时就能把ATP水解成ADP+Pi，同时，把Na+和K+以反浓度梯度方向进行穿膜运输。可见Na+-K+泵是一种由Mg2+激活的Na+-K+-ATP酶。1957年，J.skou首先发现并阐述其机制，一般设想：

在膜内侧，Na+、Mg2+与酶（∝亚基）结合，促使酶与ATP反应，释放H3PO4，并与酶结合，引起酶构象变化，与Na+结合部位转向膜外侧。此时的构象亲K+排Na+，当与K+结合后，使酶脱去H3PO4，酶构象恢复，结合K+的一面转向膜内，此时构象亲Na+排K+，这样反复进行，不断在细胞内积累K+，将Na+排出细胞外。

（二）间接利用ATP的主动运输——伴随运输（或称协同运输，co-transport）

指一种溶质的传递要同时依赖于另一种溶质的传递。如果两种溶质的传递方向相同，称同向运输（symport），如果方向彼此相反，则称反向运输（antiport）。

（三）基团转移

早见于细菌，也见于动物细胞。靠共价修饰（需能）

（四）物质的跨膜转运与膜电位

○1调节渗透压；○2某些物质的吸收；○3产生膜电位；○4激活某些生化反应；如细胞内高浓度K+是核糖体合成蛋白质及糖孝解过程中重要酶活动的必要条件。

三、胞吞与胞吐作用

还有一种物质运输的方式不同于此，是细胞膜将外来物包起来送入细胞或者把细胞产物包起来送出细胞。前者称胞吞作用，后者称胞吐作用，总称吞排作用（Cytosis）。这样的物质运输方式称膜泡运输（transportbyvesicleformation），又称批量运输（bulktransport）。大分子物质及颗粒物质常以此方式进出细胞。

（一）胞饮作用与吞噬作用

某些物质与膜上特异蛋白质结合，然后质膜内陷形成囊泡，称胞吞泡（endocyticvesicle）。将物质包在里面，最后从质膜上分离下来形成小泡，进入细胞内部。根据内吞的物质性质，将其分为：

吞噬作用（Phagocytosis）吞噬泡，内吞较大固体物质，如颗粒白细胞、巨噬细胞。

胞饮作用（Pinocytosis）胞饮泡，内吞液体或极小颗粒，白细胞、肾细胞、小肠上皮细胞、植物根细胞。

（二）胞吐作用（exocytosis）又称外卸

某些代谢废物及细胞分泌物形成小泡从细胞内部移至细胞表面，与质膜融合后将物质排出。如：小肠上皮的杯状细胞向肠腔中分泌粘液，经溶酶体消化处理后的残渣排向细胞外等过程。

关于衣被小泡运输（Coatedvesicle）

存在于真核细胞中，具有毛刺状外表面的一类小泡（50—250nm）。可以是内膜系统的有关细胞器芽生而成，也可以是由质膜内陷，断裂形成，进行细胞器间的物质运输。

（三）受体介导的胞吞作用（receptor—mediatedendocytosis）

某些大分子的内吞往往首先同质膜上的受体结合，然后质膜内陷形成衣被小窝，继之形成衣被小泡，这种内吞方式称受体介导的胞吞作用。

需说明的是，膜泡运输时由于质膜内陷或外凸也需消耗能量，故可看作是一种主动运输方式。

第二节细胞通讯与信号传递

一、细胞通讯与细胞识别

（一）细胞通讯（cellcommunication）指一个细胞发出的信息通过介质传递到另一个细胞产生相应的反应。

（二）细胞识别与信号通路（cellrecognition）

细胞识别的现代概念是：细胞识别是细胞通过其表面的特殊受体与胞外信号物质分子（配体）选择性的相互作用，从而导致胞内一系列生理生化变化，最终表现为细胞整体的生物学效应，这种现象或过程称为细胞识别。

可见，细胞识别是细胞通讯的一个重要环节。细胞接受外界信号，通过一整套特定机制，将胞外信号转化为胞内信号，最终调节特定基因的表达，引起细胞的应答反应，这种反应系列称之为细胞信号通路（Signalingpathway）。细胞识别正是通过各种不同的信号通路实现的。

（三）细胞的信号分子与受体

1细胞的信号分子

信号分子，即配基（Ligands）：指能够被受体识别的各种类型的大、小分子物质。又有信号分子（Signalmolecule）和被识别子（cognon）之称。

亲脂性信号分子：甾类激素、甲状腺素。直接进入细胞与细胞质或核中受体结合，形成激素受体复合物，调节基因表达。

亲水性信号分子：神经递质、生长因子、多数激素等，不能直接进入细胞，先与膜上受体结合，再经信号转换机制，在细胞内产生→第二信使（cAMP和肌醇磷脂），或激活蛋白激酶或蛋白磷酸酶的活性，引起细胞的应答反应。

20世纪80年代发现一氧化氮（NO）是一种重要的信号分子和效应分子，它能进入细胞直接激活效应酶，参与体内重多的生理病理过程，成为人们关注的“明星分子”。

2受体（receptor）

受体的概念最早是1910年Ehrlich提出的，近来有人建议改称“识别子”（cognor）。

受体都是蛋白质大分子（多为糖蛋白），一般至少包括两个结构功能区域，即与配体结合的区域及产生效应的区域。组成糖链的单糖种类、数量及排列方式不同，从而形成该细胞特定的“指纹”，是细胞之间、细胞与其他大分子之间联络的“文字”和“语言”。

根据靶细胞上受体存在的部位，可将受体分为两类，即细胞内受体（受胞外亲脂性信号分子的激活）和细胞表面受体（受胞外亲水性信号分子的激活）。二着通过不同的机制介导不同的信号传递通路。

3第二信使与分子开关

通过分泌化学信号进行细胞间通讯的过程：化学信号分子的合成→信号细胞释放化学信号分子→转移至靶细胞→被受体识别→信息跨膜传递→引起细胞内生物学效应。

第二信使（secondmessenger）70年代初，Sutherland及其合作着提出激素作用的第二信使学说，认为胞外化学物质（第一信使）不能进入细胞，它作用于细胞表面受体，而导致产生胞内第二信使，从而激发一系列生化反应，最后产生一定的生理效应，第二信使降解使其信号作用终止。

分子开关（molecularswitches）在细胞内一系列信号传递的级联反应中，必须有正、负两种相反相成的反馈机制进行精确控制，即对每一步反应既要求有激活机制又必然要求有相应的失活机制。

二、通过细胞内受体介导的信号传递

亲脂性小分子（甾类激素、甲状腺素）穿膜进入细胞，通过与细胞内（细胞质或核）受体结合传递信号。

这类受体有三个结构域：1、C末端区——结合激素；2、中部——结合DNA；3、N末端区——激活基因转录。

三、通过细胞表面受体介导的信号跨膜传递

亲水性信号分子（神经递质、蛋白激素、生长因子等）一般不能直接进入细胞，而是通过与膜上特异受体结合对靶细胞产生效应。

根据信号转导机制和受体蛋白类型的不同，细胞表面受体分属三大家族：

1、离子通道偶联的受体

是由多亚基组成的受体—离子通道复合体，本身既有信号结合位点，又是离子通道。

2、G蛋白偶联的受体

这类受体与酶或离子通道的作用要通过与GTP结合的调节蛋白（G蛋白）相耦联，在细胞内产生第二信使，从而将外界信号跨膜传递到细胞内进而影响细胞生物学效应。

由G蛋白偶联受体所介导的细胞信号通路主要包括两类：

Ⅰ、cAMP信号通路

激素（第一信使）→激活受体→进一步激活腺苷酸环化酶，使ATP→cAMP（第二信使），然后通过激活一种或几种蛋白激酶来促进蛋白酶的合成，促进细胞分化，抑制细胞分裂。

受体和腺苷酸环化酶由G蛋白耦连在一起，并使细胞外信号跨膜转换成细胞内信号—cAMP。

Ⅱ、磷脂酰肌醇信号通路

外界信号分子识别并结合膜表面受体，激活PIP2磷酸二酯酶（PIC）催化使4，5一二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2，存在于真核细胞膜的成分）水解成1，4，5一三磷酸肌醇和（IP3）和二酰基甘油（DG）两个第二信使，IP3可引起胞内Ca2+升高，通过结合钙调素并使之构象改变，进而与受体酶结合形成钙调素—酶复合物，进一步调节受钙调素调节的酶的活性，最后引起对胞外信号的应答。

DG可激活蛋白激酶C（PKC），使细胞内PH升高，进而引起对胞外信号的应答。

3、与酶偶联的受体

这类受体一旦被配基（信号分子）活化即具有酶的活性。这类受体均为跨膜蛋白质。

第六章细胞质基质与细胞内膜系统

教学目的：1了解细胞质基质的内容

2掌握内膜系统包括的结构及功能

教学重点：1内质网、高尔基体的结构特点

2溶酶体的发生及功能

教学难点：内膜系统各结构之间的关系

讲授法

第一节细胞质基质（Cytoplasmicmatrix）

概念：此概念在不同阶段从不同角度有不同叫法，概念包括的内容也随观察工具的发展有所变化和完善。反映出对细胞质的认识不断深入。最早的概念称透明质（hyaloplasm），指细胞质中除线粒体、质体等在光镜下所能看到的所有细胞器以外的部分，又称细胞液（Cellsap）。

透明质（细胞液）—→胞质溶胶—→细胞质基质

光镜下可见结构以外的部分离心沉淀物以外部分可分辩结构以外的胶状物质

Cytoplasmicmatrix或growndcytoplasm：指除去能分辩的细胞器和颗粒以外的细胞质部分，是一复杂的高度有组织的胶体系统。

一、化学组成

细胞质基质是细胞真正的内环境，其组成成分复杂。主要含有与中间代谢有关的数千种酶类。故认为它呈复杂的胶体性质，可随环境条件的改变由溶胶变为凝胶状态或者相反，这成为某些细胞运动方式的动力。

二、功能

1、参与各种生化活动（中间代谢过程）

○1蛋白质合成○2脂肪酸合成○3糖的酵解○4糖原代谢○5核苷酸代谢

2、提供离子环境以维持各细胞器的实体完整性。

3、提供底物（原料）以供细胞器行使功能（物质库）。

4、提供物质运输的通路细胞与环境、细胞质与细胞核、细胞器之间的物质运输、能量交换、信息传递等都需通过细胞质基质来完成。

5、影响细胞分化如卵子细胞质对于分化起重要作用。

在细胞质中存有形形色色的细胞器，其中有一些膜围细胞器，它们在结构及功能上彼此相关，甚至连通，共同组成一个庞大而精密复杂的系统——内膜系统。

第二节内膜系统（eudomembranesystem）

概念细胞质中由膜围成的、在结构、功能，乃至发生上有密切关系的小管、小泡和扁囊共同组成的膜系统。主要包括核膜、内质网、高尔基体三大结构以及它们的产物——各种小泡和液泡。

意义内膜系统的出现是真核细胞区别于原核细胞的显著特点之一，其意义在于：大大增加了细胞内膜的表面积，为多种酶特别是多酶体系提供了大面积的结合部位。○1酶系统的隔离与连接○2蛋白质、糖、脂肪的合成○3加工包装运输分泌物○4扩散屏障及膜电位建立○5离子梯度的维持等。

一、内质网（endoplasmicreticulum，ER）

概述1945年，著名超微结构学家K.B.Porter，在电镜下观察组织培养的鸡胚成纤维细胞时，发现有各种大小的管道相连成网状，并多处在细胞质的内质部位，故定名为内质网。虽然以后发现这种细胞器不尽在内质部位，但仍延用至今。这种结构与细胞内物质合成有关，故有细胞的生物合成“工厂”之称。

（一）形态结构特点

ER是交织分布在细胞质中的由膜围成的扁囊或小管状管道系统。基本结构分为三部分：

内质网膜：结构与质膜相同，但比质膜薄（5-6nm），有些部位可与核膜和某些细胞器膜相连，少数能与质膜相连。

（二）类型及分布特点

根据内质网的细胞质面是否附有核糖体将ER分为二类。即：

1粗面内质网（roughendoplasmicreticulum，RER）又称颗粒内质网（Granulare-r-GER），由于它似与细胞核一样能为碱性染料染色，在历史上曾有过所谓核外染色质的叫法。意指内质网膜及附在其上的核糖体。

2光（滑）面内质网（smoothendoplasmicreticulum，SER）表面光滑，无核糖体附着，嗜酸性，在形态上常呈分枝状，小管或小泡的网状结构，很少象RER那样扩大成池，其膜也不如RER膜厚。另外，SER的一端常与RER相连，有时还和高尔基复合体或核膜相连。

（三）内质网的化学组成

分析表明：蛋白质约占2/3（比质膜多），主要是酶类，其中CytP-450是内质网的标记酶。脂类1/3（比质膜少）在滑面内质网高于粗面内质网，主要为磷脂和胆固醇。

（四）内质网的功能

ER是细胞内生物合成的“工厂”，执行一系列的功能，有些功能是由RER或SER单独行使的，有些则是它们共同行使的，为讲述方便，我们分开介绍。

1粗面内质网的功能

（1）蛋白质合成

（2）蛋白质改造及运输

糖蛋白的合成过程：

在细胞中形成的一些分泌颗粒（酶原颗粒），它们的成分多为糖蛋白，蛋白质部分如上所述是在RER膜上的核糖体上合成的，那么蛋白质合成之后，糖链部分是如何添加上去的呢？

在ER腔面：

首先在ER膜的多萜醇磷酸上添加形成（N-乙酰葡糖胺）2—（甘露糖）9—（葡萄糖）3，然后在糖基转移酶作用下将其寡糖芯整批移交给合成中的多肽链天冬酰胺的N原子上（N-连接）。在ER和高尔基池的转运过程中以上寡糖芯被切除只剩下最近端的两个N-乙酰葡糖胺和3个甘露糖。

在Golgibody上：

修剪后依次添加上岩藻糖、半乳糖、N-乙酰葡糖胺、唾液酸，多是加在肽链的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸侧链的OH基上，（O一连接）。

蛋白质的运输：合成改造过的蛋白质如何运送出去呢？通过放射性同位素示踪证明，这些物质必须经过内质网向外运输，从这方面看，RER是物质运输的通道。

○1分泌蛋白的运输——Palademodel

关于分泌蛋白的运输，Palade做了系统的研究，并提出了一般的运输模型——Palademodel。Palade采用了3H-亮氨酸做脉冲标记追踪实验，表明在RER上合成的分泌蛋白，是经由内质网池进入高尔基复合体池，再包装成分泌颗粒排往胞外。

○2少量可溶性蛋白的运输：这种蛋白质在RER上合成后便转入细胞质基质中。

○3膜蛋白：这种蛋白质在RER上合成后，有两条可能途径，一是先进入ER腔中，再靠一定机制入膜，二是不经ER腔而直接入膜，这两种可能都在探讨中。

（2）膜的形成RER膜可不断地进行自身装配和生成。在RER首先合成膜脂和内在蛋白，然后添加上酶、专一性糖和脂类，成为各种功能不同的膜。这一过程称为膜分化（membranedifferentiation）。

2滑面内质网的功能

（1）解毒作用

（2）脂类合成

（3）糖代谢

（4）作为分泌蛋白运输的通路

另外，内质网具有贮积Ca2+的功能。

（五）内质网的发生

内质网是一种非常容易解体，也容易重新形成。关于它的发生目前来说还是个悬而未决的问题，有种种猜测或设想；例如，有人主张ER膜来自核膜，也有人意见相反；

肌质网（Sarcoplasmicreticulum）

是存在于高度特化的细胞——肌纤维中的特化滑面内质网（含有几个细胞核，是一个大的合胞体）。是分布于肌原纤维之间的纵行小管状结构，主要功能是贮积钙离子，在肌肉收缩中起一定作用。（当受到冲动刺激时，可向肌浆中释放钙离子，达到一定浓度，引起肌肉收缩）。

第三节高尔基复合体（Golgicomplex）

高尔基体是内膜系统的一部分，结构复杂，由许多扁囊、小泡、大泡组成，现在称这种复杂的结构为高尔基复合体（Golgicomplex）。

一、形态结构

一个典型的高尔基复合体是由扁平囊泡、小泡和大泡组成的。

1扁平囊泡（saccules）——高尔基囊（Golgisac）

扁囊的凸面靠近核侧，称形成面（formingface）或未成熟面（immatureface），又称顺面（cis）

扁囊的凹面远离核侧，称分泌面（secretingface）或成熟面（maturingface），又称反面（trans）

2高尔基小泡（Golgivesicle）又称微泡或过度小泡。位于主体结构的形成面周围。直径在30~80nm左右，膜厚6nm，有两种类型：一种表面光滑，较多；另一种小泡膜表面有绒毛样层，特称衣被小泡（coatedveside）数量较少。

3高尔基液泡（Golgivacuole）又称浓缩泡（condensingvacuole）或大泡、分泌泡、分泌颗粒。位于主体结构的分泌面周围，直径约在100—500nm。一般认为它们是由扁平泡宽大的末端或成熟面局部膨大而形成，是高尔基复合体加工、包装的分泌产物，由于这些产物的成熟程度不同，造成不同的大泡其内物质的电子密度不同。

二、化学组成

通常：蛋白质约占60%：多为酶类，如：硫氨素焦磷酸酶（TPP酶）（thiaminepyrophosphatase）、糖基转移酶（glycosyltransferase）、酸性磷酸酶及其他溶酶体酶。其中糖基转移酶是高尔基复合体的特征酶，它可以将低聚糖转移到蛋白质上形成糖蛋白。脂类约占40%，主要为胆固醇，甘油三酯等。

三、高尔基体在细胞中的分布特点

四、高尔基复合体的功能

1作为细胞内的加工运输系统，形成分泌物。

实验表明，高尔基复合体类似一个加工厂，对来自内质网的蛋白质、脂类加工改造，然后装配起来，运出细胞。

这一运输途径是目前为多数人接受的，称为膜流动理论。酶原颗粒在细胞表面将内容物排出后，其膜泡可返回高尔基体。这种内膜系统在细胞内移动运转的现象称为膜流（m.flow）

2合成糖蛋白和糖鞘脂，对糖蛋白寡糖链进行修饰。

两类糖基化修饰：糖一般结合在多肽链的4种αα残基上，N—连接连在天冬酰胺的氮原子上。O—连接连在丝、苏、羟脯、羟赖氨酸的羟基上。

3蛋白质的加工改造

有些蛋白质（酶）合成是先形成无生物活性的前体物，再经过加工改造才具备活性，高尔基复合体具备这方面的功能。

4膜的转变功能

5参与植物细胞壁的形成

6参与溶酶体的形成

五、高尔基复合体的发生

Golgjcomplex是一种易变结构，随时可解体和产生。关于它的发生有不同的说法，倾向性看法（普遍认为）：它是由内质网或核膜转变而来的，即：RER失去核糖体，分离成光面膜小泡，由此合并成高尔基池；或者由SER分离出小泡，合并成高尔基池。

第四节溶酶体（Lysosome）

溶酶体几乎存在于所有的动物细胞，植物细胞内的溶酶体，目前意见不一，有人认为植物细胞内有类似溶酶体的结构，而单独称为植物溶酶体，如圆球体、糊粉粒和蛋白质体。液泡也具此功能。溶酶体在各种细胞内的数量与形态差异很大，这是由于各溶酶体分别处于其生理功能的不同发展阶段的缘故。

一、结构及化学组成

电镜下观察，溶酶体是外包一层单位膜的圆泡状结构，平均大小约在0.25~0.8μm（0.2~0.5μm）之间，介于线粒体和微体之间。

溶酶体膜是一典型的单位膜，其化学成分主要是脂蛋白，磷脂含量也较多。这层膜对溶酶体本身所含酶具有抗性，膜一旦破裂，则消化细胞，危及组织，故溶酶体有“自杀袋”之称。

二、溶酶体的类型

第一类：初级溶酶体（Primarylysosome）是指刚从高尔基的边缘膨大分离出来，还未同消化物融合的潜伏状态的溶酶体（不含作用底物）。内容物为均一的酶液，无活性。

第二类：次级溶酶体（Secondarylysosome）指初级溶酶体同消化物融合后，正在进行消化或已经消化后的泡状结构，又称消化泡（digestivevacuole）。

次级溶酶体又因所消化物质的来源和消化程度不同，分为：

○1异体吞噬泡（heterophagicvacuole），异噬小体（heterophagosome）：是初级溶酶体与吞噬小体融合后形成的泡状结构。吞噬小体（phagosome）是细胞内吞异物后形成的泡状结构，又称初级内吞小泡。

○2自体吞噬泡（autophagicvacuole），自噬小体（autophagosome）：是初级溶酶体含有细胞自身的部分物质，（细胞器）进行消化的泡状结构。这部分细胞器可能是衰老的或多余的，这是一种自我保护作用。

○3终末溶酶体（telolysome）、残余小体（residualbody）或残质体，后溶酶体（postlysosome）

次级溶酶体中的物质被消化完毕后，其残渣存在的泡状结构。这时已失去酶活性或酶活性极弱。异噬小体和自噬小体是正行使消化功能的次级溶酶体，而后溶酶体则是已经行使完消化功能的结构。

三、溶酶体功能

1正常消化和防御作用

2自体吞噬作用——暂渡“危机”

3细胞的自溶作用——保证发育

4溶酶体与细胞病理（实属溶酶体功能异常）

四、溶酶体的来源（发生）

关于溶酶体的来源，目前有两种观点：

○1来自ER和Golgibody

多数学者认为，溶酶体和其它分泌颗粒一样，其内含物是在RER上合成，输入到Golgi区，包上膜游离下来便成为溶酶体。

五、微体（microbody）

微体也是一种由单位膜围成的细胞器，在大小上很难与溶酶体相区别，只是所含酶类不同。

微体是一类含有氧化酶、过氧化物酶或过氧化氢酶的细胞器，在形态上有卵圆形、哑铃形、圆球形等。

在动、植物细胞中，普遍存在两种微体，即过氧化物酶和乙醛酸循环体。

1过氧化物酶体（Peroxisome）

存在于动物细胞和高等植物的叶肉细胞中，含较多氧化酶。其主要功能表现在：

（1）解毒作用：主要体现在动物细胞，这种微体含有与生成H2O2有关的酶，也含有分解H2O2的过氧化氢酶，将代谢过程中产生的对细胞有毒害的H2O2分解。

（2）分解脂肪酸等高能分子，向细胞直接提供热能。

（3）与胆固醇代谢有关。

（4）执行光呼吸（乙醇酸代谢）：这一功能体现在植物细胞。过氧化物酶体是乙醇酸氧化的场所，氧化的结果是摄取氧，释放CO2，这一过程只能在光照下，与叶绿体、线粒体联合进行，称为光呼吸（photorespiration））

2乙酰酸循环体（glyoxysome）

仅存在于高等植物细胞中，参与脂类代谢过程，含有同乙酰酸循环有关的酶，也含有过氧化物酶中的酶。

种子萌发时，乙酰酸循环体降解→脂肪→糖

这一微体的主要功能是蔗糖异生作用，整个过程涉及三个细胞器、两个主要过程。

第五节细胞内蛋白质的分选及细胞结构的装配

一、信号假说与蛋白质分选信号

分泌蛋白合成的信号假说（Signalhypothesis）

这一假说是1975年正式提出的，但近几年来有不同学者（美国Blobel，西德Meyer）对其进行修改补充，下面将这方面问题加以综合介绍。

（1）编码分泌蛋白的mRNA，在起始密码子AUG之后，紧跟着一组特定的信号密码子（约有45-90、48-78个核苷酸）。编码一段多肽的mRNA

（2）多肽链的开始合成在游离核糖体上，信号密码子转译信号肽（signalpeptide，疏水性āā占优势），约有15-30个氨基酸（16-26）。

（3）在RER膜上有信号识别蛋白（signalrecognitionprotein，SRP），可以释放到细胞质中去，识别正在合成信号肽的核糖体，并与之结合，合成暂停，引导核糖体与ER膜结合，合成继续。其上有核糖体亲合蛋白Ⅰ、Ⅱ（实际上是核糖体受体蛋白）以及SRP受体，又称停泊蛋白（docking.P）。

（4）核糖体-SRP复合物与RER膜上的核糖体受体蛋白（SRP受体）有识别能力，并相互作用，使RER形成隧道，SRP受体重新启动暂时终止的肽链继续合成，SRP释放。合成的多肽链通过隧道进入内质网池。

（5）信号肽已无用，被位于RER膜内表面的信号肽酶切掉（Signalpeptidase）。

（6）多肽链继续生长，直至合成完毕。

（7）在一种分离因子作用下，核糖体脱离开膜，隧道封闭。

二、蛋白质分选的基本途径与类型（核编码蛋白质如何进入线粒体、叶绿体）

（1）在细胞质基质中合成多肽前体物；

（2）前体物同细胞器表面受体结合；

（3）穿膜进入细胞器内；

（4）前体物被加工成成熟多肽。

前体物的穿膜活动也符合信号假说原理。即，这些前体物具有氨基端顺序或肽链内部顺序——信号肽（特称导肽，Leaderpeptide，高度疏水性），靠此与细胞器膜上的信号肽顺序受体结合，穿膜进入细胞器，被信号肽酶切除信号肽，参与细胞器建成或功能活动。

从以上看出，决定新合成的多肽转移到细胞的哪个部位，是存在于多肽本身的某种信息。如信号肽，导肽等。但只有这一条还不够，还必须有能识别正在合成多肽的某些蛋白质分子，以帮助多肽的转运，折叠或装配，这一类分子本身并不参与最终产物的形成，特称为分子伴娘（molecularchaperones），如信号识别颗粒（SRP）。

三、膜泡运输

（一）网格蛋白有被小泡

负责蛋白质从高尔基体的TGN向质膜、胞内体或溶酶体和植物液泡运输。另外，受体介导的内吞负责将胞外物质运往胞内等。

（二）COPII有被小泡

负责从ER到高尔基体的物质运输。

（三）COPI有被小泡

负责回收转运内质网逃逸蛋白返回内质网（“开放的监狱”）。第七章细胞的能量转换—线粒体和叶绿体

教学目的：掌握线粒体、叶绿体的超微结构及功能

教学重点：1线粒体、叶绿体的超微结构

2化学渗透学说

3线粒体、叶绿体的半自主性

教学难点：线粒体、叶绿体的超微结构及功能的关系

讲授与讨论

第一节线粒体与氧化磷酸化

一、线粒体形态、大小、数目和分布

二、线粒体的超微结构

本世纪50年代后，在电镜下观察研究线粒体的结构问题。是由双层单位膜套叠成的所谓“囊中之囊”，在空间结构上人为地划分为四大部分，即外膜、内膜、外室、内室。

（一）外膜（outermembrane）

指包围在线粒体最外面的一层膜，看上去平整光滑而具有弹性，膜厚约6nm。对各种小分子物质（分子量在10000doldon以内，如电解质、水、蔗糖等）的通透性较高，有人认为外膜上具有小孔（ф2~3nm）。

（二）内膜（innermembrane）

也是一单位膜，约厚6~8nm。内膜不同于外膜。首先是在结构上，内膜不是平滑的，而是由许多向线粒体腔内的突起（褶叠或小管），被称为“线粒体嵴”（mitochondriacristae），是线粒体最富有标志性的结构，它的存在大大扩大了内膜的表面积，增加了内膜的代谢效率。

（三）外室（outerspace）（膜间隙）

指内、外膜之间的窄小空隙，宽约6~8nm，又称膜间隙（intermembranespace）。

（四）内室（mnerspace）

指由内膜包围的空间，其内充满蛋白质性质的物质，称线粒体基质（mitochondriamatrix）。

三、线粒体的化学组成及定位（chemicalcomposition）

（一）蛋白质外膜含量（60%）低于内膜含量（80%），主要为酶类（约120余种）。

外膜：单胺氧化酶（标记酶）、NADH—细胞色素C还原酶、脂肪酸辅酶A连接酶等等；

内膜：呼吸链酶系（细胞色素氧化酶为标记酶）、ATP合成酶、琥珀酸脱H酶等等；

外室：腺苷酸激酶（标记酶）、核苷二磷酸激酶；

内室：三羧酸循环酶系（其中苹果酸脱H酶是标记酶）、脂肪酸氧化酶、蛋白质合成酶系等等

（二）脂类外膜中含量（40%）高于内膜中的含量（20%）。其中内膜不含胆固醇，而含心磷脂较多。

（三）核酸基质中有DNA，称mt—DNA

四、线粒体的功能——生物氧化（biologicaloxidation）

亦称细胞呼吸（cellularrespiration），指各类有机物质在细胞内进行氧化分解，最终产生CO2和H2O，同时释放能量（ATP）的过程。包括TCA环、电子传递和氧化磷酸化三个步骤，分别是在线粒体的不同部位进行的。

（一）生物氧化的分区和定位

（二）电子传递和氧化磷酸化的结构基础

虽然电子传递和氧化磷酸化偶连在一起，但它们又是通过不同的结构完成的。1968年，E.Racker等的亚线粒体小泡重建实验说明了这一问题（图示）。

由此可见，电子传递是在线粒体内膜上，氧化磷酸化由基粒承担。

1电子传递链（呼吸链）（electrontransportchain，respirationchain）

呼吸链是由存在于线粒体内膜上的众多酶系和其它分子组成的电子传递链。

（1）复合物INADH—Q还原酶，催化NADH的2个电子→辅酶Q

（2）复合物Ⅱ琥珀酸—Q还原酶，催化电子从琥珀酸通过FAD和铁硫蛋白传至辅酶Q

（3）复合物Ⅲ细胞色素还原酶，催化电子从辅酶Q传至CytC

（4）复合物Ⅳ细胞色素氧化酶，将电子从CytC→氧。

2基粒（F1—FO复合物）的超微结构

F1—FO复合物，又称内膜亚单位、呼吸集合体、ATP酶复合物、ATP合成酶等。这一结构最初是在1962年，由Fernadezmoran经负染色在电镜下观察到的，后来D.Green将其称为线粒体基粒，后改称基粒，实际上是一种ATP酶复合体，分子量约在448000。

它是由多条多肽链构成的复合结构，可分为三部分，即头、柄、膜三部。在ATP形成过程中共同发挥作用。

3氧化磷酸化的偶联机制

（1）化学偶联假说（Chemiealcouplinghypothesis）

（2）构象偶联假说（Conformationalcouplinghypothesis）

（3）化学渗透学说（Chemiosmoticcouplinghypothesis）

亦称电化学偶联学说，是1961年英国生化学家P.Mitchell提出的。对电子传递和氧化磷酸化问题作了较为另人信服的解释，故普遍为人接受，米切尔因此而获1978年诺贝尔化学奖。

这一假说的中心思想是：在电子传递过程中所释放的能量转化成了跨膜的氢离子浓度梯度的势能，这种势能驱动氧化磷酸化反应，合成ATP。

（1）NADH提供一对电子，经电子传递链，最后为O2所接受。

（2）电子传递链中的载氢体和电子传递体相间排列，每当电子由载氢体传向电子传递体时，载氢体的H+便释放到内膜外。一对电子在呼吸链三次穿膜运动，向外室排放三对H+。

（3）内膜对H+具有不可透性，故随电子传递过程的不断进行，H+在外室中积累，造成膜两侧的质子浓度差。

（4）外室中H+有顺浓度梯度返回基质的倾向，当H+通过F1—FO复合物时，ATP酶利用这一势能合成ATP。

（5）F1—FO复合物需2个质子合成一个ATP。

第二节叶绿体与光合作用（chloroplast&photosynthesis）

叶绿体是植物细胞特有的双层膜围成的细胞器，它对生物界的存在和进化有着重大贡献（三个最初：一是人类、动物、多数微生物的食物的最初来源；二是人类社会利用的古生物燃料——煤、石油、天然气的最初来源；三是地球上氧气的最初来源），主要功能在于：吸收光能，合成碳水化合物，同时产生分子氧，总称为光合作用（photosynthesis）

一、叶绿体的形状、大小、数目、分布

二、超微结构

近年来，先后有许多学者采用超薄切片、负染色和冰冻蚀刻等先进技术，研究叶绿体的形态和组成，揭示叶绿体囊状膜系统的超微结构。

1叶绿体膜（chlmembrane）

是两层光滑的单位膜（内、外膜）6-8nm，也称外被（outerenvelope），是一个有选择的屏障，控制着叶绿体代谢物质的进入和排出。

2基质（stroma）

指叶绿体膜包围的，无结构，呈流动状态的物质。即叶绿体内膜与类囊体之间无定形物质，在基质中存在：

（1）叶绿体DNA环状，每一叶绿体内可含有几十个拷贝；（2）70S核糖体；（3）mRNA、tRNA；（4）酶类；（5）RUBP羧化酶；（6）各种离子。

3类囊体

类囊体在基质中有两种形式存在，一种是较小的扁囊，多个5—30（10—100个）相互叠置成一摞，形成的结构称基粒（grana）。每一叶绿体中约含有40—80个基粒。组成基粒的类囊体称基粒类囊体（granum-thylakoid）或基粒片层（granalamella）。另一种是较大的扁囊，贯穿于基粒之间，称基粒间类囊体或基质类囊体（stroma-thylakoid）或基质片层（stromalamella）。它们顺着叶绿体的纵轴彼此平行排列。其存在意义在于，使膜片层的总面积大大超出叶绿体的面积。

可见基粒thylokoid中有PSI和PSII的机能单位，并分布在膜内表面，是PSII核心颗粒和捕光复合物结合成的。

而基质thylokoid中多有PSI的机能单位，多布于膜外侧。

除上述内在蛋白外，还有组成电子传递链的众多载体，包括○1PQ（质体醌）、○2PC（质体兰素，plastcyanin）、○3细胞素（Cytb—559，Cytf—553，Cytb6—563等）、○4铁硫蛋白（铁氧还蛋白ferrdoxin，Fd）、○5黄素蛋白。故将类囊体称为光合膜。

三、化学组成

四、叶绿体的功能——光合作用（photosynthesis）

绿色植物细胞，吸收光能，还原CO2，并利用水提供氢合成碳水化合物，同时放出分子氧的过程，称为光合作用。总过程分为两个阶段：光反应和暗反应。

（一）光反应（Lightreaction）

叶绿素等色素分子捕获光能，将光能转化为ATP和NADPH的化学能，并放出氧的过程，是在类囊体膜上进行的，为能量转换过程。

光反应包括三个基本反应：原初反应、电子传递反应、光合磷酸化。

（1）原初反应（primaryreaction）：指聚光色素分子吸收光量子传到反应中心进行光化学反应的物理过程。包括光能的吸收、传递与转换。

（2）电子传递反应：包括三个阶段：NADP+的还原反应；PSII与PSI之间的传递；放氧反应。

（3）光合磷酸化反应：在有光存在下，当电子沿电子传递链传递时，形成ATP的过程称为光合磷酸化（photophosphorylation）。

当电子从还原势高处（Q）向还原势低的PSI传递时，能量下降，利用这一能量将ADP磷酸化形成ATP，这一过程称非循环式光合磷酸化（电子通路是开放的）。

当NADPHNADP+比值大时（缺少NADP+时），铁氧还蛋白（Fd）则将电子通过cytb6、cytf、pc传给P700+，利用这一能量使ADP磷酸化形成ATP，称循环式光合磷酸化（电子通路是闭合的）。

（4）光合磷酸化机制在一对电子的传递过程中，膜外消耗了三个质子，膜内则增加了四个质子，随着过程的不断进行，膜内外便建立了质子梯度，有向膜外穿出的趋势，当每3对H+通过CF1-FO复合物时，在CF1的催化下，合成一个ATP。

（二）暗反应（darkreaction）

利用光反应产生的ATP和NADPH还原CO2形成碳水化合物，将活跃化学能变为稳定化学能，是在叶绿体基质中进行的。为物质代谢过程。

在高等植物固定CO2有三条途径：卡尔文循环（C3途径）、C4途径（Hatch-slack途径）和景天科酸代谢。卡尔文循环是最基本、最普通的，只有这一途径具备合成淀粉之能力，又称C3途径。

第三节线粒体和叶绿体是半自主性细胞器

一、线粒体与叶绿体的DNA

（一）线粒体DNA（mt-DNA）

（二）叶绿体DNA（ct-DNA）

二、线粒体和叶绿体的蛋白质合成

（一）线粒体的蛋白质合成

线粒体基质中除有DNA外，还有各种RNA、核糖体、氨基酸活化酶等，说明它能合成自我繁殖所需的某些成分，但数量不多，只占线粒体全部蛋白质的10%，约有13种（20个分子）左右。有人估算：

×10（每周10个核苷酸）=14705对核苷酸，能编码4902个氨基酸（除以3），假设一个蛋白质分子由150个氨基酸组成，则能编码30个左右蛋白质分子，如果除去编码ｍRNA、rRNA、tRNA的信息量（占总信息量的30%），余下的信息量只能编码约20个左右的蛋白质分子。

综上所述，线粒体有自身的DNA，有一整套蛋白质合成系统，能够复制和再生，使其一代代传下去，所以具有一定的自主性。

（二）叶绿体蛋白质的合成

叶绿体中的蛋白质（酶）一部分是在叶绿体中由它自己的DNA编码，经过mRNA转录和翻译形成的，有一部分则是由核基因编码，在细胞质中形成后转入叶绿体的。还有一部分是由核基因编码，在叶绿体的核糖体上合成。

三、对细胞核和细胞质的依赖性大

无论是线粒体还是叶绿体，它们的自主性是有限的，下面以线粒体为例说明之。

核质蛋白质合成系统通过合成某些酶类来调节线粒体的蛋白质合成系统。在有氯霉素存在的条件下培养链孢霉细胞，这时线粒体的蛋白质合成受抑制，但线粒体的三羧酸循环酶类、电子传递链中的NADH脱氢酶、CytC、以及DNA-Poly-merase、RNA-Polymerase、核糖体蛋白质、各种氨基酸活化酶等有关线粒体DNA复制和基因表达的酶类依然存在。而这些酶是由核基因编码，在细胞质中合成，然后转移到线粒体的。这说明细胞质的蛋白质合成系统（或者说核——质蛋白质合成系统）通过合成某些酶类来调节线粒体的蛋白质合成系统。

又：在有放线菌酮存在下培养链孢霉细胞，由于细胞质蛋白质合成系统受抑制，结果培养一段时间后，线粒体的合成活性也显著下降。这足以说明线粒体对细胞核和其他细胞质部分有很大依赖性。实际上也是这样，线粒体DNA所编码的蛋白质只有它自身全部蛋白质的10%，绝大部分是由核DNA编码的。

从上述看出，线粒体的生长增殖是受核基因组和线粒体基因组两套遗传系统的共同控制，故称线粒体为半自主性细胞器。

四、物质进出线粒体的穿膜机制

细胞质中合成的蛋白质运送至线粒体，大多数以前体的形式存在，而且是需能过程。

前体蛋白质包括有功能的“成熟”形式和氨基未端引伸出的一段导肽（引肽，Leaderseguences，在叶绿体特称为“转运肽”）共同组成。导肽约含20~80个氨基酸，又叫氨基末端指导肽。进入线粒体的过程大致为：○1带有N-末端导肽的前体蛋白质首先与外膜上受体结合；○2蛋白质横跨外、内膜；○3N-末端导肽被基质中的蛋白酶切制；○4活化的成熟蛋白质进入基质。

五、线粒体、叶绿体的增殖与起源

（一）线粒体的增殖

（二）叶绿体的发育、增殖和起源第八章细胞核与染色体

Nucleus&chromosome教学目的：1、掌握细胞核的结构与功能

2、掌握染色体的结构与功能

教学重点：1核膜及核孔复合体

2、染色体的空间结构

教学难点：核孔复合体与核仁的结构与功能

讲授法

一、形态、大小、数目、分布

1形态间期细胞核形态多样，一般为圆形或卵形。其形态与生物的种类、细胞的形状、细胞类型、发育时期以及机能状态有关。

2大小多数细胞核在5—30μm。小的不到1μm，大的可达500—600μm（苏铁科某植物的卵细胞核）。通常：低等生物1—4μm

高等动物5—10μm

高等植物5—20μm

3数目通常一个细胞只有一个核，也有两个以上的多核现象及在某一发育时期的无核现象。

4分布细胞核多位于细胞中央，但也有各种不同情况，如上皮细胞的核偏于基底侧；横纹肌的细胞核靠近质膜；植物细胞成熟后若有较大液泡，核则被挤在一边。

二、细胞核的结构

在固定和染色的细胞中，可观察到细胞有下列结构：核被膜、染色质、核仁、核液（质）四部分。

第一节核被膜与核孔复合体

一、核被膜（nuclearenvelope）

亦称核膜（nuclearmembrane），由此