DB3401T 231-2021 生态环境检测实验室标准菌株管理规范

ICS13.020.01CCSZ003401IDB3401/T231—2021前言 2规范性引用文件 3术语和定义 4一般要求 2人员 2场所与设备 2安全防护 2记录 25管理流程 2流程概述 2采购 2验收 2保藏 2期间核查 2制备 3销毁 4附录A（资料性）菌株的代数、使用类型、继承关系 5附录B（规范性）标准菌株管理流程 6附录C（资料性）记录表 7附录D（规范性）标准储备菌株制备流程 附录E（规范性）储备菌株制备流程 附录F（规范性）工作菌株制备流程 DB3401/T231—2021本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由合肥市生态环境局提出并归口。本文件起草单位：安徽海峰分析测试科技有限公司、中国建材检验认证集团安徽有限公司、合肥市环境监测中心站、肥西县环境监测站、安徽国测检测技术有限公司、安徽海恒检测技术有限公司、安徽省环境检测行业协会、合肥志鹏环保职业培训学校有限公司。本文件主要起草人：丁月、王家菊、程燕、刘莎莎、夏晴、夏俊雅、戴光玉、李伟、杨圣广、张汉昌、孙美慧、王莉莉、牛俊、崔建双。1DB3401/T231—2021生态环境检测实验室标准菌株管理规范本文件规定了生态环境检测实验室标准菌株管理的一般要求和流程。本文件适用于生态环境检测实验室标准菌株的管理。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27405-2008实验室质量控制规范食品微生物检测GB50346生物安全实验室建筑技术规范SN/T2660食品微生物实验室菌种保藏方法3术语和定义GB/T27405-2008界定的以及下列术语和定义适用于本文件。标准菌株referencestrain至少定义到属或种水平的菌株。按其特性进行分类和描述，有明确的来源。[来源：GB/T27405-2008，3.10]标准储备菌株referencestocks标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。[来源：GB/T27405-2008，3.11]储备菌株stockculture标准储备菌株经过转接后获得的同种菌株。工作菌株workingcultures由标准菌株、标准储备菌株、储备菌株或4代以内经过转接获得的同种菌株，直接用于培养基检验、人员比对、阴性及阳性对照等实验活动。代generation将微生物接种至新鲜培养基上或培养基内培养生长一次即为一代。注：按照菌株的传代过程，对各代菌株的代数、使用类型、继24.1人员3DB3401/T231—2021制备5.6.1制备要求5.6.1.1制备过程应在无菌条件下进行。5.6.1.2培养条件应按照供应商提供的使用说明书要求进行。5.6.1.3培养物应进行标识，标识内容应包括名称、菌种号、传代日期和代数及使用类型等信息。5.6.1.4应记录制备信息，制备记录表参见附录C中的表C.4。5.6.2制备过程5.6.2.1复苏拆开标准菌株的包装，按照供应商提供的使用说明书要求对标准菌株进行复苏。5.6.2.2平板分离采用非选择性平板对复苏后的标准菌株进行分离、纯化。5.6.2.3确认对平板分离出的菌落进行存活性、纯度确认。确认合格后，方可进行制备。如确认不合格，应及时灭菌销毁。5.6.2.4标准储备菌株制备挑取纯菌落进行分装保藏，即得到标准储备菌株（第2代）。标准储备菌株制备流程按照附录D执行。标准储备菌株不应作为标准菌株使用。5.6.2.5储备菌株制备取标准储备菌株，在非选择性平板上转种培养并验证合格，挑取纯菌落进行分装保藏，即得到储备菌株（第3代）。储备菌株制备流程按照附录E执行。储备菌株不应作为标准储备菌株或标准菌株使用。5.6.2.6工作菌株制备5.6.2.6.1由标准菌株制备工作菌株（第3代）取标准菌株，在复苏、分离确认合格后，挑取纯菌落转接于斜面进行培养，即得到工作菌株（第3代）。制备流程按照附录F图F.1执行。工作菌株不应作为储备菌株、标准储备菌株或标准菌株使用。5.6.2.6.2由标准储备菌株制备工作菌株(第4代)取标准储备菌株，在非选择性平板上转种培养并验证合格，挑取纯菌落转接于斜面进行培养，即得到工作菌株（第4代）。制备流程按照附录F图F.2执行。5.6.2.6.3由储备菌株制备工作菌株(第5代)取储备菌株，在非选择性平板上转种培养并验证合格，挑取纯菌落转接于斜面进行培养，即得到工作菌株（第5代）。制备流程按照附录F图F.3执行。5.6.2.6.4由工作菌株(第3代)制备工作菌株（第4代）4DB3401/T231—2021取工作菌株（第3代），挑取纯菌落转接于斜面进行培养，即得到工作菌株（第4代）。制备流程按照附录F图F.4执行。5.6.2.6.5由工作菌株(第4代)制备工作菌株（第5代）取工作菌株（第4代），挑取纯菌落转接于斜面进行培养，即得到工作菌株（第5代）。制备流程按照附录F图F.5执行。销毁5.7.1销毁工作应由两人共同操作，并对销毁过程进行严格监督。5.7.2将需要销毁的菌株和使用过的带菌耗材经121℃高压灭菌至少30min，再放入实验室生物废弃物处理桶。需要销毁的菌株包括但不限于：a)解冻使用后的标准储备菌株、储备菌株；b)经确认或验证不合格的菌株；c)超过保存期限的菌株；d)其他应废弃的菌株。5.7.3废弃物应按GB19489中废物处置规定进行处理。5.7.4销毁记录表参见附录C中的表C.5。5DB3401/T231—2021（资料性）菌株的代数、使用类型、继承关系各代菌株的代数、使用类型、继承关系见表A.1。表A.1各代菌株的代数、使用类型、继承关系- 注：从标准菌株到标准储备菌株、储备菌株和工作菌株传代培养次数不超过5次。6DB3401/T231—2021（规范性）标准菌株管理流程标准菌株管理流程见图B.1。采购申请记录合同 启动工作计划采购申请记录合同 启动工作计划采购验收记录 验收记录验收保藏、期间核查保藏、领用记录期间核查记录保藏、期间核查制备制备记录制备销毁销毁记录销毁工作结束工作结束图B.1标准菌株管理流程图7DB3401/T231—2021记录表C.1验收记录表见表C.1。表C.1验收记录表序号标准菌株名称标准菌株来源菌株编号批号采购日期验收日期验收评价验收人备注规格数量有效期包装标识说明书证书存活性纯度8DB3401/T231—2021C.2保藏与领用记录表见表C.2。表C.2保藏与领用记录表9DB3401/T231—2021C.3期间核查记录表见表C.3。表C.3期间核查记录表序号菌株名称菌株来源菌株编号批号代数及使用类型保藏日期核查日期核查结果核查人备注外观保藏条件有效期文件资料存活性纯度关键生化特性DB3401/T231—2021C.4制备记录表见表C.4。表C.4制备记录表DB3401/T231—2021C.5销毁记录表见表C.5。表C.5销毁记录表注：废弃菌株应标明编号、数量。DB3401/T231—2021（规范性）标准储备菌株制备流程标准储备菌株制备流程见图D.1。标准菌株（第0标准菌株（第0代）按说明书要求复苏（第1代）按说明书要求的培养条件，在非选择性平板上分离（第2代）对分离出的菌落进行存活性、纯度确认否否销毁符合销毁符合是挑取纯菌落，用合适的保存介质进行分装保藏标准储备菌株（第标准储备菌株（第2代）图D.1标准储备菌株制备流程图DB3401/T231—2021（规范性）储备菌株制备流程储备菌株制备流程见图E.1。标准储备菌株（第标准储备菌株（第2代）按说明书要求的培养条件，在非选择性平板上分离（第3代）对分离出的菌落进行存活性、纯度确认否销毁符合否销毁符合是挑取纯菌落，用合适的保存介质进行分装保藏储备菌株（第储备菌株（第3代）图E.1储备菌株制备流程图DB3401/T231—2021（规范性）工作菌株制备流程F.1标准菌株制备工作菌株流程见图F.1。标准菌株（第标准菌株（第0代）按说明书要求复苏（第1代）按说明书要求的培养条件，在非选择性平板上分离（第2代）对分离出的菌落进行存活性、纯度确认销毁否销毁符合是挑取纯菌落转接于斜面培养生长工作菌株（第工作菌株（第3代）图F.1标准菌株制备工作菌株流程图DB3401/T231—2021F.2标准储备菌株制备工作菌株流程见图F.2。标准储备菌株（第2标准储备菌株（第2代）按说明书要求的培养条件，在非选择性平板上分离（第3代）对分离出的菌落进行存活性、纯度确认否符合销毁否符合销毁是挑取纯菌落转接于斜面培养生长工作菌株（第工作菌株（第4代）图F.2标准储备菌株制备工作菌株流程图DB3401/T231—2021F.3储备菌株制备工作菌株流程见图F.3。储备菌株（第3储备菌株（第3代）按说明书要求的培养条件，在非选择性平板上分离（第4代）对分离出的菌落进行存活性、纯度确认否否销毁符合销毁符合是挑取纯菌落转接于斜面培养生长工作菌株（第工作菌株（第5代）图F.3储备菌株制备工作菌株流程图DB3401/T231—2