实验四染色质

实验四X染色质染色、人类染色体G显带标本的制备及观察

指导教师：张锋滕蕾一、实验目的1、X染色质的标本制作。2、观察X染色质，了解其形态特点。3、了解人体染色体G显带技术方法及各号染色体G带带型。二、实验原理在间期，女性体细胞中两条X染色体中的一条异染色质化，约1微米大小呈异固缩状态贴近体细胞核膜内缘的浓染小体。用硫堇染色法可使其着色。在口腔粘膜上皮细胞、羊水脱落细胞、以及皮肤结缔组织、宫颈、阴道、尿道等组织的间期细胞核内均可检出X染色质。通过检查，可以判定被检者的性别，临床上可用于产前预测胎儿性别。三、实验方法1、取材先让受检者用水嗽洗口腔数次，以尽量除去口腔内细菌或其它杂物。操作者一手拉住受检查的下唇，一手用牙签钝头部或木质（或金属）压舌板刮取其粘膜部，弃去第一次刮到的细胞。在同一部位连续刮取数次。（一）X染色质染色2、标本的制作将刮取物涂在载玻片上，晾干。3、Giemsa染色法置入固定液(甲醇：冰醋酸3:1)中10min。晾干，置入5mol/LHCl中，室温下水解20min。用自来水中冲洗1min，以充分洗去HCl，以免影响染色液的pH。（这步很关键！）Giemsa染液（现用现配）中染色约4-5min。(Giemsa原液：磷酸盐缓冲液=1:9)4、X染色质观察先在低倍镜下找到细胞较集中而又均匀分散的细胞群。油镜下，X染色质是位于核膜内侧缘轮廓清楚的浓染小体。其直径约1μm～1.5μm。一般呈平凸、圆开、扁平形或三角形。计数50～100个细胞，统计X染色质的阳性率。正常值：男性，低于1%；女性，高于10%注意事项避开含有大量细菌的区域，因为有时这些细菌会干扰X的观察。避免与核内其它核质凝集物等混淆。凡位于核中间的浓染小体都不在计数之内。可计数的细胞，核必须完整，无缺损，无皱褶，核染色均匀。按上述标准计数50～100个细胞，统计性染色质的阳性率。（二）人类染色体G显带标本的制备及观察1.原理G显带是以Giemsa染料染色后，使染色体显带的技术。Giemsa染料是由噻嗪和曙红组成的，着色时DNA可与之结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。

G显带的方法很多，最常用的是将已固定的染色体制片进行预处理，再用Giemsa染色。预处理的方法非常多，可用热、碱、各种蛋白酶、尿素等，其中最常用的是胰蛋白酶进行预处理。2、制片烤片：常规法制作染色体标本，置60℃烘箱烘8h～10h，然后置37℃烘箱烘3d左右预处理：将经过烘烤的片子投入0.02%胰蛋白酶溶液中，并不断摆动，2.5min左右，自来水冲洗。染色：Giemsa染液染色8～10min，水冲洗。镜检：空气干燥、镜检。3、实验观察低倍观察：先在低倍镜自上而下，自左至右地选择合适的、带纹清晰的G带中期分裂相油镜观察：转至油镜下观察，根据每号染色体的特征予以鉴别。正常女性G显带染色体的核型分析（46，XX）注意事项制片：G显带的好坏，首先取决于染色体本身制片的质量，染色体要较长，以早中期为宜，且中期相丰富、分散好，无胞浆背景。标本保存时间：不宜太长。时间越长，细胞对胰酶处理的抵抗性越强，片龄过长的标本染色后会导致斑点状而非带纹。胰酶温