2025年高考生物总复习：基因工程的基本工具与操作程序

课时6基因工程的基本工具与操作程序

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课标要求核心考点五年考情核心素养对接

2023：重庆T12、湖北T4和T22

基因工程的基(4)、新课标T6；

本工具2022：湖北T24(3)；

1.阐明DNA重组技术的2021：湖北T7、全国乙T38

1.科学思维一一建立

实现需要利用限制性内2023：辽宁T8和T25、江苏T22、天

模型：基因工程的

切核酸酶、DNA连接酶津T17、山东T25、湖南T19(2)、

操作流程。分析与

和载体三种基本工具；全国乙T38、浙江1月T24(5)；

综合：理解基因工

2.阐明基因工程的基本2022：江苏T24、全国乙T38、辽宁

程的工具；PCR的原

操作程序主要包括目的T12和T24I、天津T15；

理，推断PCR反应

基因的获取、基因表达2021：山东T25、辽宁T24、广东

所需的条件；根据

载体的构建、目的基因基因工程的基T22、湖北T16、全国甲T38、天津

基因表达的过程，

导入受体细胞和目的基本操作程序T16、江苏T23、福建T21、浙江6月

推断目的基因检测

因及其表达产物的检测T29(二)(2)；

与鉴定的方式。

鉴定等步骤；2020：浙江7月T24和T29(二)

2.科学探究一一通过

3.DNA的提取和鉴定；(1)(2)、浙江1月T29(二)

DNA的粗提取与鉴

4.利用聚合酶链式反应(2)；

定及DNA片段的扩

(PCR)扩增DNA片段2019：江苏T33、全国IT38、天津

增与鉴定的实际操

并完成电泳鉴定，或运T9

作，培养科学探究

用软件进行虚拟PCR实2023：江苏T9D、广东T11；

DNA的粗提取能力

验2022：山东T13；

与鉴定及DNA

2021：山东T13；

片段的扩增与

2020：海南T10；

鉴定

一2019：江苏T10

1.基因工程是高考的重点，常以科研或生产实践为情境，考查基因工程的基本工具及基本

操作程序，也常与核酸的结构、遗传的物质基础、细胞工程、胚胎工程等知识相结合进

命题分析预测行综合考查，多以非选择题形式呈现，但也可以选择题的形式呈现。

2.预计2025年高考试题仍可能延续往年的考查形式及特点，分层设置问题，多角度考查

基因工程的工具、操作程序等相关知识，同时原因分析型试题的比例将大大增加

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考点1基因工程的基本工具

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P343

I-I

1.基因工程的概念

(1)手段：按照人们的愿望，通过［1］转基因等技术,赋予生物新的遗传特性。

(2)目的：创造出更符合人们需要的新的生物类型和［2］生物产品。

(3)操作水平：［3］分子水平。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作

-4］重组DNA技术。

2.基因工程的基本工具

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教材补遗［选必3P72“旁栏思考”］DNA连接酶和DNA聚合酶不是一回事。原因：①DNA连接酶是催化

两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能催化单个脱氧核甘酸加到已有的DNA片段3,末

端的羟基上，形成磷酸二酯键；②DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为模板，而DNA连接酶起作用

时不需要模板。

3.与DNA有关的几种酶的比较

\项目

\作用底物作用结果

种类\

限制酶DNA分子切开磷酸二酯键，形成黏性末端或平末端

DNA连接酶两个DNA分子片段通过形成磷酸二酯键，进而形成新的DNA分子

DNA聚合酶DNA片段、脱氧核甘酸通过形成磷酸二酯键，进而形成新的单链DNA分子

DNA酶[10]DNA分子断开磷酸三酯键，形成脱氧核甘酸

解旋酶双链DNA分子断开碱基对间的氢键，形成单链DNA分子

RNA聚合酶DNA片段、核糖核甘酸通过形成磷酸二酯键，进而形成单链RNA分子

基础自测

1.重组DNA技术所需要的工具酶有限制酶、DNA连接酶和载体。（X）

2.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核甘酸序列。（X）

3.切割质粒的限制性内切核酸酶均能特异性地识别6个核甘酸序列。（X）

4.限制酶和DNA连接酶的作用部位一致，但作用相反。（4）

5.所有DNA连接酶都能连接黏性末端和平末端。（X）

6.载体的种类有质粒、噬菌体和动植物病毒等。（4）

7.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选的标记基因。（X）

深度思考’

1.原核生物中存在限制酶的意义是什么？

提示当外源DNA入侵时，原核生物会利用限制酶切割外源DNA以保证自身安全，这是原核生物在长期

进化过程中形成的防御机制。

2.原核生物中限制酶为什么不切割自身的DNA?

提示原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已被修饰等。

3.基因工程中的载体与细胞膜上的载体相同吗？

提示不同。基因工程中的载体通常是质粒、噬菌体、动植物病毒等，主要作用是携带外源基因进入受体

细胞，并在受体细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA进行同步复制；细胞膜上的载

体一般为蛋白质，主要是运载要进入细胞的特定物质。

4.天然质粒一般不能直接用作基因工程载体的原因是什么？

提示只有具有能自我复制、有一个或多个限制酶切割位点、有标记基因及对受体细胞无害等特点的质粒

才可以直接用作基因工程的载体。实际上天然质粒一般不完全具备上述条件，其往往需要进行人工改造后

才能用于基因工程操作。

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P345

命题点基因工程所需的工具酶分析

1.[2023新课标]某同学拟用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA连接酶为工具，将目的基因（两端

含相应限制酶的识别序列和切割位点）和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点

如图所示。

下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是（C）

A.质粒和目的基因都用酶3切害U，用Eco〃DNA连接酶连接

B.质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA连接酶连接

C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA连接酶连接

D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用Eco〃DNA连接酶连接

解析只用一种限制酶切割质粒和目的基因，会使质粒和目的基因发生自身环化或者使目的基因在质粒中

反向连接，而且酶3切割产生平末端，Eco〃DNA连接酶不能连接具有平末端的DNA片段，A错误；用

酶1切割目的基因，产生的是黏性末端，用酶3切割质粒，产生的是平末端，无法连接，B错误；质粒和

目的基因都用酶1和酶2切割后，可使用T4DNA连接酶连接，使目的基因定向插到质粒中，C正确；用

酶4切割质粒会破坏标记基因，不能选择酶4切割，D错误。

通性通法

图解限制酶的选择依据

（1）根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类

①应选择位于目的基因两端的限制酶，如图甲中可选择Psrl。

②不能选择目的基因内部的限制酶，如图甲中不能选择I„

（2）根据质粒的特点确定限制酶的种类

①通常选择与待切割目的基因相同的限制酶，以确保出现相同的黏性末端，如图乙中的Psfl。

②在只有一种标记基因时，选择的限制酶不能破坏标记基因，如图乙中限制酶Snial会破坏标记基因。

2.[2023保定模拟，10分]如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题。

（1）a和质粒的化学本质相同，都是DNA,二者还具有其他共同点，如能够自我复制（写出一条

即可）。

-ACGCGT-

(2)若质粒的切割末端为一TGCGC,则与之连接的目的基因切割的黏性末端应为-----A^,可使用—

DNA连接酶把质粒和目的基因连接在一起。

(3)氨苇青霉素抗性基因在质粒DNA上作为标记基因，其作用是便于重组DNA的鉴定和筛

选。

(4)下列常在基因工程中作为载体的是(C)

A.苏云金杆菌抗虫基因

B.农杆菌环状RNA分子

C.大肠杆菌的质粒

D.动物细胞的染色体

(5)除质粒外，常用的载体还有噬菌体和动植物病毒等。

解析(1)图中a是拟核DNA,拟核DNA和质粒的本质都是DNA分子，均能够自我复制。(2)DNA

连接酶可以将具有互补末端的2个DNA片段连接在一起，形成重组DNA分子，若质粒的切割末端为

—ACGCGT-

-TGCGC,则与之连接的目的基因切割的黏性末端应为A-o(3)质粒上常具有标记基因(如抗生

素的抗性基因)，便于重组DNA的鉴定与筛选。

考点2基因工程的基本操作程序

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P346

1.基因工程的基本操作程序

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教材补遗[选必3P77“相关信息”]Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人

和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体。

2.利用PCR获取和扩增目的基因

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PCR与体内DNA复制的异同

类型PCR体内DNA复制

时期人工控制，随时进行有丝分裂和减数分裂前的间期

场所细胞外细胞内

解旋方式90℃以上高温条件下变性解旋解旋酶催化

酶耐高温的DNA聚合酶解旋酶、DNA聚合酶等

子链合成方式从两条引物的3,端开始连续合成一条连续合成，另一条不连续合成

结果扩增DNA片段或基因合成整个DNA分子

①都需要DNA模板、引物、能量和一定的温度条件；②都遵循碱基互补配对原贝

相同点

③DNA的合成都是从子链的5,端向3,端延伸

基础自测，

1.基因表达载体中含有启动子和密码子。（X）

2.基因表达载体的构建是基因工程的核心。（4）

3.启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起始密码子。（X）

4.Ti质粒上的T—DNA可与双子叶植物受体细胞的染色体DNA整合在一起。）

5.将重组表达载体导入动物受精卵常用基因枪法。（X）

6.PCR扩增时，50℃左右，引物与作为模板的单链DNA特定部位相互配对、结合。（4）

深度思考、

1.构建基因表达载体时，为什么一般选用两种限制酶切割目的基因和载体？

提示因为用不同的限制酶分别处理目的基因和载体时，可以使目的基因两侧和载体上各自具有两个不同

的黏性末端，防止目的基因或载体发生自身环化及目的基因与载体反向连接。

2.启动子与起始密码子、终止子与终止密码子有什么不同？

提示启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比

项目本质位置功能

启动子DNA片段目的基因上游RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA

终止子DNA片段目的基因下游使转录在所需要的地方停下来

mRNA上三个

起始密码子mRNA首端翻译的起始信号（编码氨基酸）

相邻的碱基

mRNA上三个

终止密码子mRNA尾端翻译的结束信号（不编码氨基酸）

相邻的碱基

3.在构建基因表达载体时，目的基因的序列中能否含有用到的限制酶的识别序列，为什么？

提示不能，因为目的基因的序列中若含有用到的限制酶的识别序列，目的基因可能会被切断。

4.在用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的过程中，为什么一定要将目的基因插入Ti质粒的T—DNA

±?

提示Ti质粒的T-DNA是可转移的DNA,可转移到受体细胞，并且整合到受体细胞染色体DNA上。将

目的基因插入Ti质粒的T—DNA中，就可以使目的基因进入植物细胞。

5.复性时，引物与DNA模板的结合是随机的，但两条解开的DNA模板链结合的概率较低，其原因是什

么？

提示①模板链一般较长，比引物复杂得多，重新结合的概率低；②加入引物的量足够多，而模板链较

少，故引物和模板链结合的机会远大于模板链间的。

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P347

命题点1PCR的过程和应用分析

1.[2021湖北]某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）

外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应中非特异条带的产生，以下措施中有

效的是（D）

A.增加模板DNA的量B.延长热变性的时间

C.延长延伸的时间D.提高复性的温度

解析PCR过程中，引物和模板不完全配对会形成非特异条带，增加模板DNA的量可以提高反应速率，

但不会减少反应中非特异条带的产生，A错误；延长热变性的时间和延伸的时间对延伸中的配对影响不

大，故不能有效减少非特异性条带的产生，B、C错误；非特异性条带增加的原因可能是复性温度过低使

引物与模板的结合位点增加，故可通过提高复性的温度来减少非特异性条带的产生，D正确。

2.[2022辽宁]抗虫和耐除草剂玉米双抗12—5是我国自主研发的转基因品种。为给监管转基因生物安全提

供依据，采用PCR方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。下列叙述正确的是（B）

A.预变性过程可促进模板DNA边解旋边复制

B.后延伸过程可使目的基因的扩增更加充分

C.延伸过程无需引物参与即可完成半保留复制

D.转基因品种经检测含有目的基因后即可上市

解析预变性的温度为94℃,在这个温度下，双链DNA解旋为单链，但模板链不易和引物结合，不能进

行复制，A错误。延伸的目的是合成新的子链，后延伸延长了延伸时间，使目的基因的扩增更加充分，B

正确。延伸过程需要引物与模板链结合，在引物的3'端加上相应的核甘酸，C错误。转基因品种经检测含

有目的基因且已经表达使生物体表现出相应性状后，还需要经过系列的安全性评价，符合相应标准后才能

上市，D错误。

命题点2基因工程的基本操作程序分析

3.[2023全国乙节选，10分]GFP是水母体内存在的能发绿色荧光的一种蛋白。科研人员以G/T基因为材

料，利用基因工程技术获得了能发其他颜色荧光的蛋白，丰富了荧光蛋白的颜色种类。回答下列问题。

（1）构建突变基因文库。科研人员将GFP基因的不同突变基因分别插入载体，并转入大肠杆菌制备出

GEP基因的突变基因文库。

（2）构建目的基因表达载体。科研人员从构建的GFP突变基因文库中提取目的基因（均为突变基因）构

建表达载体，其模式图如图所示（箭头为GFP突变基因的转录方向）。图中①为终止子；②为启动

子，其作用是被RNA聚合酶识别并结合，驱动GF尸突变基因的转录。

（3）目的基因的表达。科研人员将构建好的表达载体导入大肠杆菌中进行表达，发现大肠杆菌有的发绿

色荧光，有的发黄色荧光，有的不发荧光。请从密码子特点的角度分析，发绿色荧光的可能原因是密码

子的简并使基因突变后编码的蛋白质与突变前相同（答出］点即可）。

（4）新蛋白与突变基因的关联性分析。将上述发黄色荧光的大肠杆菌分离纯化后，对其所含的GFP突变

基因进行测序，发现其碱基序列与GFP基因的不同，将该G“突变基因命名为KF尸基因（黄色荧光蛋白

基因）。若要通过基因工程的方法探究以中基因能否在真核细胞中表达，实验思路是选择合适的运载

体，利用合适的限制酶和DNA连接酶将177基因和运载体连接起来，构建基因表达载体，之后将基因表

达载体导入酵母菌，检测酵母菌是否会发黄色荧光。

解析（2）一个基因表达载体的组成，除了目的基因，还必须有启动子、终止子以及标记基因等。启动

子是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才

能驱动基因转录出mRNA,最终表达出人类需要的蛋白质。终止子相当于一盏红色信号灯，使转录在所需

要的地方停下来，位于基因的下游，也是一段有特殊序列结构的DNA片段。（3）结合题中信息可知，将

构建好的表达载体导入大肠杆菌中进行表达，发现有的大肠杆菌发绿色荧光，即GFP蛋白的荧光颜色，推

测发绿色荧光的可能原因是密码子的简并使GEP基因突变后编码的蛋白质与突变前的相同。（4）基因工

程的基本操作程序包括：①目的基因的筛选与获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细

胞；④目的基因的检测与鉴定。欲通过基因工程的方法探究KFP基因能否在真核细胞中表达，可通过基因

工程的方法将目的基因导入酵母菌，之后检测酵母菌是否发黄色荧光，如果发黄色荧光，则可证明KFP基

因能在真核细胞中表达，否则，不能证明｝TP基因能在真核细胞中表达。

4.［2021福建节选，10分］微生物吸附是重金属废水的处理方法之一。金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在

于动植物中的金属结合蛋白，具有吸附重金属的作用。科研人员将枣树的基因导入大肠杆菌构建工程

菌。回答下列问题：

（1）根据枣树的MTcDNA的核甘酸序列设计了相应的引物（图中甲），通过PCR扩增基因。已知A

位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置。选用的引物组合应为引物1和引物4。

甲

II引物4

引物1Iii祐MT.DNA

A位点B位点________________

-ACGAG--GAATC--CTGC/io--GCctcG--GGTAct-

-GAGCTC--CTATAG--GACGTC--GGGfCC--CfATGG-

XhoIEcoRVPst1SmaIKpn.I

(2)本实验中，PCR所用的DNA聚合酶扩增出的MT基因的末端为平末端。由于载体E只有能产生黏性

末端的酶切位点，需借助中间载体P将基因接入载体Eo载体P和载体E的酶切位点及相应的酶切序

列如图中乙所示。

①选用EcoRV酶将载体P切开，再用T4DNA(填“T4DNA”或“Eco/ZDNA")连接酶将

基因与载体P相连，构成重组载体P'。

②载体P'不具有表达基因的启动子和终止子。选用XhoI和PstI酶组合对载体P和

载体E进行酶切，将切下的基因和载体E用DNA连接酶进行连接，将得到的混合物导入用离子

处理的大肠杆菌，筛出MT工程菌。

解析(1)据题中信息知，A位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置，若要通过

PCR技术扩增基因，应选用引物1和引物4。(2)①通过PCR技术扩增出的基因的末端为平末

端，载体P中有限制酶X/?。I、EcoRV、PstI>SmaI的酶切位点，用限制酶I,PstI切割载体

P得到的均为黏性末端，而用限制酶EcoRV和I切割载体P得到的均是平末端，但不能用限制酶Sw

I进行酶切，若用限制酶I进行酶切，无法将目的基因插入载体E中，因此，应选用EcoRV酶将载

体P切开，再用能连接平末端的T4DNA连接酶将基因与载体P相连，构成重组载体P。②载体P,不

具有表达基因的启动子和终止子。再选用X/?。I和PstI酶组合对载体P和载体E进行酶切，将切下

的基因和载体E用DNA连接酶进行连接，将得到的混合物导入用钙离子处理的大肠杆菌中，筛出MT

工程菌。

考点3DNA的粗提取与鉴定及DNA片段的扩增与鉴定

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P348

1.DNA的粗提取与鉴定

2.DNA片段的扩增及电泳鉴定

（1）原理

（2）方法步骤

基础自测

1.进行“DNA的粗提取”实验时，为获得较好的提取效果，应离心2次，第一次离心后应保留上清液，第

二次离心后应弃去上清液，且两次离心的转速也不相同。（4）

2.TaqDNA聚合酶是用PCR仪对DNA分子扩增过程中常用的一种耐高温的DNA聚合酶。（7）

3.PCR中离心的目的是让反应组分在离心管中分层分布。（义）

4.电泳鉴定PCR产物时，应在每个加样孔中加入等量的PCR产物与凝胶载样缓冲液的混合液。（X）

5.粗提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂后显蓝色［2023江苏，T9D］。（X）

6.过滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了防止DNA降解［2022山东，T13A］。（Y）

深度思考、

1.能否选择哺乳动物的成熟红细胞作为DNA粗提取的实验材料，为什么？

提示不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体等，不含DNA。

2.DNA的电泳鉴定实验中，影响DNA分子迁移速率的因素有哪些？

提示影响DNA分子迁移速率的因素有凝胶浓度、DNA分子的大小和构象等。

f--------------------------之猷避----------------------------学生用书

P349

命题点1DNA的粗提取与鉴定

1.[2023广东改编]“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解一分离一沉淀-鉴定。下列叙述错误

的是（D）

A.裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质

B.分离：可去除混合物中的部分多糖、蛋白质等

C.沉淀：可反复多次以提高DNA的纯度

D.鉴定：加入二苯胺试剂后即呈现蓝色

解析“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解、分离、沉淀、鉴定。裂解的目的是使细胞破裂，

释放出DNA等物质，A正确。DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离

DNA与蛋白质等，分离过程中混合物中的部分多糖、蛋白质等可被去除，B正确。DNA在不同浓度的

NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度可去除杂质，反复多次以提高DNA的纯度，C正确。

进行DNA鉴定时可以使用二苯胺试剂，但要进行沸水浴加热后才能观察到颜色变化，D错误。

命题点2DNA片段的扩增与电泳鉴定

2.[2023浙江6月]某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠G〃a3基

因一端，如图甲所示。实验得到能正常表达两种蛋白质的杂合子雌雄小鼠各1只，交配以期获得G〃a3-

GF尸基因纯合子小鼠。为了鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型，设计了引物1和引物2用于PCR扩

增，PCR产物电泳结果如图乙所示。

图乙

下列叙述正确的是（B）

A.Gma3基因的启动子无法控制GFP基因表达

B.翻译时先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白

C.2号条带的小鼠是野生型，4号条带的小鼠是GaS3-GEP基因纯合子

D.若用引物1和引物3进行PCR,能更好地区分杂合子和纯合子

解析由图甲可知，GaS3基因与GEP基因共用一个启动子，且由题干可知两基因能正常表达出相关蛋白

质，A错误；由于启动子在左侧，基因在右侧，转录基因时，先转录基因，再转录GPP基因，且翻

译的方向是沿mRNA从5'T3',因此翻译时先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白，B正确；由图乙可知，

大片段包含GFP基因编码区片段，小片段不包含GFP基因编码区片段，则2号小鼠是Gata3-GFP基因纯

合子，4号小鼠是野生型，C错误；若用引物1和引物3进行PCR,杂合子和GaS3-GPP基因纯合子均能

扩增出条带，仅有Gma3基因时无法扩增出条带，不利于区分杂合子和纯合子，D错误。

1.[2023辽宁]CD163蛋白是PRRSV病毒感染家畜的受体。为实时监控CD163蛋白的表达和转运过程，将

红色荧光蛋白REP基因与CW63基因拼接在一起（如下图），使其表达成一条多肽。该拼接过程的关键步

骤是除去（B）

启动于CD163RFP终止子

双链DNA|||1|

A.CIT63基因中编码起始密码子的序列

B.CD/63基因中编码终止密码子的序列

C.KFP基因中编码起始密码子的序列

D.RFP基因中编码终止密码子的序列

解析由题意可知，若想使红色荧光蛋白RFP基因与CO/63基因拼接在一起，使其表达成一条多肽，则

CW63基因和红色荧光蛋白RFP基因都需进行转录和翻译，再结合图示可知，CD/63基因转录形成的

mRNA中不能出现终止密码子，否则在翻译时会提前终止，无法表达出既含CD163蛋白又含红色荧光蛋

白RFP的一整条多肽，因此该拼接过程的关键步骤是除去C0/63基因中编码终止密码子的序列，B符合

题意，A、C、D不符合题意。

2.[2023湖北]用氨茶青霉素抗性基因（4叩R）、四环素抗性基因（Te产）作为标记基因构建的质粒如图所

示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转

化到受体菌中。下列叙述错误的是（D）

Aw1、/3

H喻rI）

A.若用HindIII酶切，目的基因转录的产物可能不同

B.若用Pv"I酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因

C.若用印/?I酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否

D.若用小〃I酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp（氨茶青霉素）和Tet的培养基中能形成菌落

解析若用小"dIII酶切质粒和含有目的基因的DNA片段，用DNA连接酶将两者连接成重组质粒，目的

基因和质粒有正向连接和反向连接两种连接形式，因此，目的基因转录的产物可能不同，A正确；若用

PvuI酶切，会破坏氨羊青霉素抗性基因，在含Tet（四环素）培养基中的菌落