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文档简介
目录
刖目.................Z
实习一法医病理学鉴定书的书写..........................3
实习二法医病理学尸体解剖术式..........................8
实习三法医病理学组织切片制作及染色..................11
实习四尸体现象......................................27
实习五机械性损伤1...................................................................29
实习六机械性损伤2...................................................................31
实习七颅脑损伤......................................34
实习八损伤案例(一)................................36
实习九损伤案例(二)................................44
实习十机械性窒息....................................54
实习十一溺死实验和硅藻检查..........................56
实习十二高低温损伤、电流损伤........................58
实习十三电击伤......................................62
实习十四猝死(一)....................................63
实习十五猝死(二)....................................68
实习十六猝死(三)..................................70
实习十七医疗纠纷与医疗事故..........................88
4—
刖百
法医病理学是运用病理学等相关医学学科的理论和技术,研究涉及法律
上有关的伤、残、病、死的变化及发展的一门科学,以期为暴力性案件的侦
查或审判提供医学科学证据。其中心任务是鉴定死亡原因、死亡方式、死亡
时间、损伤时间、推断致伤物、个人识别、损伤与疾病的关系等等。因此它
是法医学的重要学科。
本实习手册旨在为法医学专业学生和从事法医病理学专业的法医工作
者,更好地学习和掌握法医病理学而编写。使他们加深理解和掌握法医病理
学的理论内容,提高实践能力,从而提高我们法医病理学的教学质量。因此
要求他们较熟练地掌握各种解剖术式,进行法医尸体剖验,掌握H.E染色切
片制作过程及对一般的病理组织切片进行观察、诊断、正确的分析并得出科
学结论。为将来的法医工作打下良好的基础。
实习手册包括法医病理学理论教学中的主要内容,以补充和增加同学们
的实践能力,提高观察法医病理组织切片的水平,解决理论上不能解决的问
题。
该实习手册是在理论知识结合检案积累,同时借鉴其他院校的教学经验
的基础上由法医学专业教师为实验教学而编写,内容有不足之处,请予以指
教。
2
实习一法医病理学鉴定书的书写
一、目的要求
1.了解鉴定书内容,记录方法和正规格式。
2.掌握鉴定书书写规则。
二、实习内容
一、鉴定书内容和格式
1.鉴定书内容
根据《刑事诉讼法》第八十九条之规定:“鉴定人进行鉴定后,应当写出
鉴定结论,并签名",法医学鉴定人将政法或卫生机关交验的案件或病志等书
面材料、活体或尸体及其他人体物证检材进行科学地检查、鉴定后,根据检
查鉴定的经过和结果所撰写成的书面报告称为法医学鉴定书。随着法医学的
不断发展,已逐渐形成了不同的分支学科,如法医病理学、法医血清学、法
医临床学、法医人类学、法医毒理学、法医化学、法医精神病学等。虽然鉴
定书格式无明确规定,但不同的法医学分支学科的鉴定书书写都具有各自的
某些特点。一般法医学鉴定书的内容大致包括引言、鉴定事项、案情、检验、
说明、鉴定结论及结尾六部分。其中各部分所要求的内容已在《法医学概论》
中论述,这里不再赘述。
法医病理学鉴定书的书写除按照上述基本规则外,尚有其本身的特殊内
容,通常采取下列具体的书写形式及内容:
引言
主要包括委托机关名称、委托者姓名、委托时间、被检者的姓名、性别、
年龄、职业、住址以及鉴定事项、解剖地点、时间、临场者姓名、参加者姓
3
名等等。
X年X月X日,XX单位XX同志就XXX(性别、年龄、工作单位)
死亡一事,委托我室对下列事项进行法医病理学鉴定。
鉴定事项
1.外伤的部位、数量、程度。
2.死亡原因、外伤与死因的关系。
3.致伤物的性质、种类。
4.死亡性质及死亡方式。
5.死后经过时间、损伤时间。
6.其它需要鉴定的问题。
为此,我等于X年X月X日X时,在委托单位代表XXX同志及家属代
表XXX同志临场下,在XX法医解剖室(或其它地点)对XXX尸体进行
了系统法医学尸体剖验,并经详细病理组织学捡查(或/和其它检查)制成此
鉴定书。
案情摘要
摘录主要的发案经过和有关的调查材料(如病志、讯问笔录等)。
尸体剖验
(一)体表检查
1.一般所见性别,身长,体重,发育,营养状态,尸斑分布、颜色及
期别,尸僵分布及程度,尸体温度等。
2.头面部发长、颜色、数量,头发上有无附着物。头皮有无损伤,触
及颅骨有无骨折。面部有无肿胀、发纳、出血及损伤。眼睑有无水肿及皮下
出血,结膜是否充血及出血,巩膜有无黄染,角膜混浊程度及瞳孔大小,是
否等圆。鼻根是否偏位、塌陷,鼻腔及外耳道有无分泌物或血液,鼻孔周围
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有无泡沫及压痕,口唇有无紫缉、损伤、干燥,口角及下颌皮肤有无流注及
腐蚀痕,齿龈有无破损。牙齿是否完整,有无松动,舌是否有咬痕及舌的位
置。
3.颈项部气管是否居中,甲状腺有无肿大,颈部有无损伤、扼痕、索
沟、压痕。
4.胸部胸廓前后径及左右径,胸廓外形有无病理性改变、有无注射针
眼、损伤;肋骨触摸有无骨折。女性乳房有无肿块及咬伤。
5.腹部是否平坦,腹壁有无静脉怒张、损伤及疤痕。
6.会阴及肛门阴囊、睾丸有否损伤,阴囊干燥情况。女性外生殖器有
无血痕、精液等附着,前庭有无损伤。阴道内有无异物,分泌物涂片有否精
子,怀疑强奸案时,处女膜检查情况。肛门内有无异物。
7.驱干及四肢躯干有无压迫印痕、皮下出血。脊柱有无骨折或畸形。
腰舐部有无褥疮、臀部有无注射针眼。上、下肢的姿态,有无骨折、关节脱
位。肢体有无损伤,是否有注射针痕。手指甲内有无异物。手中是否抓有物
体或附着有异物。女尸大腿内侧有无损伤及精斑附着。
(-)内部检查
I.小脑扁桃体疝检查环椎后弓切除后,硬脑膜紧张程度;蛛网膜是否
透明、脑脊液性状,小脑扁桃体是否疝下枕骨大孔后缘。如疝下,疝出的程
度。是否有疝下小脑扁桃体组织碎片坠入脊髓腔、分布情况等。
2.头皮内、双侧颍肌、颅骨、颅底、硬脑膜等的状况。
3.脑及脊髓脑重量,有无肿胀,表面有无出血,冲击伤及对冲伤等,
大脑各切面所见情况,有无出血,中间性脑挫伤等。脊髓有无出血损伤、软
化坏死等。
4.胸腹腔所见各脏器位置、有无粘连、有无积血或积液,积液或积血
的量,腹膜是否光滑等。
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5.胸腺重量,实质残存情况,切面所见。
6.心包腔及心脏心包膜完整性、心包腔内是否有积液或积血.、量多少。
心脏重量、形状,心脏有无贯通伤,心外膜性状,外膜下有无出血点,冠状
动脉各主要分支情况,心脏各室壁厚度、各瓣膜周长,有无发育异常或病理
改变,室壁及室间隔切面有无梗死或挫伤所见,内膜透视度,有无增厚,内
膜下有无出血。左右冠状窦口是否通畅,阻塞程度,主动脉及冠状动脉是否
有粥样硬化,程度如何。
7.肺脏及气管气管内有无异物、出血及分泌物或胃内容,粘膜充血程
度或出血等。肺脏左右各自重量、大小、是否有充血、水肿,支气管内情况、
切面有无出血、梗死灶及切面颜色。
8.颈部甲状腺、各层肌肉有无受压、出血,淋巴结大小,颈静脉,动
脉检查所见,甲状软骨及舌骨检查情况。甲状腺重量、大小,是否有结节、
被膜情况、切面所见。
9.脾脏重量、大小、颜色、被膜是否光滑,有无皱缩、切面颜色,红
白髓界线是否清楚,被膜下有无梗死灶。
10.肾脏左右肾脏各自重量、大小,肾表面性状、颜色、被膜是否易
剥离,切面性状、颜色、皮髓质界线是否清楚、是否充血、水肿、皮质厚度,
肾盂粘膜是否充血.、水肿及炎性物。
11.肾上腺双侧肾上腺重量、大小、被膜及表面性状、切面皮质及髓质
有无增生、萎缩或出血等。
12.胃表面检查所见,胃内容物性状及量,胃粘膜改变情况。
13.肠包括十二指肠、空肠、回肠及结肠、各段肠管表面性状,内容
物性状及粘膜的检查所见。
14.肝脏重量、大小,边缘是否锐利还是圆钝,被膜色泽,是否有挫
伤、出血、破裂,肝质地硬度,切面颜色,肝小叶是否清晰,是否有出血、
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硬化性改变。胆囊及胆管内是否有结石、炎症等改变。
15.胰腺重量及长度,胰腺被膜是否光滑,有否出血,头、体、尾各
段切面是否有出血及范围。
16.子宫及附件(或睾丸)根据不同的情况进行相应的描述。
(三)组织学检查
通过常规取材,制片染色(H.E染色)后,进行显微镜观察,对镜下所见
加以客观、详细地描述。必要时可补充进行特殊染色、酶组织化学染色、兔
疫组织化学染色,并进行相应的观察和描述。
四、主要所见和诊断
根据尸体剖验的体表检查、内部检查及显微镜观察所见,重点将有意义
的发现分条目加以概括总结。
在某些案例的鉴定中还需要进行毒物检测及血清学检查,这些检查的结
果及所用检查方法也需在鉴定书中叙述。
说明分析讨论
根据检验的结果,结合案情材料和现场检验,对案件性质、死亡原因、
死亡方式、死亡时间、损伤特征及成伤原因等详细分析说明,以解答所委托
的鉴定事项,或鉴定人认为有必要说明的事项。此部分相当于科研论文的讨
论部分,表明鉴定人的意见、思维方法和总结能力,一般不能省略。
鉴定结论
根据检验的结果和说明理由,对所委托的鉴定事项作出严格并有科学根
据的结论,结论应简明扼要。
鉴定人单位名称、职称、学位
鉴定人签名、印章鉴定日期
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实习二法医病理学尸体解剖术式
一、目的要求
1.掌握尸体解剖术式、脏器取出及剖开方法。
2.了解正确的描述和记录方法。
3.熟悉解剖室的设备、常用器械及其使用方法。
4.了解寰椎后弓切除术操作方法。
二、实习内容
1.学习法医学尸体检验技术
尸体检查及剖验是法医病理学工作中一项重要的内容,法医学尸体剖验
与殷病理学尸体剖验有相似之处,但其本身还具有特殊性,法医学尸体剖
验的目的除确定死亡原因外,很多情况下还需要确定死亡方式、死亡时间,
推断致伤物乃至进行个人识别,这是一般病理学尸体剖验所不涉及的问题。
由于两者需要解决的问题差异,决定了法医学尸体剖验技术也具有相应的特
点。具体的法医学尸体剖验技术详见《法医病理学》中相应章节法医学尸体
检验内容。在学习掌握本章内容的基础上进步通过解剖例示教及参加尸体
剖验工作熟练操作技能。
检验尸体时应注意以下事项:
(1)了解案情尸体解剖前首先应向有关公检法人员了解案情,如果因
医疗纠纷进行尸检,应分别向死者家属、医院的主管医生及护士等详细了解
死者的病情及诊治过程。
(2)全面收集有关资料从接受任务到尸检结束,应收集案件的卷宗,
调查材料,或病志、各种临床检查材料,并进行登记、笔录、绘制简图、摄
影等工作。登记内容包括编号、死者姓名、年龄、性别、籍贯、职业、工作
单位、发现尸体的地点和时间、案情经过,要求鉴定及检验的事项,委托单
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位及人员姓名等。
(3)检验及尸体剖验系统化、记录规范化并全面系统地进行尸体检查,
对体表的各种损伤均需逐•检查。尸体解剖应全面,一般进行“三腔”包括
颅腔、胸腔、腹腔均应剖开检查,如特殊情况需要打开脊髓腔检查,切忌进
行“局部解剖”。否则可能遗漏重要所见。
检查记录要规范,如对创口的检验,不但要记录解剖位置,测量大小,
描述创口及周围皮肤、组织的改变,还要对创的各部分特征详细描述、记录,
并按检查顺序对损伤编号。记录用语应确切,简明扼要。如需要进一步检查、
化验,应按量提取组织器官及体液等检材;取材的部位要有代表性,各个器
它不能遗漏。其大小、厚薄及固定或分析方法,按要求进行。
(4)摄影工作应在现场对尸体的姿势、外貌、衣服、损伤等摄影取证。
尸体剖验时对各种检查所见也应予以充分显露和拍照,拍摄时应标记编号及
比例尺。
2.尸体解剖示教
仔细听取教师对法医学尸体检查及剖验的讲解并认真观察检验步骤及操
作方法。
3.熟悉解剖室的设备、常用器械及使用方法
现代化法医病理解剖室应具备的设施及设备包括充分的照明、通风、消
毒、上下水设施、自动升降式解剖台、尸体秤、脏器秤、火线检查及照像设
备、自动电吸引器、闭路电视摄像系统、尸体冷藏冷冻库、常用解剖器材(如
电动开颅锯及各种外科手术器械)等。
4.寰椎后弓切除术式检查枕骨大孔疝
枕骨大孔疝是危及人体生命的严重病理损害,也是研究颅脑病变和损伤
及脑死亡的不容遗漏或忽视的重要所见。经大量的法医病理尸体剖验表明,
采用传统的尸体剖验术式,即将大、小脑及脑干联合取出通过观察小脑扁桃
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压迹来判断是否有小脑扁桃体疝的检查方法还有许多不足之处,如尸体本身
个体差异,检查者判定的误差等。为使枕骨大孔疝及其病变在原位即可显露
清楚.检查即时、准确,防止人为改变和破坏,采用寰椎后弓切除术这一术
式,既能准确及时地查明脑疝的有无以及病变所见,还能有效防止诸多人为
现象。
寰椎后弓切除术式
1.开颅前,先使尸体俯卧位,在胸部下放一木枕,使项部伸展以便于操
作。
2.沿双侧颗骨乳突及其间的后发际作头皮及皮下软组织切口,深达骨膜。
3.再取此切口的中点,自枕骨粗隆起始沿背部正中线上的棘突作纵行切
开,也深达骨膜,必要时此切口沿棘突延至舐部。
4.紧贴枕骨、寰椎后弓、各棘突及两侧椎板骨膜剥离软组织(肌肉、肌
腱等),充分显露枕骨大孔下缘寰椎后弓及其下位椎弓等。
5.切除寰椎后弓(用咬骨钳先咬断此两侧薄弱部分,再用手术刀摘出后
弓),先查枕骨大孔硬脊膜紧张程度、有无出血等病变和损伤,再小心地沿枕
骨大孔下缘及硬脊膜背侧正中线切开硬脊膜,观察硬脊膜下并透过蛛网膜观
察蛛网膜下腔等有无病变和异常,尤其详查枕骨大孔疝(小脑扁桃体疝、小
脑扁桃延髓疝)以及脑疝程度,是否伴有软化、出血。碎断脑组织坠入椎管
或植入有髓(须取材制片镜检)。
6.在检查枕骨大孔疝的同时或之后,也须详查椎管和脊髓,尤其须注意
检查第•、二颈髓以及相邻的神经、血管有无软化、出血等病变或异常。
其他脏器的剖开术及取出方法详见《法医病理学》教科书。
作业
针对一次解剖,写出操作过程及解剖所见,并初步分析死因。
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实习三法医病理学组织切片制作及染色
目的要求
要求每位同学能够掌握取材、固定、水洗、脱水、透明、浸蜡与包埋,
切片制作等技术及操作过程。独立完成实验室的整个切片的制作过程。
一、取材
(-)要求取材是否正确、恰当直接影响切片的制作及正确诊断。
1.取材越快,越新鲜越好,防止组织腐败。
2.取材刀要锋利,切取时刀口垂直地切取,严禁挤压或用钳镶钳夹,以
免使组织或细胞变形造成人为的损伤。
3.取材大小,一般长1cm〜材m,宽lcm~2cm,厚度为0.3cm〜0.5cm。
材料过大在短时间内不易固定透,影响效果。
(二)方法
以下各器官的取材方法为一般性原则,具体器官的取材部位、数量等还
要根据具体案例的检查要求而定。
1.实质器官
心脏:一般情况下要求取心房、瓣膜、心室。也可分别取一块病变部位
带正常组织。也可单独取心室肌、乳头肌。
肺脏:常规取材应包括左右两肺(五个肺叶),可根据病变需要决定取材块
数,特殊情况下为区别在哪个肺叶上取的检材.可用形状做标志并做好记录。
肾脏:取材包括被膜、皮质、髓质和肾孟,并要求区别左右肾。
胰腺:常规取胰体部,为长方形,必要时加取胰头、胰尾。
肝脏:取长方形或三角形均可,带被膜。
脾脏:取材带被膜。
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2.管腔脏器取材时注意方向,如取大肠、小肠时,应考虑环行皱嬖,
沿肠管的长轴取(纵切)。食管、气管以横切面为宜。胃常规取材以胃底为好,
总之管腔脏器的全层构造都要取到。为了防止材料放入固定液后变形,将材
料取下后(如剪开的大小肠、胃等组织)应将浆膜面铺在滤纸上,然后入固
定液内,这样能防止或减少组织受压变形与收缩。
3.病变部位与正常部位都要兼顾
脑取材应能反映出脑各部位的变化,大脑取材一般用冠状切面法,包括
全脑(桥脑、延髓、小脑)、脊髓颈段及脉络从,共十一块。取材部位与形状
如下:
(1)额极;(2)中央前后回;(3)海马;(4)内囊;(5)丘脑;(6)枕
叶;(7)脉络丛;(8)桥脑;(9)延髓;(10)中脑;(11)小脑。必要时取脊
髓。取材时要带上软脑膜、脑室膜或软脊膜,因此刀要锋利。
取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都要兼顾,从前向后横切。
二、固定
(-)意义固定为组织切片制作的第二步骤,是做好切片的重要步骤
之一,如果首次组织固定不良,再重新固定也不如一次固定效果好。
实验时处死动物后应立即取材,这时组织及细胞短时间内仍然处于生前
状态,这就是“生命状态”。迅速将其固定就能有效地防止组织及细胞发生死
后的•系列变化。固定的关键在于取材后尽可能地及时地将所取的材料进行
固定,以防止其“死后”变化的进展。尽量使组织接近于生前状态,另外在
标本制作过程中还要经过许多步骤,为了防止组织结构及成份的破坏和溶解
消失,有必要使其转变为不溶性物质从而有利于保存,这就是固定的基本意
义。
固定的目的:
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1.阻止死后变化,防止组织的自溶与腐败。
2.使组织的结构及成份保存下来,如蛋白质、脂肪、糖原、酶等各种成
份与生活时的形态相仿。
3.便于染色,同时对组织有媒染作用,使不同的组织成份对染料有不同
的亲和力,使细胞各部易于着色。
4.能使组织硬化,为制作薄切片奠定基础。
注意:材料块不能过大,固定器皿不易过小,固定液量不易过少,应是
固定材料体积的20—30倍。
根据检验目的不同选择不同固定液,如做糖原检查就不能用含水的固定
液,做电镜检查必须用钺酸固定液等。
(-)固定液
用以固定组织的药剂称为固定液。
固定液分为两大类:一类称单纯固定液,由一种药剂组成;另一类称混
合固定液(或复合),固定液由二种以上的药剂组成,如Zenker等固定液。
1.固定液选择标准
①具有强的穿透力,固定均匀,能迅速渗透到组织内部使组织细胞结构
保持生活时期的相仿状态。
②不使组织过度收缩与膨胀而变形。
③能迅速使组织中的蛋白质、糖、脂肪等物质凝固而成为不溶性物质。
④使组织达到一定的硬度便于切片制作。
⑤价格便宜,容易买到,同时要配制方便。
2.单纯固定液
乙醇(酒精)(alcohol)>福尔马林(formalin)
重铭■酸钾(potassiumbichromate)、苦味酸(picricacid)
饿酸(osmicacid)>丙酮(acetone)、冰醋酸(glacialaceticacid)
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(1)乙醇(酒精)(alcohol)
是一种还原剂,不能与氧化剂混合使用,酒精容易购买到,固定用酒精
最好浓度在70%〜80%,酒精浓度愈大组织收缩愈严重,反之,太低则起不
到固定作用,由于酒精能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白,而后者的沉淀物易
溶于水,所以用酒精固定的标本细胞核着色不佳,另外,酒精还可溶解脂肪、
血红蛋白和多种色素。
脂肪组织易溶于酒精及二甲苯等有机溶剂,因此做脂肪染色必须制作冰
冻切片。
酒精优点:
①使用方便经济;
②市售有两种:一种是95%浓度,另一种称无水乙醇为100%;
③能硬化组织起固定作用;
④也是一种最常用的脱水剂。
缺点:穿透力小,由于被固定的组织表面硬化,固定液不容易渗透到组
织中去,所以用乙醇固定的组织材料要小。另外,使组织收缩严重,且染色
效果一般。
(2)甲醛(福尔马林)(formalin)
是一种还原剂,不能与氧化剂混合使用。它是一种最常用的固定液,可
应用于组织学、酶组织化学、免疫组织化学等染色,最好临用时现配。是一
种无色透明极易挥发有强烈刺激性气味的液体。商品甲醛为37%〜40%甲醛
水溶液,一般固定液的浓度为4%〜8%,习惯上称为10%或20%的福尔马林。
此液可按前述取材大小在常温下固定24h〜48h。若需要快速固定,可加温到
70℃〜80℃或者加温煮沸lOmin即可达到固定要求,这种快速固定组织块不
宜过厚或过大。缺点是组织收缩较严重。
配法:将商品甲醛1份与9份自来水混合即为10%(4%)浓度的甲醛固定
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液。
优点:①渗透力较强;②组织收缩小;③细胞核染色较好。
缺点:一般质量较差的formalin在低温下久存容易产生一种白色的沉淀
物称“三聚甲醛”即“付醛",经氧化成为甲酸而使溶液呈酸性,可影响细胞
核的嗜碱性染色,纠正办法是可在备用甲醛溶液中放入适量的碳酸钙或碳酸
镁。简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或者白色粉笔作为中和剂。另
外,酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑色细颗粒状物,称为福
尔马林色素,在切片上见到的是黑色小颗粒。这种色素颗粒既不溶于水也不
溶于酒精,影响染色效果和切片的观察。
除掉福尔马林色素颗粒的办法:
①Schridde法
25%氨水1ml
75%酒精200ml
切片脱蜡经70%酒精时,用上液浸泡半小时或稍长一些时间,然后水洗
再行染色。
②Verocay氏法
1%氢氧化钾水溶液1ml
70%酒精100ml
切片脱蜡经80%酒精时入上液处理10分钟.经70%酒精入水后即可染
色。
(3)镶酸(osmicacid),亦名四氧化钺
钺酸并不是酸,实际上是一种金属氧化物,为淡黄色结晶,价格昂贵,
其水溶液呈中性反应,只适用于特殊染色前的组织固定,如制作电镜切片前
的组织固定。钺酸为强氧化剂不可与酒精及甲醛混用,钺酸极易挥发,气味
有强烈的刺激性和固定作用,使用时必须十分小心,要有防护措施。
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特点:固定的组织必须小而薄,其主要优点是能将组织固定与生活时期
相仿,钺酸为脂肪及类脂质的优良固定剂,特别对显示线粒体及内质网有良
好的效果。
(4)丙酮(acetone)
丙酮能使蛋白质沉淀,其渗透力强,可使组织严重收缩,对核的固定欠
佳,目前在组织化学中,特别是酶的保存方面多采用冷丙酮固定法,主要用
于磷酸酶及氧化酶染色前的组织固定,有时也用于混合固定液中。
3.常用混合固定液
种类很多,根据检查目的不同可选择不同的固定液,现介绍常用的混合
固定液。
(1)Zenker固定液
重铝酸钾2.5g
升汞5g
蒸饵水100ml
冰醋酸5m1(临用时加入)
配法:首先将重铭酸钾、升汞和蒸储水混合后加温溶解,冷却后过滤,
置于棕色玻璃瓶中避光保存,这种配制的液体一般称为Zenker干液,也叫做
储存液或底液,此液较为稳定,即使配制一至二年后仍有固定作用,待组织
取材时在Zenker干液100ml中加入5ml冰醋酸即可使用,但加入冰醋酸后必
须立即使用,否则失去固定作用。
特点:对细胞核、胞浆染色均较清晰,也较稳定,对肌组织及结缔组织
染色效果好,材料厚度不超过2毫米,固定3-4小时即可,一般固定为12-24
小时,必须经流水洗12-24小时后再经酒精脱水。
(2)Camoy固定液
纯酒精(或者95%)6份
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氯仿3份
冰醋酸1份
此液穿透速度快,小块组织固定1-2小时即可,可固定细胞浆及糖原。冰
醋酸对染色质有固定作用,同时能抵消由于酒精引起的组织过度收缩与硬化,
为了减少组织的收缩可采用冷Carnoy固定液。
低温固定时,Carnoy固定液随组织一起放置冰箱中固定,一般固定组织
时间以不超过12h-18h为好,经此液固定的组织可直接入95%或者100%酒精
脱水,现用现配为佳。它既可用于•般组织学固定,乂为组织化学常用固定
剂,特别是用于糖原及脱氧核糖核酸(DNA)及核糖核酸(RNA)的固定。
三、水洗
用流水洗涤,目的是将组织块中的固定液取代出来。水洗时间数小时至
24小时。根据材料多少、大小可灵活掌握水洗工具,可用水洗筐或用纱布包
裹均可,应防止水流过大将组织块冲掉或丢失。
四、脱水
组织块固定后虽然已经硬化,但达不到切薄片的硬度,必须进行除固定
液以外的其它处理,脱水是继固定后的重要步骤。
经固定和水洗后的组织含大量水分,在这种情况下首先必须除去组织内
部的水分,这种除水的过程叫做脱水,脱水使用的药剂称为脱水剂。
脱水必须逐渐依次从低浓度酒精开始到高浓度酒精,否则会引起组织强
烈收缩变脆不利制片,但脱水不彻底也很难浸蜡。
常用脱水剂:酒精、丙酮、正丁醇等。
(-)酒精
一般是从70%酒精开始,80%-*90%-*95%->100%1-100%11,每步骤
脱水时间根据材料大小而灵活掌握,一般数小时到12小时更换一次酒精。
无水乙醇也用来配低浓度酒精,但价格较贵。可用市售95%酒精配成,
17
如70%酒精时取95%酒精70ml加蒸储水25ml至95ml;80%酒精取95%酒
精80ml加蒸镭水至95ml即可,依次类推。
(二)丙酮
脱水作用与酒精相似,虽其脱水作用比酒精强,但可引起组织块的收缩,
价钱较贵,故不宜用于一般组织脱水,它既有脱水作用又有透明作用,用丙
酮固定的材料要少脱水1-8小时即可。
五、透明
组织块脱水后需要透明,因为水与蜡不能相交换,需要借助石蜡诱导剂
的过度。石蜡诱导剂渗入之后组织块往往呈现透明状态,习惯上将石蜡诱导
剂渗入组织内的过程叫透明,而这种药剂称为透明剂。
透明的时间依组织块的大小而定,一般采用20分钟至1小时左右,如组
织块过大可延长透明时间,透明好的材料如同油炸的感觉呈透明状,最常用
的透明剂为二甲苯、氯仿、甲苯、香柏油等。
二甲苯:是无色透明的一种有机溶媒,有很强的刺激气味,易挥发,长
期接触对粘膜有刺激作用,对组织的透明作用很强,可使组织收缩变形,故
透明时间不宜过长。如遇到组织块内部或某个部位呈白色混浊状态时说明
脱水不彻底,如果造成透明不彻底应退回到100%酒精中重新透明。
六、浸蜡与包理
浸蜡的目的是为了能制作薄切片做准备,将透明好的组织块浸到融化的
石蜡中,使石蜡渗透到组织细胞内,将组织细胞内的二甲苯完全彻底地取代
出来,然后再用石蜡将组织包埋起来,冷却后,切成小块,修整好切面,再
用切片机制作薄的切片,这一过程称为浸蜡与包埋。
具体操作:
(-)浸蜡
将石蜡箱温调至58℃〜60℃左右,内有标明I、II、HI等字样的蜡杯或蜡
18
缸,组织块从透明的二甲苯II取出之后,本身就带有二甲苯,这时放入I号
蜡杯中2〜3小时左右,再将组织块移入II号蜡杯(纯蜡)2h〜4h,后再移入
W号蜡杯中(纯蜡)半天或者稍降蜡箱温度过夜,最后用融化的纯蜡作为包
埋用的蜡。注意浸蜡时蜡杯不要颠倒顺序使用,以免脱二甲苯不彻底。如遇
特殊情况需要延长浸蜡时间时可降低蜡箱温度或关闭蜡箱,需要时再开。温
度越高,时间越长组织块收缩越严重,而且材料脆而不易制作切片二
(-)包埋
包埋的方法有多种,最常用的是石蜡包埋法,此外还有火棉胶包埋法,
炭蜡包埋法、明胶包埋法及环氧树脂包埋法(电镜用)等。
包埋用纯石蜡溶解后(60℃)倒入包埋框内或者用纸盒代替也可,迅速
将浸好的组织块依次摆入框内,待蜡逐渐冷却凝固后,将组织材料一并凝结
在石蜡内。然后按组织块大小切成蜡块,组织四周蜡边留0.1厘米左右即可。
包埋时组织块的切面向下、放平,如果操作不熟练或在冬天包埋时最好用酒
精灯。在材料包入石蜡之前,稍在酒精灯上过一下(稍加一下温),以免材料
与包埋蜡温度不符造成材料与包埋蜡有一痕迹,切片时产生分离现象。蜡块
背面要标记年号、例号等字样的纸片,以长期保存。切完的蜡块表面要用烫
片板。烫一下封闭材料面,隔离空气接触可长期保存材料不干。
(三)蜡的种类
有两类:
1.蜂蜡:由动物体内提取的蜡,颜色微黄故也称为黄蜡,熔点在54℃左
右。特点是润滑带有粘性,冬天用量比夏天多。
2.石蜡:由矿物质中提取,质地较疏松,色白。根据蜡的熔点不同又可
分为软蜡及硬蜡。
熔点在50℃以下的石蜡称为软蜡,熔点在50℃以上的蜡称为硬蜡。两种
蜡可以混合在一起使用,无条件的情况下可用蜡烛来代替。石蜡熔点有52℃〜
19
54℃,56℃〜58℃,58℃〜60℃,60℃〜62℃。
七、切片
制作一张切片需要较多工具,如切片刀、磨刀机、切片机、水浴锅、干
燥箱等。干燥箱可用蜡箱代替使用。还需载玻片、手术刀、毛笔、弯镶子、
托盘、大平皿(展片使用)、烤片盒、蛋白甘油等。
(-)切片机种类有轮转式切片机,滑行式切片机(滑动式),冰冻切
片机,超薄切片机(电镜用)等。
(二)构造任何一个类型的切片机都是由四个基本部分组成:刀台、
标本台、旋转轮、控制切片厚度的微动装置(标有1-25或1-50的数字,每一
数字代表一个微米)。可根据需要调节厚度,一般组织片都采用与
(三)切片制作
1.将洁净的载玻片涂一层菲薄的蛋白甘油放入烤片盒内待用。
2.将切割修整好的蜡块用普通刀片先将蜡块的组织切面暴露出来修平,
固定在切片机上的标本台上并拧紧螺旋。
3.蜡块先固定在标本台上,切片刀固定于刀台上,拧紧固定刀的螺丝同
时调整刀与蜡块的切片距离使刀与蜡块贴紧后再固定刀台螺丝,刀的角度为
25°。
4.调节微动装置,调至切片所需厚度(一般为3-5微米)。
5.修材:右手握旋转轮摇把按顺时针方向均匀地摇动直到组织块切面完
整暴露为止。如果以上各部操作正常,可切出一条完整的连续的切片蜡带,
用毛笔轻轻将蜡带顺刀口挑下,放在托盘内待用。
(四)水浴锅通电后将平皿内水温升至45℃左右,将已切好的连续薄
片切分成数片,轻漂、水中展开,未展开时可用小弯锻子轻轻展开,然后用
涂有蛋白甘油的载玻片在水中选择完整的切片进行捞片。
(五)注意事项
20
1.切片刀要锋利,否则切片有切痕或组织破碎,甚至不能制成切片。
2.展切片时水温要适当。水温低,展不开切片,切片有皱折,影响效果;
如果水温过高,切片入水后切片可发生熔化。
3.摊好的切片在烤箱(温度60-65C)内烤干。
八、染色
(~)染色前准备工作
1.准备的工具染色缸或者12个盛各种不同浓度酒精的广口瓶,染色
缸及脱蜡、透明用的各两个二甲苯染色缸,盖片,带磨口盖树胶瓶一个,镜
子一把。
2.染色需要的试剂及染色液的配制
①蛋白甘油:用鸡蛋清(不要鸡蛋黄)用玻璃棒充分搅拌后用数层纱布
过滤后加等量的甘油搅均匀加数颗麝香草酚。
②盐酸一酒精:主要是染色分色时用,一般采用0.5%—1%的浓度,即
在100ml的70%—80%酒精中加入0.5ml或者1ml的浓盐酸。
③苏木素(hematoxylin)
苏木素为细胞核的染料,不经氧化的苏木素是不具有染色能力的。苏木
素的配方很多,一般组织化学染色所配制的苏木素有两类,其一是自然氧化
的苏木素;其二是加入氧化剂加速氧化的。
3.苏木素的配方
自然氧化Ehrlieh氏苏木素
苏木精2g
钱明矶3g
无水酒精100ml
甘油100ml
21
蒸播水100ml
将上述药品配在一起后装入玻璃瓶中,瓶口罩上数层纱布以防灰尘落入
染液,暴露于阳光中或空气中自然氧化(此过程也称为成熟),时间约6周一
8周以匕染液配制越久其染色能力越强,这种配方次可以大量配制以备用。
Delafield氏苏木素
苏木素4g
无水酒精25ml
钱明研饱和水溶液400ml
钱明祖饱和水溶液有两种配法,一种是10%钱明帆水溶液,另一种为1
份钱明机加蒸储水11份。
苏木素溶入酒精后,加入钱明矶液,倒入玻璃瓶中敞开瓶口,罩以数层
纱布,置光线充足处3~5天后过滤,再加入甘油100ml。
甲醇100ml,再置光线充足处经1个半月至两个月后成熟,此液可保存多
年不坏,染色时多采用蒸谯水稀释的染色液。
4.加氧化剂的苏木素配制
Harris苏木素
①液苏木精1g
无水酒精10ml
②液钾(镂)明矶20g
蒸储水200ml
先将①液用玻璃棒搅拌使苏木素溶解,再将②液煮沸溶化去火,速加入
①液,再加火,煮沸后去火,立即加入氧化汞0.5g,再煮沸,迅速冷却后加
入冰醋酸8ml过滤使用,此液为组织病理学常用染色液。
5.伊红:又名曙红(eosin)
是最常用的细胞质染料之一,外观为红色粉末,分两种:•种是酒精溶
22
性伊红,另一种为水溶性伊红。使用前要阅读说明书,以免配制错误。
配法:①0.5%水溶性伊红
取伊红0.5g,加蒸储水100ml即可,待彻底溶解后使用。
②0.5%酒精溶性伊红
取伊红0.5g加70%酒精100ml即可,待彻底溶解后使用。
一般组织病理学切片染色,染细胞核用苏木素,染细胞质用伊红,故一
般称这种染色法为HE染色(苏木素一伊红染色法),是诸多染色法中的最基
本染色法之一。
(二)染色方法及步骤
I.脱蜡将干燥的切片入二甲苯I10min-20min,然后移入二甲苯H
lOmin_20mino
2.脱苯用100%1无水乙醇脱苯2min—5min。再经100%II无水乙醇
2min—5min。
3.水化经95%酒精一90%酒精一80%酒精一70%酒精各数秒至Imin,
逐步入水浸洗数分钟,每步操作要轻柔。
4.染细胞核将切片移入苏木素染液中染10min—20min.
5.水洗(水洗•下将浮在表面的染渣去掉)。
6.分化1%盐酸酒精分化,时间几秒钟,肉眼观察切片组织材料呈粉
红色即可。
7.水洗水道流水洗(30min—24h),切片从粉红色转变为鲜艳的蓝色,
这过程也称为蓝化过程。
8.染细胞质用0.5%或者1%伊红溶液进行复染Imin—5min。
9.脱水切片脱水是由低浓度酒精到高浓度酒精。将切片入70%-80
%―90%->95%酒精。切片在酒精内时间为儿秒钟,时间长,伊红易脱色。
应注意伊红与苏木素的对比染色的色调适合。
23
10.彻底脱水100%酒精I5min-10min,再入100%11酒精5min-10min。
11.透明入二甲苯I2min—5min,再入二甲苯H2min-5min。
(三)封片与染色结果
用中性树胶进行封固切片,细胞核经苏木素染成鲜艳的蓝色,细胞质核
仁、肌纤维、胶原纤维、红细胞等呈红色。
为了便于记忆:将HE染色程序列简表如下:(脱蜡)二甲苯1-二甲苯
II-*无水酒精无水酒精11-95%-*90%-80%-70%-可用水洗一下也可
省略f苏木素(染细胞核)(10min-20min)一自来水洗一下一1%盐酸酒精
分化一自来水洗一0.5%伊红(染细胞质)一可直接脱水70%f80%-90%f
95%-100%I-100%H酒精各稍停片刻(为了脱水彻底),透明二甲苯I一二
甲苯H,中性树胶封片。
常规涂片染色的操作方法:
涂片的常规染色程序与切片染色程序一样,不同的是固定液不同,操作
时间短。
涂片自然干燥或者加温干燥后用甲醇固定,待固定液干燥后,直接染苏
木素(2min-5min)-水洗一下去浮色-1%盐酸酒精分化(浸1—2次即可)
f流水洗切片(5min以上)一染伊红(2min-5min)f脱水:70%~80%f
90%-95%酒精各数秒,100%1—100%11酒精各稍停片刻(为了脱水彻底)
一透明:二甲苯I一二甲苯H,中性树胶封片。
(四)两种常用的特殊染色方法
Mallory染色
配方:酸性复红3克
苯胺兰1克
桔黄G3克
磷铝酸1克
24
蒸储水200ml
染色方法:
1.石蜡切片常规脱蜡至水。
2.入3%重倍酸钾媒染12h—24h:如果固定的材料含升汞可省此步骤,
但需脱汞。
3.蒸储水洗两次。
4.入Mallory染色液中染5min。
5.蒸懦水洗。
6.95%酒精分化约3min—5min,显微镜卜控制染色程度。
7.ioo%i、ioo%n酒精脱水。
8.二甲苯I、二甲苯II透明。
9.树胶封片。
结果:胶原纤维及粘液呈深蓝色,红细胞呈红黄色,肌组织呈红色,弹
力纤维呈玫瑰红色。
Weigert染色(弹性纤维染色法)
盐基品红2g
间苯二酚4g
蒸储水200ml
配制方法:将上述药一起放入烧杯内,加热煮沸,再加29%三氯化铁水
溶液25ml,用玻璃棒搅匀,继续煮沸2min—5min,冷却后过滤。倾去滤液不
用。
将滤纸及沉淀物一同放入烧杯内,放在干燥箱内烘干,取出加95%酒精
200ml,加水煮至沉淀物尽溶,拿出滤纸冷却后过滤并补足蒸发失去的酒精,
最后加入浓盐酸4ml即可,此液可保留数月。
染色方法:
25
1.切片脱蜡至酒精。
2.染Weigert氏液20min—60min。
3.用95%酒精洗去剩余染液,在显微镜下观察结构细节,不清时可用1
%盐酸酒精分化。
4.自来水洗。
5.以1%中性红做对比染色或用明矶苏木素染后,再用稀释伊红或用Van
gieson液染色。
6.用95%酒精分化,无水酒精脱水。
7.二甲苯I、II透明。
8.树胶封片。
结果:弹力纤维显示蓝黑色。用中性红做对比染色,肌组织呈红色。用
Vangieson液对比染色,肌组织呈黄色,胶原纤维呈鲜红色。
作业:利用业余时间,熟悉制作HE切片的过程。
26
实习四尸体现象
一、目的要求
1.熟悉尸体现象的种类、形成机制。
2.掌握尸体现象的形态特征及其法医学意义。
二、大体标本幻灯
早期尸体现象:尸斑、尸僵、尸体痉挛、肌肉松驰、皮革样化、角膜混
浊。
晚期尸体现象:腐败所致巨人观、腐败气泡、泡沫肝、死后分娩、白骨
化、木乃伊、尸蜡、泥炭糅尸。
三、组织切片
1.切片79号尸斑沉降期(livormortis)
皮肤层次分明,表皮完整,有角化层覆盖,上皮脚与真皮乳头相嵌。乳
头及真皮内小静脉与毛细血管扩张。扩张的血管内充满红细胞。红细胞体积
增大,相互拥挤。
2.切片2号泡沫肝(foamyliver)
肝小叶界限不清,实质内有少量空泡。肝细胞索解离,肝细胞呈一致性
粉染,胞体肿胀,核溶解消失。
3.切片70号肾脏自溶(autolysisofthekidney)
可见肾皮质、髓质结构层次尚清楚。皮质肾小球结构清晰,毛细血管略
扩张,充满红细胞,肾小球囊内可见粉染物。大部分近曲小管上皮细胞肿胀、
脱落,细胞核消失,细胞溶解碎裂,部分管腔结构不清。远曲小管上皮细胞
核尚清楚。但大部分与基底膜分离。髓质各肾小管上皮细胞核较清晰,间质
血管扩张充满红细胞(血红蛋白已脱失)。
27
4.切片45号胰腺自溶(autolysisofpancreas)
可见粉染腺小叶,腺泡的细胞呈一致性粉染,核消失,结构模糊,胰岛
模糊不清,不能辨认。小叶内有许多空泡,间质疏松增宽。
5.切片39号脾自溶(autolysisofspleen)
脾内空泡形成,红白髓界限模糊不清,白髓解离,细胞数量减少,中央
动脉管壁粉染,被膜结缔组织结构模糊。
6.切片30号脑自溶
可以辨认为脑组织,脑实质内神经细胞核着色不良,神经细胞及胶质细
胞肿胀,大部分神经细胞核消失,胞质呈均质状,有的神经细胞及尼氏体呈
中心性消失,膜下积聚,细胞膜皱缩。血管壁平滑肌细胞结构不清。
作业
1.脑死亡的标准是什么?
2.各尸体现象的概念、出现时间及法医学意义。
3.自溶和坏死的区别。
4.尸斑、尸僵及角膜混浊的发生机制是什么?它们在推断死亡时间上有
何意义?
5.尸斑与皮下出血怎样鉴别?
6.死后凝血块与血栓怎样鉴别?
7.自溶与坏死在形态上如何区别?
8.尸体器官组织自溶的顺序及影响因素是什么?
28
实习五机械性损伤1
(Mechanicalinjury)
一、目的要求
1.掌握损伤的种类、分类及其意义
2.掌握钝器伤与锐器伤的特点及鉴定
二、大体标本幻灯
观察内容:
1.钝器损伤种类:表皮剥脱、皮下出血、挫裂伤。
2.棍棒伤、砖石伤、斧锤等工具伤。
3.高坠损伤。
4.交通工具损伤。
6.切创(菜刀、单刃小刀,剃头刀切创)。
7.刺创(刺刀、匕首、手术刀、三角刮刀、杀猪刀刺创)。
8.砍创(菜刀、砍柴刀、砍骨刀、大刀、恻刀)。
9.防卫创。
10.剪切创。
11.枪弹创种类(擦过性、盲管性、回旋性、贯通性枪弹创)。
12.射入口、射出口及枪械。
13.爆炸伤。
表皮剥脱(abrasion)、皮内出血(intracutanoushemorrhage)>挫裂创
(laceration)>肝破裂(liverrupture脾破裂(spleenrupture)、肾破裂(kidney
rupture)肺破裂(lungrupture)、肾破裂(kidneyrupture)
三、组织切片
29
1.切片77号:皮下出血(subcutaneoushemorrhage)
皮下脂肪组织和结缔组织内有片状红染区。真皮结缔组织内(毛根和皮
脂腺之间)有散在红细胞;皮下脂肪、结缔组织内有大量红细胞。红细胞有
的形态完整,着色鲜艳,有的呈星形淡染,胶原组织肿胀,呈嗜伊红性,并
有中性粒细胞、单核细胞浸润。
2.切片78号:皮肤擦伤(skinabrasion)
表皮处有缺失,真皮结缔组织内(毛根和皮脂腺之间)有散在红细胞,
皮下脂肪内出血。表皮挫碎、坏死,细胞核深染呈蓝色,皮下脂肪组织间隙
有点片状出血灶。
3.切片64号:肝破裂(liverrupture)
破碎边缘肝细胞灶性坏死,局部出血,伴肝窦内白细胞增多,江管区有
少量淋巴细胞浸润。小叶中央静脉和汇管区血管空虚。
4.切片46号:子宫破裂
子宫肌层内可见大量聚集红细胞,伴炎细胞浸润。
5.切片66号:膀胱挫伤
膀胱粘膜层内有散在红细胞。
6.观察检案切片:肝破裂、肾挫裂伤、脾破裂、子宫破裂、心脏挫伤、
十二指肠坏死。
四、作业及思考题
1.通过镜下观察说明皮下出血与尸斑的区别。
2.钝器伤与锐器伤的区别和联系是什么?
3.擦伤及其法医学意义?
4.坠落伤有哪些特点?如何进行法医学鉴定?
5.交通事故损伤有哪些特点?如何进行法医学鉴定?
30
实习六机械性损伤2
高坠死亡动物实验
一、目的要求
i.掌握高坠死亡动物的损伤特征及死亡原因。
2.熟悉高坠动物的死亡过程及表现。
二、实验内容
高坠死亡动物实验
三、实验材料及方法
1.实验动物:成年健康家兔,雌雄任选,体重2—2.5kg,四肢、脊柱无
陈旧性损伤及畸形。
3.步骤:
选择平坦地面,高度15—20米。
⑴实验前检查记录生命体征:呼吸、心率、瞳孔、四肢情况。
⑵选择一高处,坠落家兔,头颅部朝下;观察高坠过程中家兔行为表现。
⑶观察着地后家兔表现及损伤情况。
(4)损伤后检查及尸体解剖检查。
⑸必须进行系统检查、解剖,记录阳性发现。
4.书写实验报告。要求按照正规法医病理学鉴定书的格式书写系统解剖
过程并分析死亡原因,给出鉴定结论。
思考题
1.高坠损伤的基本特点有哪些?
2.高坠损伤的严重程度与哪些因素有关?
3.如何鉴别生前高坠致死与死后抛尸伪装高坠?
31
附鉴定书
一九九X年X月X日十九时,刑警大队业务值班室接和平区公安分局报
告:“今日十七时三十分许,郝XX(男,31岁,住和平区同泽街六段13里
新华大院8单元7楼1号)被发现躺于和平区同泽街六段13里新华大院4单
元楼前,头上有伤,送至某医大急诊室时已死亡,要求派员勘查现场及检验
尸体”。接报后,我等立即赶赴现场,经现场勘查及在刑警大队解剖室检验尸
体后,制成本鉴定书。
一、尸体检验情况
(一)尸体衣着
尸体衣着已被家属翻动。
上身外穿棕色皮夹克,前襟敞开,内着紫红色毛衣,棕色黄花毛背心,
蓝色套头线衣,白背心。
下身外着棕色皮裤,内着灰色毛衣,灰色线裤,蓝色三角裤衩。
脚穿黑灰色布面棉鞋,内着蓝底花袜。
外衣皮领左侧领口上10cm处,可见1.0cm破口,衣领贯通。左前襟在底
边上27cm,中缝左侧13.5cm处可见左上右下斜行1.3X1.5cm破口,右侧前襟
右底边上36cm,中缝右侧10cm处有一三角形1.3X0.8cm破口,右后襟右底
边上30cm,右背缝上有一星芒状0.4X0.3cm破口。左袖内侧袖口上13cm袖
缝上有一不规则形L8X1.2cm破口,破口处皮革外翻,左袖外侧袖口上15cm,
袖缝前3cm处有一类圆形0.25X0.25cm破口。右袖内侧袖口上5.6cm,袖缝
前2cm有-不规则形2X0.8cm外层皮革破口,破口处皮革外翻。
各层衣着与外衣破口相对应处均有相对应破口。背心右前襟在底边上
30cm有一1.8XL0cm破口,其它各层衣着与此破口相对应处均无破口。
外裤右裤腿前侧在裤口上83cm处有-1.0X0.8cm皮革皮瓣,皮瓣外翻。
右裤背侧在右裤口上87.5cm处有一左上右下斜形1.3X0.2cm破口,其内各层
32
衣着与外裤破口对应处均有相对应破口。
(-)尸体现象
尸长177cm,发育正常,营养良好。未见尸斑,尸僵存在于全身各大关节。
黑发,发长5cm。双睑闭合,角膜透明,左右瞳孔直径均0.5cm。双眼球睑结
膜苍白,无出血点。口鼻腔及双外耳道无异物。舌位于齿列内,牙齿无新鲜
松动。
(三)损伤及解剖检验
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