医学检验中凝集反应的原理

凝集反应的原理及临床应用凝集反应(agglutination)：是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒性载体与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集现象。

抗原抗体反应：

是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。

抗原抗体反应可分为两个阶段：第一阶段：特异性结合阶段，数秒至数分钟，不出现可见的反应。第二阶段：可见反应阶段，抗原抗体复合物在适当的电解质、PH、温度和补体等的影响下，进一步交联聚集，出现凝集、沉淀、溶解和补体结合介导的生物现象等肉眼可见的反应。此阶段慢，数分钟至数小时。抗原抗体反应的特点：1、特异性抗原、抗体特异性结合是基于抗原决定簇（表位）与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。2、可逆性抗原与抗体的结合是分子表面的非共价键结合，故形成的复合物不稳定，在一定的条件下可以解离为游离抗原与抗体。3、比例性比例性：是指抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比

关系。钩状效应：指由于抗原、抗体比例不合适而导致假阴性的现象。等价带：抗原抗体比例合适，结合充分，沉淀物形成快

而多。前带：抗体过剩时称为前带。后带：抗原过剩时称为后带。

4、阶段性影响抗原抗体反应的因素：1、抗原抗体反应物的自身因素：性质、活性及浓度等直接影响结合反应2、环境因素：

①电解质：eg：0.85%NaCl②酸碱度：PH6~8③温度：常用温度37℃和室温（18~25℃）

④振荡、搅拌：加强抗原抗体分子结合，加速反应凝集反应的特点：1、灵敏度高、方法简便。2、定性：根据凝集现象出现与否判断结果阴性或阳性。3、半定量：将标本作一系列倍比稀释后进行反应，以出现阳性反应的最高稀释度作为滴度。凝集反应两个阶段：1、特异性结合阶段2、出现可见凝集反应阶段凝集反应的分类一、直接凝集反应：

细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应。二、间接凝集反应：

将可溶性抗原（或抗体）预先吸附或偶联于与免疫无关、大小适当的颗粒性载体表面，使之成为抗原（或抗体）致敏颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，出现肉眼可见的特异性凝集现象，称为间接凝集反应或被动免疫凝集反应。间接凝集试验的类型：（一）正向间接凝集反应用已知抗原致敏载体以检测标本中的相应抗体。（二）反向间接凝集反应用已知特异性抗体致敏载体以检测标本中的相应抗原。（三）间接免疫凝集抑制反应以已知抗原致敏的颗粒载体及相应的抗体为诊断试剂，检测标本中是否存在和致敏抗原相同的抗原。间接凝集反应常用的载体的颗粒：动物或人红细胞、细菌多种惰性颗粒如：聚苯乙烯胶乳、皂土、明胶颗粒、活性炭、火棉胶等。梅毒螺旋体抗体检测（TPPA）：明胶颗粒不加热血清反应素试验（Trust）：甲苯胺红颗粒血浆反应素试验（RPR）：活性炭颗粒结果判定：

定性发生肉眼可见的凝集现象半定量

影响因素及注意事项：致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制，且均应混合均匀后再使用。微量反应板中的内容物充分混合后再静置（30秒）。反应静置过程中，一定要对微量反应板加盖并禁止振摇至少静置2小时以上。不加热血清反应素实验（Trust）

梅毒简介

梅毒（syphilis）是一种由苍白密螺旋体感染导致的慢性、系统性疾病。分为后天获得性梅毒和先天性梅毒。获得性梅毒（多通过性接触传染）按感染时间分为早期梅毒（感染时间≤1年）和晚期梅毒（感染时间>1年）。

1.传染源梅毒是人类独有的疾病，显性和隐性梅毒患者是传染源，感染梅毒的人的皮损及其分泌物、血液中含有梅毒螺旋体。感染后的头2年最具传染性，而在4年后性传播的传染性大为下降。梅毒螺旋体可通过胎盘传给胎儿，早期梅毒的孕妇传染给胎儿的危险性很大。2.传播途径性接触是梅毒的主要传播途径，占95%以上。感染梅毒的早期传染性最强。随着病期的延长传染性越来越小，一般认为感染后4年以上性接触的传染性十分微弱。患有梅毒的孕妇可通过胎盘传染给胎儿，引起胎儿宫内感染，可导致流产、早产、死胎或分娩胎传梅毒儿。一般认为孕妇梅毒病期越早，对胎儿感染的机会越大。孕妇即使患有无症状的隐性梅毒还具有传染性。

早期梅毒分为一期、二期、早期潜伏梅毒；晚期梅毒分为：三期（梅毒树胶样肿、心血管梅毒、神经梅毒）、晚期潜伏梅毒。先天性梅毒也按时间分为早期梅毒（出生后两年内）和晚期梅毒。梅毒的实验室诊断（Laboratory）

梅毒螺旋体实验（TreponemalTests，TT），TT大多采用重组抗原检测血清中存在的螺旋体特异性抗体（IgG和IgM混合抗体）。梅毒螺旋体感染（主要是性接触感染）后至硬下疳出现之间的时间为梅毒潜伏期，约10-90天。梅毒感染者硬下疳出现后7-14天TT可呈阳性。

TT滴度对现症梅毒的诊断和治疗没有意义，也不能用于梅毒活动度的检测和疗效评价。大多数梅毒感染者，TT呈终身阳性。

非梅毒螺旋体实验（Non-treponemalTests，NTT）一期梅毒出现硬下疳后10-15天NTT可呈阳性（感染后约6周左右），未经治疗的梅毒患者，NTT滴度在感染后1-2年达到高峰，之后降低，直至晚期梅毒呈低水平阳性。

NTT滴度总体上与疾病活动度有关，因此在NTT应定量报告。

RPR或者TRUST既可用于评价梅毒活动度也可用于监测疗效。在治疗起始应以NTT定量结果作为之后衡量疗效的基础值，治疗之后第1、3、6个月定期复检，之后每6个月复检一次直至NTT转阴（或呈低水平阳性，NTT1:1-1:4）持续1年。NTT高滴度患者应保持随访观察。

梅毒初筛的实验方案

（1）ATT。其优点是：可自动化、高通量，适用于无症状人群的筛查、献血者（包括血制品）和器官捐献者。缺点是：在梅毒低流行地区阳性预测值低、存在大量假阳性。（2）ANTT。其优点是可以定量，从滴度可检测活动度。缺点是只能检出活动性梅毒，且在早期梅毒的检出率不及TT法。（3）ATT和ANTT并列联合检测。即每一位待检者同步检测TT和NTT。这一方案要求NTT必须定量检测，适宜于极早期梅毒可疑病例的筛查。

梅毒血清学检测假阴性已治愈的梅毒患者一定是TT阳性/NTT阴性。NTT阴性仍然是目前评价梅毒治愈的最好指标。但是晚期梅毒患者经过标准化治疗后仍可能呈NTT阳性。梅毒患者出现TT假阴性极其罕见，如果出现，应考虑实验操作出现问题。在极早期梅毒也可见由于前带现象造成的NTT假阴性。因此在初筛实验中NTT检测应同步进行原倍血清和稀释血清的检测以防止前带现象。梅毒血清学检测假阳性假阳性TT偶尔见于自身免疫疾病、孕妇。假阳性NTT的发生率约0.2-0.8%（也有研究显示更高），分为急性BFP-NTT（持续时间6个月）。急性BFP-NTT可见于新近免疫接种后，新近发生心肌梗塞，疟疾、肝炎、水痘、麻疹等发热性感染疾病以及孕妇。慢性BFP-NTT可见于注射型吸毒，自身免疫疾病、HIV感染、麻风病、恶性肿瘤、慢性肝病、以及老年人群。绝大部分BFP-NTT的滴度都小于≤1:4。

梅毒治疗强调早诊断，早治疗，疗程规则，剂量足够。疗后定期进行临床和实验室随访。性伙伴要同查同治。早期梅毒经彻底治疗可临床痊愈，消除