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15I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件主要起草人：王萍、龙建国、刘杰才、陈贵华、苏1籽用西葫芦叶片三种病毒RT-PCR检测技术规程本文件适用于籽用西葫芦叶片中黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvi属于雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）黄瓜花叶病毒（Cucumovirus可以侵染10为叶片斑驳花叶，叶肉浅绿，叶脉深绿；严重时呈现叶片皱缩，叶肉退化，蕨叶西瓜花叶病毒Watermelonmosa小西葫芦黄化花叶病毒Zucchiniyellow24.1试剂入100mL乙二胺四乙酸二钠溶液(见4.4),用冰乙酸调pH至84.2.10引物溶液：用TE缓冲液(见4.6)将上述引3DB15/T3534—2024ZYMV50℃),72℃延伸1min,35个循环；72℃延伸10min,4℃保存。48.5.2电泳结束后，取出琼脂糖凝胶，置于凝胶成像仪上成像，进行结PCR产物用凝胶回收试剂盒纯化目的片段，并在4℃连接至pMD18-T载体，转化到大肠杆菌感受态病毒序列(参见附录A)比对，确定PCR扩增的DNA片段是否为目的DN测。当结果有效时，试样检测出目标条带判定为病51TTCGATAAGAAGCTTGTTTCGCGCATTCAAATTCGAGT50GAAATTTGATTCTACCGTGTGGGTGACGGTCCGTAAAGTTCCTGCCTCT100TCGGACCTGTCCGTCGCCGCCATCTCTGCTATGTTTGCGGACGGAGCCTC150ACCGGTACTGGTTTATCAGT200AATTGTTGTATGATCTTTCGGCGATGCGCGCTGATATTGGCGACATGCGA250AAGTACGCCGTTCTCGTGTATTCAAAAGACGATGCTCTCGAGGCGGAT300GTTAGTACTTCATGTCGACAT1CCAGTGGCAAAGGTGATAAGCCACAAAACCTGCAAACTGGGCAGGGTAG50CAAGGAACCAACAAAAGCTGGCACAGTCAGCAAAGATGTGAACGTTGGAT150CTTCCAACAGTTGGT200ATACAAGCCTAATCAAGTTGATTTGTTTAACACTCGAG400AGCAAGTTGAGTACCCACTAAAGCCAATTGTTGAAAATG99AAAACTCCTGAAAGAGCCCGCGAAGCTGTTGCGCAGATGAAA197CACCACTAGCGAAGA6M12——345bpMPC1PC2NCI—485bp7MM123

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