骨碎补壮骨茶膏产品开发研究

骨碎补在骨科方面具有大医疗研究意义，产品与制剂的开发一直在不断开展，有较高的开发前景。所以开发这种骨碎补茶膏可以增加骨密度的保健产品，有着很重要的意义[5]。1.3壮骨茶膏产品的开发研究随着现代科技飞速变化，我们的中药文化也要紧跟着发展的步伐，改变传统的剂型，将中药配方利用现代提取技术，将主药的功能活性成分提取出来，制备出新的剂型[17]。在某种意义上可以改变人们对中药的传统看法，还可以推广我们中药文化，从而得到更多人的支持。本实验将骨碎补作为研究内容，用超声波辅助醇提取出柚皮苷，然后把骨碎补提取液和桑寄生茶煎煮液经过浓缩工序，最后加进辅料：蜂蜜、桂花，制备出茶膏。超声辅助醇提取法的使用简单、高效环保、节约溶剂损耗，提取率比传统的煎煮、索氏回流、浸提等要高。开发骨碎补壮骨茶膏产品，研究一种具有自己独特风味的半固态速溶茶，茶膏无论从口感上、便捷上、形态上和色泽上都能给人带来一种美感冲击14]，加上茶膏具有一定的养生功效和营养价值高，老少幼皆适宜。未来喝茶也将成为社会上的一股潮流，为推动中国茶文化的进展，也出现了一些年轻人注重养生，喝各种养生茶，但是从根本上始终没有那么便利，效果也并不理想。目前市场上，很少有将中药茶制作成剂型的，也是保健茶市场的一个空缺，目前研究开发将骨碎补做成壮骨茶膏产品比较少见。为解决大众的需求，研一款携带轻巧方便有品质的茶饮品，因此对中药骨碎补开发研究做成壮骨茶膏产品，填补了壮骨茶膏产品在市场上的缺失，骨碎补壮骨茶膏的制备给保健茶市场增加了新的品种，开辟了保健茶膏市场。通过对骨碎补壮骨茶膏的生产工艺实验，开拓了骨碎补在保健品和食品方面的应用范围，为骨碎补的新药研究奠定了基础。图1-1柚皮苷化学分子式第二章骨碎补柚皮苷的提取2.1实验仪器材料和试药2.1.1实验仪器材料表2-1实验仪器Table

2-1

Experimental

instruments实验仪器材料型号厂家759系列紫外分光光度计UV-1800上海菁华仪器有限公司超声清洗机KQ-500DE广州星朔仪器有限公司循环水式真空抽滤泵SHZ-Ⅲ河南予华仪器有限公司中药打粉机FW-135天津泰司特仪器有限公司电子分析天平AL2004P上海海特勒仪器有限公司电子天平YP1002N上海菁海仪器有限公司四号药典筛孔径0.25mm上虞市瑞志仪器厂2.1.2试剂表2-2试剂材料Table

2-2

Reagents

materials试剂批号厂家骨碎补20200902广西仙茅中药科技有限公司梧州桑寄生茶200413梧州云峰药业有限公司蜂蜜（食品级）20210219安徽省百合食品有限公司桂花（食品级）20211008芜湖溢香醇茶叶公司柚皮苷对照品（≥98%）10236-47-2成都麦德生物科技公司无水乙醇分析纯2021年6月28日天津富宇化工科技有限公司甲醇（CH3OH)分析纯2019年1月8日天津科密试剂有限公司蒸馏水2.2骨碎补药材的预处理先将骨碎补放置烘箱，烘箱内的温度为75℃，烘干半小时，待水分烘干取出，放到中药打粉机器里粉碎，将得到的粗粉过四号药典筛。贴上标签，密封保存、备用。2.3方法2.3.1对照品溶液的制备精密称定柚皮苷的标准品6.00mg装到100ml量瓶内，用少量CH3OH溶解定容到刻度。配得溶液浓度为0.6mg/ml。贴上标签，备用。2.3.2柚皮苷标准曲线的绘制 准备6个10ML容量瓶，贴好标签序号，用精密移液管的按顺序移1ML、2ML、3ML、4ml、5ml和6ML对照品溶液；分装到标签序号10ml量瓶内，用CH3OH溶液定容，CH3OH作空白溶液组分调零，放在紫外分光度计下进行测量吸光度。查找阅读文献得知，柚皮苷在283nm处时最容易被检测出来，所以接下来实验测定柚皮苷物质均采用283nm测定其吸光度。将定容好的6瓶柚皮苷对照品溶液进行平行测定三次、取平均值，并记录好数据见表2-3。数据整理得用柚皮苷浓度X(mg/ml)作横坐标，吸收值（A）作纵坐标，得到回归方程：y=22.014x+0.0065,系数R2=0.9983，数据说明柚皮苷0.06-0.036mg/ml这个范围之内，有较好的线性关系[6]，结果见图2-1。表2-3柚皮苷标准曲线吸光度Table

2-3

Standard

curve

of

naringin

absorbance序号123456浓度mg/ml0.0060.0120.0180.0240.0300.036吸光度A0.1510.2660.3900.5360.6600.810图2-1柚皮苷标准曲线FIG.2-1

Standard

curve

of

naringin2.3.3超声波提取和得率的计算在电子天平称取9份2.00g骨碎补粉（按2.2处理后得到）放到锥形瓶里，加入选定的料液比乙醇溶液，在超声清洗机设置温度、时间，进行超声辅助醇提取出柚皮苷。马上趁热抽滤出提取液，贴盖上标签、备用。用一支精密的移液管吸柚皮苷提取液2ml到50ml的量瓶内，用少量H3OH溶解定容刻度上，充分摇匀后、备用。检测方法按2.3.3操作，将检测得到的吸光度结合标准曲线计算柚皮苷的质量浓度，结合2-1公式计算出得率[7]。（公式2-1）柚皮苷得率：Y=公式中Y:代表柚皮苷提取量、单位mg/gC:表示柚皮苷质量浓度、单位mg/mlV:提取溶液的体积/mlK:稀释倍数M:称取药粉质量/g2.3.4单因素试验考察在天平上称2.00g骨碎补粉，设定料液比（1：10、1：15、1：20、1：25、1：30）；提取温度（30℃、40℃、50℃、60℃、70℃）；提取时间（10min、20min、30min、40min、50min）；乙醇浓度（45%、50%、55%、60%、65%）这四个因素进行考察[7]对柚皮苷提取量的影响，具体操作按2.3.5。2.3.5正交试验单因素预试验得到骨碎补柚皮苷的提取量作为正交考察指标。选出料液比、提取温度、时间和乙醇的浓度含量这四个响比较大的条件因素，对柚皮苷提取量按照L9(34)的正交表，见表2-4设置的进行正交,优选出超声辅助醇提取对柚皮苷提取量的提取工艺。表2-4柚皮苷正交试验提取工艺设计Table.2-4.Orthogonalexperimentaldesignofnaringinextractionprocess水平A料液比B超声时间/minC超声温度/℃D乙醇浓度/%11：202040℃5021：253050℃5531：304060℃602.4结果分析2.4.1单因素考察结果分析[8]图2-2时间对柚皮苷提取量的影响由图2-2得知，由于提取时间过短,需要得到溶出的有效物质不够,提出的有效物质少。柚皮苷的提取量随着提取时间加长，呈现出先升高后再缓慢下降，说明了柚皮苷在进行超声时间30分钟的时候，柚皮苷的溶出达到了顶峰。图2-3温度对柚皮苷提取量的影响由图2-3可知，柚皮苷的提取量在30℃-50℃时，伴随温度变化而升高，原因在于提取温度的上升使柚皮苷的溶出速度加快，让活性成分容易渗出。在60℃时，明显下降很多，原因是温度高会加快有效成分遭到破坏，使溶出速度慢；乙醇成分的充分挥发，导致产生了料液比的降低。则说明了在50℃时，柚皮苷提取量到达了高点。图2-4乙醇浓度对柚皮苷提取量的影响由图2-4得知，乙醇浓度含量对提取量影响显著，按照极性相似的原则，乙醇浓度分数越大，柚皮苷的有效成分溶解度也增大。浓度为55%的乙醇时，提取量达到了最高，浓度为60%-65%的乙醇时会使提取的量有所下降。这是因为柚皮苷的极性本身最大，溶解度也大，高浓度的乙醇会使溶液的挥发速度加快，从而导致料液比的减低，溶解度就会变小。则应该选择极性相似的，浓度为55%的乙醇最为合适。图2-5料液比对柚皮苷提取量的影响由图2-5得知，随着料液比的比例增大会使得柚皮苷的溶出快，提取量也会增多；当料液比在1∶25时，使柚皮苷的溶出加快、浸出量上升到最大，料液比增大到1：30时柚皮苷提取量缓慢下降，原因是随着溶剂体积的扩大使柚皮苷浸出没有发生改变。表2-5正交试验结果L9(34)Table.2-5.OrthogonaltestresultsL9(34)编号料液比A超声时间B超声温度C乙醇浓度D提取量mg/g111115.02212329.85313233.42421339.84522219.06623127.53731228.26832135.019333111.27k16.097.715.858.45k28.817.976.918.55k38.187.4110.326.09R2.720.564.472.46表2-5由极差r分析得出，将提取量作为考察和指标，在进行对骨碎补提取柚皮苷的四个条件中选出影响提取量主次顺序结果为：C>A>D>B；得到最佳的提取工艺为：A2B2C3D2，该提取量得到了最大值。该实验是在总结前面单因素正交实验研究基础上,通过三因素三水平L9(34)正交设计，探讨了超声波辅助醇提取柚皮苷的工艺条件下优化[9]，用提取温度60℃、浓度为55%的乙醇、料液比1：25、提取30min的条件下进行验证试验[5],得到柚皮苷的提取量11.27mg。2.5柚皮苷的含量测定将正交实验中得到的优选醇提取的工艺进行超声波辅助醇的提取，称取5g骨碎补粉放于250ml锥形瓶体。根据温度60℃，乙醇浓度含量55%，提取持续时间30min，料液比1：25的条件进行操作。将提取得到的柚皮苷待测液，放到紫外分光光度仪器里检测，其它的条件都不变，将波长设置283nm，测出骨碎补中的柚皮苷吸光度是2.378，测得空白组甲醇溶液吸光度0.065。数据可以看出，超过了标准曲线最大吸光度0.810，因此无法用骨碎补柚皮苷的数据，需要将骨碎补的提取溶液进行稀释到一定的浓度。查阅了有关的药学文献和研究资料得知[10]，稀释溶液的条件也可按柚皮苷标准品条件的操作原则一致。用一支精密的移液管吸取柚皮苷提取液2ml到50ML的量瓶内，用少量CH3OH溶解定容刻度上，充分摇匀后、备用。CH3OH可作为空白溶液备用，把数据记录下来见表2-6，代入回归线性方程式，并计算出骨碎补柚皮苷的含量。表2-6含量测定结果数据（波长283nm）Table.2-6

content

determination

data

(wavelength

283nm)名称吸光度柚皮苷的含量mg/ml骨碎补提取液0.5730.6425CH3OH0.0650由表2-6可得知，检测得柚皮苷的吸光度为0.573，符合柚皮苷对照品的标准曲线。第三章骨碎补壮骨茶膏的制备和质量检测通过阅读大量药学相关的研究文献得知，研究中药骨碎补提取柚皮苷占比多部分，关于骨碎补壮骨茶膏的产品研究少，研究茶膏产品的相关文献也相少。在我们的日常生活中，所看到的茶大多是以泡茶的形式来呈现出来，本次研究课题主要结合临床上所了解的剂型和理论知识，以及本次实验室的条件可以满足制备出一款功能性茶膏。茶膏，茶之精华；茶膏的主要特点是：携带轻巧方便、冲泡溶解快；在口感方面，入口醇厚，普遍接受度高。茶膏在骨科方面有着较好的疗效，存在很高营养价值[19]，所以对骨碎补壮骨茶膏产品开发研究非常有必要的，产品的开发前景十分可观。3.1骨碎补壮骨茶膏的制备流程：骨碎补提取液液骨碎补提取液液清膏浓缩原料药处理 清膏浓缩原料药处理桑寄生煎煮液液 桑寄生煎煮液液投入桂花、蜂蜜投入桂花、蜂蜜冰箱冷藏：定型质量检测包装冰箱冷藏：定型质量检测包装图3-1骨碎补壮骨茶膏制备流程图3.2实验步骤：(1)骨碎补原料处理：将骨碎补药材挑选，60℃低温干燥4h,粉碎成粗粉过四号药典筛，贴上标签、密封保存备用。（2）骨碎补柚皮苷的提取：将称取的骨碎补粉放于大烧杯中,按料液比为1：25，加入浓度为55%的乙醇混匀，温度在60℃，提取时间在30min的条件下提取。马上趁热抽滤提取溶液。冷藏保存、备用。（3）梧州桑寄生茶原料处理：水温90℃，茶和水的比例是1：15，在电陶炉分两次煮，煮半个小时。得到煎煮液，贴上标签、备用。（4）浓缩：将骨碎补提取液和梧州桑寄生茶煎煮液混合，放置在电陶炉上进行蒸发浓缩。茶膏在熬制过程需要控制火候大小，防止烧焦。（5）茶膏的制作[14]：待骨碎补提取液和桑寄生茶煎煮液浓缩成清膏状时，开始投入辅料蜂蜜、桂花，并不断搅拌均匀，改成文火慢慢熬成稠膏状。（6）定型：待熬成的半流体稠状膏，倒入干净的模具内，放在冰箱里冷冻1h、定型，制成茶膏最终成品。（6）最后对茶膏产品进行质量检查：使用紫外法来检测茶膏中柚皮苷的含量，感官指标评价和不溶物检查，并及时记录好数据。（7）包装储存，入库。3.3骨碎补壮骨茶膏配方单因素考察参照《中国药典》里的二冬膏中的处方得知原料按1：1配比，每100g的清膏中加入蜂蜜50g,研究骨碎补壮骨茶膏的配方比例。具体看表3-1。表3-1茶膏配方药材比例研究序号骨碎补/g桑寄生茶/g蜂蜜/g桂花/g110102522151520231051524510202 3.3.1骨碎补壮骨茶膏辅料的药理作用：表3-2茶膏辅料的药理作用和应用辅料药理作用应用梧州桑寄生茶祛风湿、强壮筋骨、安胎、利尿降压常用作泡茶养生和药品方面，有着较好的强筋骨作用，对人体骨骼方面有较大的用处蜂蜜具有杀菌作用、滋阴润肺止咳、止痛是常用的食品甜味剂，桂花提神、行气活血散瘀、温补阳气是药食两用的常用之品，也常常作为食品中香料3.3.2骨碎补壮骨茶膏的含量测定[11]茶膏制作按3.2实验方法进行操作，将制得的茶膏，进行一次定量称重，用保鲜膜包裹密封，密封后备用。分别取样对四组茶膏进行质量检测，称取1g茶膏装于100ml容量瓶内，加入少量的CH3OH溶液溶解，需要用玻璃棒搅拌使茶膏完全溶解。定容，充分摇匀、备用。用一支精密的移液管吸取2ml到25ml的量瓶内，用少量CH3OH溶解定容刻度上，充分摇匀。CH3OH可作为空白溶液备用，放到紫外分光光度仪器进行检测，将波长设计为283nm,根据吸光度，并计算出其茶膏中含柚皮苷的含量。具体结果见表3-3所示。表3-3茶膏含量测定结果序号茶膏重量/g茶膏吸光度柚皮苷含量mg/mlA茶膏28.960.6140.6875B茶膏33.120.7260.8175C茶膏24.560.4740.5300D茶膏18.370.4120.4605由表3-3可以看出，B茶膏的吸光度测得是最大，并且算出来的含量也是最大的，结果证明溶液中含有柚皮苷含量最大。3.3.3四种茶膏类别评价[16]：在四个250ml烧杯内壁依次贴上对应的标签序号，从四组茶膏中分别在准确称取3g,放到四个对应的烧杯内，加入80℃100ml的热水，5min内溶解。观察茶膏溶液的溶解速度、香气、汤色，满分是100分，请三位同学对其进行打分评价见表3-4。表3-4茶膏配方比例溶解度打分评价序号溶解速度茶膏茶香茶膏汤色A茶膏818686B茶膏858790C茶膏788583D茶膏758482由表3-4可以看出，四种茶膏均可以溶解，但是D茶膏和C茶膏，需要进行玻璃棒的搅拌才能溶解完全。茶膏的汤色透亮呈淡黄棕色，加之桂花本身散发出的茶芳香。图3-1四种茶膏类别评价打分茶膏加入桂花可以增加茶的香气，改善原有药材的气味，使茶膏冲泡出来的茶汤具有一股令人愉悦的芳香；配方加入蜂蜜可以改善原本骨碎补和桑寄生茶身上的一些苦涩味道，让茶膏的口感能入口醇厚，味道适宜，符合人的口感，使桑寄生茶和骨碎补营养成分互补，提升其壮骨功能。根据以上实验结果得知，四类茶膏比例的茶香影响不明显，在整组配方的茶膏产品中比较和谐，所以确定加入2g的桂花。综合评分由图3-1得知：B茶膏>A茶膏>C茶膏>D茶膏。3.4茶膏质量检查3.4.1茶膏的整体感官指标评价[16]通过对茶膏产品的整体感官指标评价综合骨碎补壮骨茶膏的各项性能。该实验感官指标选取外观形状、口感、色泽、茶膏溶解的速度、茶膏粘稠度等5个方面作为综合感官评价的参考指标。审评结果见表3-5。表3-5感官评价指标感官评价指标评价外观形状膏体的颜色为黄棕色、有较好的流动性、膏体外观具有光泽口感味微甜，清香；入口滋润醇厚，具有淡淡的桂花香色泽澄清透亮呈淡黄棕色，汤感顺滑稠厚茶膏溶解的速度溶解快速，无渣、无焦屑等异物茶膏粘稠度呈半流体的稠厚状态，类似于浸膏3.4.2茶膏的质量要求茶膏制剂的质量要求参考煎膏剂的质量相关要求[12-13]，茶膏制剂的质地应细腻、不能有焦黄臭异昧和白色无糖的晶体颗粒析出，不得出现有霉败。结果：把茶膏放在干燥空气条件中观察，未观察到有霉变，焦臭异味和淡黄色晶体析出，符合要求。3.4.3茶膏的性状茶膏呈黄棕色稠膏状的半流体，膏体的外观呈现光泽、口感微甜、发散清香；入口醇厚、具有淡淡的桂花香。符合要求。3.4.4茶膏不溶物检查不溶物检查参照《中国药典》四部[18]：准确的称取茶膏5g放到250的烧杯内,倒入80℃200ml热水,搅拌至均匀使其完全溶化，放置5分钟内溶解，观察茶膏中不得含有焦屑性的异物。结果：称取5g茶膏,倒入80℃200ml热水,茶膏溶解完全，未观察有焦屑等异物，符合规定。第四章总结与展望4.1总结与分析本次课题在相关文献支持下，该实验利用骨碎补药材的活性成分，确定配方的组成，采用超声波辅助萃取法将有效成分提取出来，制成一款天然的、具有养生保健的壮骨茶膏。现将总结工作汇报如下：4.1.1结果讨论骨碎补柚皮苷优选提取条件为料液比1：25，乙醇浓度含量55%，温度60℃，提取持续时间为30min,得到柚皮苷的提取量11.27mg/g。骨碎补壮骨茶膏处方比例为骨碎补15g:梧州桑寄生茶15g：蜂蜜20g=1：1：5,然后加入桂花2g。对骨碎补壮骨茶膏的含量测定、整体感官指标评价、质量要求、性状、不溶物进行质量检查，结果均符合要求。4.1.2实验研究过程分析通过阅读文献后得知，目前对于骨碎补柚皮苷的提取方法大多使用醇提取法，试验用醇提效果比水提的好，水提浓缩过滤麻烦，因此该实验使用醇提辅助超声波提取骨碎补中的柚皮苷。目前柚皮苷含量测定方法多采用紫外法和高效液相法。其中紫外法的设备便宜、具有操作简单准确、费用低、应用广泛的特点；而高效液相法设备灵敏度高，检测出的实验数据更准群，但是操作复杂，使用成本高。综合诸多因素的考虑该实验室本身条件和自身条件的不足，只有采用紫外法比较适合该实验的顺利开展，确定骨碎补中柚皮苷的含量在分光光度计下测量。4.1.3课题的研究创新点通过查阅相关文献得知，中药骨碎补常以炮制入药，将骨碎补茶做成单味剂型在临床上更为少见。骨碎补茶虽然在历代药学典籍和文献有记载，目前国内研究骨碎补壮骨茶膏的少之又少，或者没有。茶膏这一剂型已发展成为市场上的亮点，又称为“速溶茶”，目前市场上已开发较好的制剂有著名的普洱茶膏质量安全可控、茶膏的多样性和便捷性元素起到了很好的市场效果。在研究骨密度方面，古方今用，采用中药配方结合现代先进的提取方法将活性成分提取出来。骨碎补在强筋骨功效应该有更好的剂型出现，所以制成茶膏，不仅改变了原有的传统剂型汤剂、酒剂等；