2.2.1动物细胞培养课件-高二下学期生物人教版选择性必修3

动物细胞培养年级：高中二年级

学科：生物学（人教版）主讲人：杨思杰

学校：四川省洪雅中学校1简述动物细胞培养的过程学习目标2简述动物细胞培养的条件动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合动物细胞工程是最基础的技术问题:什么是动物细胞培养？1.概念：一、动物细胞培养从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适当的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。动物体组织单个细胞细胞生长和增殖取出分散适宜条件问题：动物组织的选择：

幼龄动物or老龄动物幼龄个体的细胞分化程度低、分裂能力强，易培养。原理地位对象目的细胞增殖（有丝分裂）动物细胞工程的基础获得细胞或者细胞产物胚胎或幼龄动物的细胞动物体内的细胞之所以能够维持正常的生命活动，是因为机体给这些细胞提供了适宜的条件。你还记得有哪些条件吗？充足的营养稳定的内环境体外培养动物细胞需要满足什么条件？动物细胞培养所需的基本条件营养物质其他条件<<糖类氨基酸无机盐维生素无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境2.培养条件：①营养条件：葡萄糖氨基酸无机盐维生素问题：培养基的类型：

固体培养基or液体培养基合成培养基or天然培养基将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制的培养基液体培养基，也称培养液由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚。血清可以补充合成培养基中缺乏的物质，如蛋白质、氨基酸、未知的促生长因子等。？动物血清培养基的构成：合成培养基+血清等天然成分2.培养条件：②无菌无毒的环境：①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理②在无菌环境下进行操作定期更换培养液无菌无毒③添加一定量的抗生素防止培养过程中的微生物污染思考：在细胞培养液中添加适量的抗生素的目的是什么？思考：为什么要定期更换培养液？以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害2.培养条件：③温度、PH、渗透压：一般与动物体内相同①适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以______________为宜；②适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为___________③维持适宜的渗透压的目的：36.5±0.5℃7.2-7.4维持细胞正常的形态和功能用培养皿或松盖培养瓶,在含有_______________和__________的混合气体的__________2.培养条件：④气体环境：动物细胞培养所需气体主要有_____和______O2CO2细胞代谢所必需的维持培养液的pH95%空气5%CO2CO2培养箱①组成不同气体的作用是什么？②培养仪器（95%）空气:（5%）CO2：CO2培养箱二、动物细胞培养过程阅读教材P44-45,思考并回答下列问题：1.为何动物细胞培养过程要将组织分散成单个细胞呢？可用什么方法？2.体外培养动物细胞有哪些类型？3.什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？4.什么是原代培养和传代培养？5.为什么要进行分瓶培养？怎么处理？6.动物细胞培养与植物组织培养有什么相同之处与不同之处？取动物组织分散成单个细胞传代培养用机械法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理细胞悬液原代培养分瓶培养加培养液在培养皿或培养瓶内1.取动物组织：部位原因动物胚胎或幼龄动物的组织、器官分化程度低，分裂能力强，易培养2.分散成单个细胞：原因①从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖②利于细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换问题1:常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就失去活性，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以用胃蛋白酶不行。问题2:胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗，为什么？细胞膜的成分中含有蛋白质，而胰蛋白酶能够水解蛋白质，因此，胰蛋白酶会把细胞消化掉。因此，胰蛋白酶处理的时间不能太长。取动物组织分散成单个细胞传代培养用机械法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理细胞悬液原代培养分瓶培养加培养液在培养皿或培养瓶内解决悬浮生长贴壁生长(大多数）细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏等接触抑制细胞分裂受阻②制成细胞悬液，分瓶培养①收集细胞①原代培养：指动物组织经处理后的初次培养。②传代培养：分瓶后的细胞培养。③接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。由于细胞之间有接触抑制的特性，一般的正常细胞并不重叠于其他细胞之上生长，而是单层生长。癌细胞由于无接触抑制而能够继续移动和增殖，导致细胞向三维空间扩展，发生堆积。是否接触抑制可作为区别正常细胞与癌细胞的标志之一。动物细胞培养动物细胞培养的概念和原理动物细胞培养的条