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文档简介
ICS67.060
CCSB20
GXAS
团体标准
T/GXAS346—2022
花生中硒形态的测定高效液相色谱-电感
耦合等离子体质谱法
Determinationofseleniumspeciesinpeanutbyhighperformance
liquidchromatographyinductivelycoupledplasmamassspectrometry
2022-07-21发布2022-07-27实施
广西标准化协会发布
T/GXAS346—2022
目次
前言.................................................................................II
1范围...............................................................................1
2规范性引用文件.....................................................................1
3术语和定义.........................................................................1
4原理...............................................................................1
5试剂与材料.........................................................................1
6仪器和设备.........................................................................2
7试样制备...........................................................................3
8分析步骤...........................................................................3
9结果计算...........................................................................4
10精密度............................................................................4
附录A(资料性)硒混合标准溶液色谱图.................................................5
I
T/GXAS346—2022
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由广西大学提出、归口并宣贯。
本文件起草单位:广西大学、广西西大检测有限公司、杭州市食品药品检验研究院、河南科技大学、
河南艾格多科技有限公司、苏州尧智生态环保有限公司。
本文件主要起草人:韦燕燕、沈方科、范晓苏、顾明华、贾彦博、凌毅婷、何万领、毛彦君、袁林
喜、路丹、蔡中全。
II
T/GXAS346—2022
花生中硒形态的测定高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法
1范围
本文件描述了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定花生中硒形态的原理、试剂和材料、仪
器和设备、试样制备、分析步骤、结果计算、精密度。
本文件适用于花生中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸钠、亚硒酸钠5种硒
形态的测定。硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、甲基硒代-L-半胱氨酸的方法检测限为0.001mg/kg,硒酸钠、
亚硒酸钠的方法检出限为0.002mg/kg(以Se计)。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸钠、亚硒酸钠5种硒形态用酶提取,
经过反相液相色谱分离,电感耦合等离子体质谱仪测定,外标法定量。
5试剂与材料
5.1试剂
5.1.1以下所用试剂,除特殊注明外,均为优级纯试剂;水应符合GB/T6682中一级水的要求。
5.1.2七氟丁酸(C4HF7O2,98%)。
5.1.3磷酸二氢钾(KH2PO4)。
5.1.4甲醇(CH3OH):色谱纯。
5.1.5链霉蛋白酶E(PronaseE,Solarbio):酶活力=7000u/g(在pH7.5和40℃条件下,每min水
解酪蛋白产生7μmol酪氨酸)。
5.2材料
微孔双层水系滤膜(PES):47mm,0.22μm。
5.3流动相
流动相(30mmol/L磷酸二氢钾—0.15%七氟丁酸—2%甲醇):称取8.1654g磷酸二氢钾(KH2PO4)
(精确到0.0001g)于2L水中,搅拌至溶解,溶解后过0.22μm微孔滤膜(PES)过滤,取磷酸二氢钾滤
液1000mL于2L洁净广口瓶中,加入1.5mL七氟丁酸和20mL甲醇溶液,超声30min,现配现用。
5.4标准品
5.4.1硒代蛋氨酸(化学式:C5H11NO2Se,CAS号:2578-28-1),纯度≥98%。
5.4.2L-硒代胱氨酸(化学式:C6H12N2O4Se2,CAS号:29621-88-3),纯度≥98%。
1
T/GXAS346—2022
5.4.3Se-甲基硒代-L-半胱氨酸(化学式:C4H9NO2Se,CAS号:26046-90-2),纯度≥98%。
5.4.4硒酸钠(化学式:Na2SeO4,CAS号:13410-01-0),纯度≥98%。
5.4.5亚硒酸钠(化学式:Na2SeO3,CAS号:10102-18-8),纯度≥98%。
5.5标准溶液
5.5.1硒代蛋氨酸标准储备液(100mg/L,以Se计):称取2.43mg硒代蛋氨酸标准品(5.4.1),用
水溶解并定容至10mL。0℃~4℃避光保存,有效期3个月。
5.5.2L-硒代胱氨酸标准储备液(100mg/L,以Se计):称取4.15mgL-硒代胱氨酸标准品(5.4.2),
用水溶解并定容至10mL。0℃~4℃避光保存,有效期3个月。
5.5.3Se-甲基硒代-L-半胱氨酸标准储备液(100mg/L,以Se计):称取2.26mgSe-甲基硒代-L-半
胱氨酸标准品(5.4.3),用水溶解并定容至10mL。0℃~4℃避光保存,有效期3个月。
5.5.4硒酸钠标准储备液(100mg/L,以Se计):称取2.34mg硒酸钠标准品(5.4.4),用水溶解并
定容至10mL。0℃~4℃避光保存,有效期3个月。
5.5.5亚硒酸钠标准储备液(100mg/L,以Se计):称取2.15mg亚硒酸钠标准品(5.4.5),用水溶
解并定容至10mL。0℃~4℃避光保存,有效期3个月。
5.5.6混合标准储备液(硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸500μg/L;硒酸钠100
μg/L;亚硒酸钠50μg/L):分别准确吸取0.5mL硒代蛋氨酸标准储备液(100mg/L)、L-硒代胱氨酸
标准储备液(100mg/L)、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸标准储备液(100mg/L);0.1mL硒酸钠标准储备液(100
mg/L)、0.05mL亚硒酸钠标准储备液(100mg/L)于100mL容量瓶中,加水稀释并定容至刻度。0℃~4℃
避光保存,有效期2个月。
5.5.7混合标准工作液:吸取适量标准储备液(5.5.6),用超纯水逐级稀释配成混合标准工作溶液系
列,各物质质量浓度见表1。依据样品中各物质质量浓度水平,适当调整标准系列中各物质质量浓度范
围。
5.5.8甲烷:纯度99.999%。
5.5.9液氩:纯度99.999%。
表1高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法中各物质的标准溶液系列质量浓度
标准系列质量浓度(以Se计)
序号物质名称单位
系列1系列2系列3系列4系列5
1硒代蛋氨酸μg/L15102550
2L-硒代胱氨酸μg/L15102550
3Se-甲基硒代-L-半胱氨酸μg/L15102550
4硒酸钠μg/L0.212510
5亚硒酸钠μg/L0.10.512.55
6仪器和设备
6.1高效液相色谱—电感耦合等离子体质谱仪:配碰撞反应池。
6.2分析天平:感量为0.1mg和0.01mg。
6.3冷冻组织研磨仪:功耗1000W,频率60Hz。
6.4恒温振荡器:振荡转速≥300r/min。
6.5超声波清洗器。
6.6离心机:转速15000r/min。
6.7涡旋混合器。
6.8旋转蒸发仪:功耗60W。
2
T/GXAS346—2022
7试样制备
将花生样品去壳,晾干,放入4℃冷冻研磨仪中粉碎,混匀,装入洁净的盛样容器内,密封并标明
标记,常温保存。
8分析步骤
8.1试样提取
称取试样0.2g~0.5g(精确至0.0001g)于50mL离心管中,加入80mg链霉蛋白酶E和10mL超纯水,
涡旋混匀,置于(37±2)℃恒温振荡器中(转速300r/min),振荡酶解4h,取出,于10000r/min离
心10min。吸取5mL上清液,37℃旋转蒸发浓缩,加超纯水定容至1mL后,混匀,过0.22μm滤膜,待
测。
8.2测定
8.2.1液相色谱电感耦合等离子体质谱参考条件
8.2.1.1液相色谱条件
液相色谱条件设置如下:
——色谱柱:C8色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),或相当者;
——流动相:含30mmol/L磷酸二氢钾、0.15%七氟丁酸、2%甲醇;
——柱温:30℃;
——流动相流速:1.0mL/min;
——进样量:50μL。
8.2.1.2电感耦合等离子体质谱条件
质谱条件设置如下:
——雾化器:同心雾化器;
——炬管内径:2.5mm;
——釆样锥/截取锥(Ni)孔径:1.0/0.4mm;
——采集质量数:80;
——采集模式:反应模式;
——高频等离子体发射功率:1300W;
——雾化器流量:0.88L/min;
——载气流量:0.6mL/min;
——低质量截取:0.45;
——蠕动泵转速:35rpm;
——驻留时间:1000ms。
8.2.2标准曲线
取混合标准使用液(5.5.7),按浓度由低到高依次进样测定,以各硒形态色谱峰面积和浓度作图,
绘制标准曲线。
8.2.3试样溶液测定
取试样溶液(8.1)进样测定,根据标准溶液的色谱保留时间定性,从标准曲线得到的样液中硒代
蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸钠、亚硒酸钠浓度。试样溶液中5种硒形态的
响应值均应在标准曲线线性范围内;当试液超出线性范围时,应用流动相(8.2.1.1)进行适当稀释后
进样测定。硒混合标准溶液色谱图参见附录A。
3
T/GXAS346—2022
8.3空白试验
除不加试样外,按8.1和8.2步骤,随同试样进行空白试验。
9结果计算
试样中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸钠、亚硒酸钠的含量(以Se计)
ωi(mg/kg),按式(1)计算。
()××
=·····································································(1)
×
𝐶𝐶𝑖𝑖−𝐶𝐶0𝑉𝑉𝑁𝑁
式中:𝜔𝜔𝑖𝑖𝑚𝑚1000
——试样中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸钠、亚硒酸钠的含量(以
Se计),单位为毫克每千克(mg/kg);
𝑖𝑖
𝜔𝜔——样液中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸钠、亚硒酸钠的浓度(以
Se计),单位为微克每升(μg/L);
𝑖𝑖
𝐶𝐶——空白试液中硒代蛋氨酸、L-硒代胱氨酸、Se-甲基硒代-L-半胱氨酸、硒酸钠、亚硒酸钠的浓
度(以Se计),单位为微克每升(μg/L);
0
𝐶𝐶——试液定容体积,单位为毫升(mL);
——试液稀释倍数;
𝑉𝑉——试样溶液所代表试样的质量,单位为克(g);
𝑁𝑁1000——换算系数。
计算结果保留𝑚𝑚2位有效数字。
10精密度
在重复性条件下获得的2次独立测试结果的绝对差值不应超过算术平均值的20%。
4
T/GXAS346—2022
附录A
(资料性)
硒混合标准溶液色谱图
图A.1给出了硒混合标准溶液色谱图。
标引序号说明:
1——亚硒酸钠;
2——硒酸钠;
3——L-硒代胱氨酸;
4——Se-甲基硒代-L-半胱氨酸;
5——硒代蛋氨酸。
图A.1硒混合标准溶液色谱图
5
中华人民共和国团体标准
花生中硒形态的测定高效液相色
谱-电感耦合等离子体质谱法
T/GXAS346—2022
广西标准化协会统一印制
版权专有侵权必究
T/GXAS346—2022
目次
前言.................................................................................II
1范围...............................................................................1
2规范性引用文件.....................................................................1
3术语和定义.........................................................................1
4原理...............................................................................1
5试剂与材料.........................................................................1
6仪器和设备.........................................................................2
7试样制备...........................................................................3
8分析步骤...........................................................................3
9结果计算...........................................................................4
10精密度............................................................................4
附录A(资料性)硒混合标准溶液色谱图.................................................5
I
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前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
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本文件起草单位:广西大学、广西西大检测有限公司、杭州市食品药品检验研究院、河南科技大学、
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本文件主要起草人:韦燕燕、沈方科、范晓苏、顾明华、贾彦博、凌毅婷、何万领、毛彦君、袁林
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1范围
本文件描述了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定花生中硒形态的原理、试剂和材料、仪
器和设备、试样制备、分
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