膀胱癌患者CYP1A1基因MSPI多态性相关研究

1/1膀胱癌患者CYP1A1基因MSPI多态性相关研究1膀胱癌患者CYP1A1基因MSPI多态性相关研究膀胱癌患者CYP1A1基因MSPI多态性相关研究【摘要】目的探讨细胞色素CYP1A1基因MSPI多态性与膀胱癌遗传易感性的关系。

方法应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术，检测44例膀胱癌患者(病例组)和85例同期住院非膀胱癌患者(对照组)，检测CYP1A1基因MSPI多态性位点的3种基因型及等位基因的分布频率。

结果在病例组CYP1A1基因MSPI位点基因型分布频率为：

TT（54．5％）、TC（36．4％）、CC（9．1％），等位基因分布频率为T（72．7％）、C（27．3％）；在对照组CYP1A1基因MSPI位点基因型的分布频率为TT（61．2％）、TC（31．2％）、CC（7．1％），等位基因分布频率为T（77．1％）、C（22．9％）。

各个基因型在两组中所占的比例差异无统计学意义（P＞0．05）;T、C等位基因频率两组比较差异亦无统计学意义(P＞0．05)。

结论CYP1A1基因MSPI位点多态性的单独存在可能与本地区膀胱癌易感性无关。

【关键词】膀胱肿瘤；CYP1A1；基因多态性；易感性AnalysisofthepolymorphismofCYP1A1-MSPIgeneinpatientswithbladdercancerYANGLi-xin，ZHANGHai-feng，CUIWen-peng,etal．DeptofUrology，theFirstHospital，JilinUniversity，Changchun130021,China2【Abstract】ObjectiveTodiscusstherelationshipbetweenthepolymorphismofcytochromeCYP1A1-MSPIgeneandgeneticpredispositionofbladdercancer．MethodsThedistributionfrequenceofallelicandthreegenotypeofCYP1A1-MSPIpolymorphismsiteof44patientswithbladdercancer(casegroup)and85patientswithoutbladdercancer(controlgroup)bypolymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism(PCR-RFLP)weredetected．ResultsThedistributionfrequencesofgenotypeofCYP1A1-MSPIsiteofthecasegroupwereTT（54．5％）,TC（36．4％）,CC（9．1％）,andthefrequencesofallelicgenewereT（72．7％）,C（27．3％）．WhilethedistributionfrequencesofgenotypeofCYP1A1-MSPIsiteofthecontrolgroupwereTT（61．2％）,TC（31．2％）,CC（7．1％）,andtheofallelicgenewereT（77．1％）,C（22．9％）．Theratioofgenotypeineachgrouphasnosignificantdifference（P＞0．05）；thefrequenceofallelicgeneofTandCineachgroupalsohadnosignificantdifference（P＞0．05）．ConclusionTheremaybenorelationshipbetweentheindividualismofCYP1A1-MSPIsitepolymorphismandsusceptibilityofbladdercancerin3thisarea．【Keywords】Ovariantumor;CYP450;Genepolymorphism膀胱癌是泌尿系统常见恶性肿瘤之一，其发生、发展与环境因素、遗传因素及他们的相互关系等密切相关。

其中个体遗传易感性是影响膀胱癌发病的一个重要因素[1]。

CYP1A1是细胞色素P450(CytochromeP450，CYP)家族的一名成员，是活化二恶英等环境毒素的主要酶类[2]，而酶代谢能力的差异是由基因多态性决定的。

CYP1A1基因3端非编码区的T6235C置换产生一个MSPI酶切位点即MSPI多态性。

CYP1A1基因的单核苷酸多态性可以影响CYP1A1酶的表达量及酶的活性，Murray等[3]研究表明CYP1A1高表达与膀胱癌的发生和恶性程度相关。

我们采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术，分析CYP1A1基因MSPI多态性与膀胱癌遗传易感性的关系。

1材料与方法1．1研究对象膀胱癌组44例，为吉林大学第一医院2005年12月至2006年12月收治的患者，其中男30例，女14例。

年龄47～80岁，中位年龄66岁。

患者均为首次治疗，未经化疗、放疗，且无其他肿瘤病史，手术后病理诊断均为膀胱移行细胞癌。

其中I级4例,II级30例，III级10例。

85例同期住院非膀胱癌患者为对照组，对照组和膀胱癌组按4照对照设计，两组间年龄、性别、肿瘤家族史、体质量指数、生活环境等差异无统计学意义。

1．2方法1．2．1DNA提取抽取各样本术前清晨空腹静脉血3ml，EDTA抗凝，将抗凝外周血取500l分装，-80℃保存，分批按经典酚-氯仿抽提方法提取基因组DNA。

采取紫外分光光度法将DNA稀释至0．5g/l，-20℃保存备用。

1．2．2PCR反应根据文献[4]设计引物，其序列为:上游引物为5－TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT－3;下游引物为5－CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT－3，引物由赛百盛生物公司合成。

PCR的反应条件:反应总体积为25l，0．5g/lDNA模板2l，5端引物(10mol/L)0．5l，3端引物(10mol/L)0．5l，dNTPs1l，10Buffer2．5l，Taq酶0．5l，加去离子水至终体积25l。

聚合酶扩增参数:95℃预变性5min，然后95℃变性30s，58℃复性30s，72℃延伸30s，从第2步开始35个循环后72℃延伸7min。

1．2．3CYP1A1基因MSPI多态分析扩增产物经MSPI限制性内切酶酶切鉴定，酶切体系为PCR扩增产物7l、10Buffer1l、三蒸水2l、MspI酶2U。

37℃水浴2～3h。

将酶切产物经2％琼脂糖凝胶电泳，电脑成像系统成像分析。

51．2．4统计方法采用SPSS11．5软件分析，用2检验法比较膀胱癌组和正常对照组之间MSPI多态性等位基因频率的差异。

2结果2．1CYP1A1基因扩增产物MSPI酶切电泳结果PCR扩增片段长度为343bp，经过MspI酶切电泳得到3种基因型:基因型A（T/T）为343bp1条片段，基因型B（T/C）为343bp、205bp、138bp3条片段，基因型C(C/C)为205bp、138bp2条片段，不同基因型的电泳图谱见图1，其中7泳道为A基因型；1、6、9、10泳道为B基因型；2、3、4为C基因型。

2．2膀胱癌组与对照组CYP1A1基因MSPI多态性位点基因型频率及等位基因频率的比较CYP1A1基因MSPI多态性位点基因型频率及等位基因频率在膀胱癌组分别为TT（54．5％）、TC（36．4％）、CC（9．1％）；T（72．7％）、C（27．3％）；对照组分别为TT（61．2％）、TC（31．2％）、CC（7．1％）；T（77．1％）、C（22．9％）。

经统计学分析，6各个基因型及等位基因在两组中所占的比例差异均无统计学意义（P＞0．05）。

两组CYP1A1基因MSPI多态性位点基因型见表1。

3讨论近年来CYP1A1酶与肿瘤的相关性日益受到重视，CYP1A1参与多环芳烃类(PAH)如苯并芘的代谢,将其氧化为酚类产物和环氧化物[4]。

在大鼠,PAH的致癌作用与CYP1A1的诱导能力高度相关[5]。

CYP1A1基因还编码芳烃羟化酶,使雌激素代谢为儿茶酚雌激素,而后者具有致癌性[6]。

CYP1A1参与雌二醇C-2、C-6a、C-15a的羟化代谢[7]。

Murray[3]等研究表明CYP1A1高表达与膀胱癌的恶性程度相关。

但是Brookmoller[8]等对高加索人群的研究表明CYP1A1基因型与膀胱癌易感性的无关，本研究结果于Brookmoller等的结果相一致。

分析CYP1A1基因MSPI多态性与本地区膀胱癌易感性无关可能有以下几方面原因：

①由于机体解毒系统本身复杂性的存在，单一解毒酶活性的改变并不能完全影响外源性物质在体内的全部代谢过程，另外酶的本底表达和诱导表达水平有显著的个体差异[9];②酶的活性并不完全取决于基因结构，基因转录调控和底物对酶的诱导活性都将对其产生一定的影响;③抽样本身存在的偏差和样本量的大小都会对研究的结果产生影响。

另外，疾病不是单一因素作用的结果，7因此对一种疾病应该从各种因素综合分析。

我们还需要加大样本量观察，并且进一步研究该基因家族的其他成员的基因多态性与膀胱癌的关系，观察基因间的协同作用，从分子水平研究疾病的原因，为临床预防、诊断、治疗提供理论依据。

参考文献1MaQW，LinGF，ChenJG，etal．PolymorphismofN-acetyltransferase2(NAT2)genepolymorphisminShanghaipopulationoccupationalandnon-occupationalbladdercancerpatientgroups．BiomedEnvironSci，2004,17(3)：

281-291．2KiyoharaC，NakanishiY，InutsukeS，etal．TherelationshipbetweenCYP1A1arylhydrocarbonhydroxylaseactivityandlungcancerinaJapanesepopulation．Pharmacogenetics，1998，8：

315-323．3MurrayGI，TaylorVE，MckayJA，etal．Expressionofxenobioticmetabolizingenzymesintumorsoftheurinarybladder．IntJExpPathol，1995，76(4)：

271-276．4HadficldRM，ManckS，WccksDE，etal．LinkageandassociationstudiesoftherelationshipbetweenendometriosisandgenesencodingthedetoxificationenzymesGSTM1,GSTT1andCYP1A1．MolecularHumReport，2001，7：

1073-1078．85RannunA，AlexandrieAK，PerssonD，etal．GeneticpolymorphismofcytochromesP4501A1，2D6and2E1：

regulationandtoxicolonicalsignificance．JOEM，1995，37：

25-36．6HnherJC，SchnecbergerC，TempferCB．Geneticmodelingoftheestrogenmetabolismasariskfactorofhormonedependentdisorders．Ma-turates，2002，42(1)：

1-12．7BadlawiAF，CavalieriEL，RoganEG．RoleofhumancytochromeP45