紫外可见分光光度计维生素B12含量测定

紫外可见分光光度计维生素B12含量测定1．通过查看预习单、开火车读、指名读等多种方式了解学生尤其是学困生识、写生字及正确、流利读书情况。在品读感悟环节，采取动手标画、创设情境、合作交流、发挥想象、分角色朗读等方式推进学生读懂课文从而感受阿联酋人民对花草树木的精心侍弄。紫外可见分光光度计维生素B12含量测定紫外可见分光光度计维生素B12含量测定1．通过查看预习单、开火车读、指名读等多种方式了解学生尤其是学困生识、写生字及正确、流利读书情况。在品读感悟环节，采取动手标画、创设情境、合作交流、发挥想象、分角色朗读等方式推进学生读懂课文从而感受阿联酋人民对花草树木的精心侍弄。一、实验目的1、了解紫外吸收光谱在有机结构分析的应用。2、学习有机物的定量分析方法。比耳定律当入射光的波长、液层厚度和溶液的温度固定时,溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。朗伯特定律当入射光的波长、溶液的浓度及温度一定时,溶液的吸光度与液层的厚度成正比。二、实验原理

许多有机化合物在紫外具有特征的吸收光谱，从而可以用来进行有机物的鉴定及结构分析（鉴定有机化合物的官能团）；此外，还可对同分异构体进行鉴别。对具有π健电子及共轭双键的化合物特别灵敏，且在紫外光区具有强烈吸收。该法在有机物分析中可进行：

（1）纯度检查；（2）未知样品的鉴定；（3）分子结构的推测；（4）互变异构的判别；（5）定量测定。

维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生血作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液的标示含量有每毫升含维生素B1250、100或500mg等规格。维生素B12的水溶液在278±1nm、361±1nm与550±1nm三波长处有最大吸收。361nm处的吸收峰干扰因素少，药典规定以361±1nm处吸收峰的比吸光系数E值（207）为测定注射液实际含量的依据。三、仪器组成

紫外-可见光度计仪器由光源、单色器、吸收池和检测器四部分组成。

1、光源

对光源基本要求：足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。

（1）钨及碘钨灯：340～2500nm，多用在可见光区；

（2）氢灯和氘灯：160～375nm，多用在紫外区。2、单色器(Mnochromator)

与原子吸收光度仪不同，在紫外可见分光光度计中，单色器通常置于吸收池的前面！(可防止强光照射引起吸收池中一些物质的分解)单色器：是分光光度计的关键部件，主要任务是将光源发来的混合光分解为单色光，并提供所需波长的光。3、吸收池(Cell，Container)：

用于盛放样品。可用石英或玻璃两种材料制作，前者适于紫外区和可见光区；后者只适于可见光区。有些透明有机玻璃亦可用作吸收池。4、检测器：

硒光电池

光电二极管

光电倍增管四、实验仪器与试剂1、仪器：UV-2501型紫外-可见分光光度计（Simazu公司）；1cm石英比色皿2、试剂：维生素B12注射液：100mg/ml五、试剂配制与测定1、配制标准系列：取维生素B12标准溶液100mg/mL

0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL分别置于50.00mL容量瓶中，用水稀释至刻度；2、绘制标准曲线：用1cm石英比色皿，以空白为参比，在波长200～600nm内测定标准溶液316nm处的吸光度A，绘制标准曲线。3、测定未知液：取未知液5.00mL置于50.00mL容量瓶中，用水稀释至刻度；用1cm石英比色皿，测定316nm处吸光度A，以空白为参比。4、计算未知液的含量（mg·mL-1）。六、仪器安装环境七、仪器使用注意事项：仪器操作过程出现异常情况，不得私自关闭电源，需由教师指导完成。实验室内不准来回跑动。不准随意搬动仪器。在测量状态下，不得将手伸入测量室内，以防紫外线灼伤！不准