IL-18基因多态性与原发性干燥综合征的相关性　

1/1IL-18基因多态性与原发性干燥综合征的相关性IL?18基因多态性与原发性干燥综合征的相关性IL?18基因多态性与原发性干燥综合征的相关性作者：

李恩泽辛苗苗胡彬闫丽萍李慧【摘要】目的探讨IL?18基因?137G/C、?607C/A位点多态性及其血清水平与原发性干燥综合征的相关性。

方法提取受试者白细胞DNA，采用聚合酶链反应?限制性片段长度多态性技术检测28例原发性干燥综合征病人和52例健康对照者IL?18基因?607C/A、?137G/C位点多态性，酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组血清IL?洗裸18含量。

结果两组I洗L裸?18基因?137雾G/裸C、?607C/雾A位点裸基因型频率及等雾位基因频裸率比较差异均雾无显著性(裸P)。

原雾发性干燥综合裸征组血清雾IL?18水平亮明显低雾于健康对照组，差亮异有雾显著性(t=,P)亮。

雾结论血清IL?18水亮雾平表达降低可能是原发性亮雾干燥综合征的促发因素。

雾亮【关键词】白细雾胞介亮素18;基因型;雾基因频亮率;原发性干燥雾综合征亮[ABS雾TRACT]亮Obje雾ctiveTo亮inv雾estigate亮th雾eassociat亮i雾onofpolymo亮排rphismsof?6亮排07C/A,?137G排亮/Cpromoter排s亮ofIL?18ge排ne亮anditsse排rum亮levelwi排thpr亮imaryS排jogre亮nssy排ndrome亮.Met排hodsThe亮DNA排ofwhiteb亮lo排odcellswe亮r排eextracted亮排fromsubject亮排s,polymeras排亮echainreac排t亮ion?restr排ic亮tionfrag排men亮tlength排poly鸟morphi排sm(PC鸟R?RFL搔P)meth鸟odwa搔sapplie鸟dto搔detectpo鸟ly搔morphisms鸟o搔f?607C/A,?鸟搔137G/Cpromo鸟搔tersofIL?18搔鸟genein28pa排t鸟ientswith排pr鸟imarySjo赁gre鸟nssynd赁rome鸟(group赁A)and鸟52hea赁lthyco鸟ntro赁ls(grou鸟pB)赁;serumIL鸟?1赁8wasmeasu鸟r赁edinbothgr鸟赁oupsbyELISA陌赁.ResultsThe赁陌rewasnodif赁f陌erencesin赁IL陌?18genot赁ype陌frequen赁cyan陌dallel赁efreq陌uency赁atposi陌tion赁?607and陌?13赁7between陌gr赁oupAandgr陌o润upB(P).Se陌润rumIL?18ing陌润roupAwassig润陌nificantly润l陌owerthant润ha陌tingroup润B,w陌ithstat润isti陌caldif润feren陌ce(t=润,P).Co陌nclu润sionDec陌rea润seofseru陌mI润L?18islik陌e润lytobeapre陌润cipitatingf陌润actorofprim润陌arySjogren润陌ssyndrome润.陌[KEYWO润RDS]陌interl润eukin陌?18;g劝enotyp陌e;ge劝nefrequ陌enc劝y;Sjogre陌n劝ssyndrome陌劝原发性干燥综合征(陌劝PSS)是以口、眼干燥劝陌及关节肿痛为常见表现劝的劣一种全身性自身免疫劝性疾劣病，常呈现家族聚劝集性。

劣白细胞介素?1劝8(IL劣?18)可诱劝导IFN?劣、IL?劝2等细胞因子劣产生，调劝节Th1/Th劣2细胞劝平衡，有增强免疫劣、抗劝肿瘤的作用，并参与劣某劝些自身免疫性疾病和变劣劝态反应性疾病的发生发展劣劝。

PSS病人CD4+T劝劣细胞水平降低，导致T位h劣1和Th2亚群的分位布出劣现异常，进而引起位机体细劣胞因子网络调控位失常。

本劣文对PSS病位人IL?1劣8基因?6位07C/A、劣?137位G/C位点多态劣性以及位血清IL?18水劣平进位行检测，探讨其与P劣S位S发生的相关性。

现将劣位结果报告如下。

1对象与位劣方法研究对象收位集我劣院风湿免疫科就诊位的PS劣S病人(PSS位组)28劣例，男1例，位女27例，劣年龄27～位84岁，平均劣为岁，均位符合2002年劣PSS位国际分类(诊断)劣标准位提出的诊断标准。

另劣选蓄健康献血员52例作为劣蓄对照组，男3例，女49劣蓄例，年龄22～75岁，蓄劣平均岁;排除相应疾病蓄家劣族史。

两组研究对象蓄均无劣血缘关系，在年龄蓄和性别适比例上均无显著蓄性差异。

适检测方法蓄DNA制备适采集受试蓄者空腹静脉血5适mL至蓄EDTA?K2抗适凝管蓄中，颠倒混匀。

离心适后蓄提取下层血浆和白细胞适蓄层约1mL移入高压灭菌适怨的离心管中，用酚?氯仿怨适?异戊醇法抽提细胞D怨N适A。

将DNA沉淀移怨入m适L的LEP管中，怨120适00r/min怨离心10适min，弃去怨上清液，沉适淀自然干燥怨后，加无菌纯适水充分溶怨解，置4℃冰箱适保存备许用。

PCR检适测许参考文献[1]设计扩适许增IL?18基因?60适许7位点的特异性引物，2许适条特异性正向引物序列许分适别为5?GTTG许CA适GAAAGTGT以AAA适AAT?TAT以TAC?适3和5?以GTTGC适AGAAA以GTGTAA适AAA?以TTATTAA适?3以，共同反向引物序适列为以5?TAACCT适?以CATTCAGGAC适以T?3，质控正向引物适以序列为5?CTT?T以适GCTATCATTC帐C适AG?3。

?13帐7位适点2条特异性正向帐引物序适列分别为5?帐CCCC适AACTTT帐TACGG篇A?AGA帐AAAG?3篇和5帐?CCCCAA篇CTT帐TTACGGAA篇G?帐AAAAC?3，篇共帐同反向引物序列为5篇引?AGGAGGGC?A篇引AAATGCACTGG引篇?3，质控正向引物引序篇列为5?CCAA引TA篇GGACTGAT引TAT篇TCCGCA?引3。

?篇607位点的引PCR总体篇系为25引L，包括10篇PCR引缓冲液L(含篇mmo腰l/LMgCl2篇)，腰mmol/L的dN篇T腰P，约30ng基因组篇腰DNA和1UTaq聚合篇腰酶。

质控正向引物mo腰篇l/L，一种特异性正腰向篇引物mol/L，腰共同篇反向引物mol腰/L。

篇扩增参数：

首先腰94℃预篇变性4min液;然后94篇℃变性20液s，62℃退篇火40s液，72℃延伸4篇0s，液共行7个循环;随篇后9液4℃变性20s，5篇5液℃退火40s，72℃篇液延伸40s，共进行35篇液个循环。

取2条特异性正液篇向引物分别扩增的PC液R篇产物于20g/L琼液脂糖篇凝胶中电泳，电压依80V篇，40min，依溴化乙锭翔染色，紫外线依凝胶成像系翔统观察结果依并鉴定等位基翔因频率。

依?137位点的翔PCR依总体系为25L翔，包依括10PCR缓冲翔液依L(含mmol/L翔依MgCl2)，mmol翔依/LdNTP，约30n雁翔g基因组DNA和1U雁T翔aq聚合酶。

质控正隐向引翔物mol/L，隐一种特翔异性正向引物隐mol/翔L，共同反向隐引物mo侣l/L。

扩隐增参数：

首先侣94℃预隐变性2min;侣然后9旨4℃变性20s，侣68旨℃退火60s，共行侣5旨个循环;随后94℃变侣旨性20s，62℃退火2侣旨0s，72℃延伸40s旨侣，共进行25个循环。

旨取侣2条特异性正向引物旨分别侣扩增的PCR产物旨于20侣g/L的琼脂糖旨凝胶中电侣泳，电压80肘V，40m侣in，溴化肘乙锭染色，紫侣外线凝胶肘成像系统观察结侣果并鉴肘定基因型。

2结果侣肘IL?18基因?607侣肘位点多态性电泳每肘份侣标本分别用2条特异肘性正侣向引物做2管PC肘R，3侣01bp处为质肘控条带，侣196bp处袖是A/C等侣位基因特异袖性扩增片段。

位部分标本袖?607位点多位态性检袖测电泳结果如图1位。

标袖本①只有C等位基因位处袖可观察到长196bp位袖特异性扩增片段，所以其位袖基因型为CC;标本②～袖位④的2管PCR产物电袖泳位后均可观察到长19铸6b位p特异性扩增片段铸，故其位为CA基因型;铸标本⑤只位有A等位基因铸处可观察到位长196b铸p特异性扩增位片段，其铸基因型则为AA位。

铸IL?18基因?位1铸37位点多态性电泳图位铸2为部分标本IL?18位铸基因?137位点多态性窒位电泳检测结果，每份标窒本位分别用2条特异性正窒向引位物做2管PCR，窒446位bp处为质控条窒带，26位1bp处为G窒/C等位基位因特异性扩窒增片段。

标本位②和④只窒有G等位基因处位可观察窒到长261bp特位异性窒扩增片段，所以其基位因益型为GG;标本③和⑤位益在两管PCR产物电泳后位益均可观察到长261bp益位特异性扩增片段，其基益因位型为GC;标本①只益有C位等位基因处可观察益到长度位为261bp特益异性扩增枝片段，其基因益型则为CC枝。

两益组IL?18基枝因?1引37G/C、?6枝07幼C/A位点基因型频枝率幼和等位基因频率的比较枝幼两组IL?18基因幼枝?137G/C、?6幼0枝7C/A位点基因型幼频率枝及等位基因频率比幼较，差枝异均无显著意义幼(P)枝。

见表1、2幼。

两组血清枝IL?1映8水平的比较枝P映SS组病人和对照组枝的映血清IL?18水平分枝映别为()和()ng枝映/L，两组比较差异有显映枝著性(t=,PIL?映1枝8不同基因型病人血映清I枝L?18水平比较映P枝SS组病人I映L?18基枝因?607腋位点CC、C枝A、AA腋基因型的血清I枝L?1腋8水平分别为(枝)、腋()、()ng枝/腋L，IL?18基因?枝腋137位点GG、GC、砚腋CC基因型的血清IL?腋砚18水平则分别为(腋)砚、()、()n腋g/砚L，不同基因型间绣血清I砚L?18水平比绣较差异均砚无显著性(P绣)。

见表砚2。

绣表1IL?18砚基因?绣607C/A位点砚多态绣性分布及其比较(例砚(绣/%))组别n基因砚绣型频率CCCAAA等位砚怨基因频率CA对照组52怨砚13()28()11怨(砚)54()50()怨PS砚S组287()1怨4()砚7()28()怨28()砚表2I隅L?18基因砚?137隅G/C位点多态砚性分布隅及其比较(例(砚/%隅))组别n基因型频砚率隅GGGCCC等位基因砚隅频率GC对照组5238砚隅()13()1()89隅砚()15()PSS组隅2砚822()5()1隅()砚49()7()3淤讨论砚PSS是一淤种慢性系统砚性自身免疫淤性疾病，在多砚种因素的淤共同作用下，可墟导致机淤体细胞和体液免疫墟异常淤，表现为淋巴细胞和墟浆淤细胞对靶器官的进行性墟淤浸润，造成靶器官功能障墟淤碍。

研究表明，PSS病淤墟人疾病活动期体内T细豫胞墟亚群数量分布存在明豫显异墟常，表现为CD4豫+T淋墟巴细胞水平降低豫，而CD墟8+T淋巴细豫胞水平升高墟[2?3]豫。

CD4+T墟淋巴细胞豫水平降低，导致墟Th1豫和Th2亚群的分墟布出豫现异常，进而引起机墟体豫细胞因子网络调控失常晕袖，如PSS活动期病人体晕袖内IFN?等细胞因子袖晕水平有明显下降，对疾袖病晕的进展影响较大[4袖]。

晕IL?18属于I袖L?1晕家族成员，它可袖诱生IF晕N?等细胞袖因子。

IN晕F?的生袖成可促进Th晕0细胞向袖Th1细胞分化晕，从而邀调节Th1/Th晕2细邀胞平衡，因此认为，晕I邀L?18是调节Th1晕邀/Th2细胞因子的重要晕邀因子[5]。

MATER邀晕A等[6]研究表明，邀I晕L?18在IL?1邀2诱晕导新生CD4+T邀淋巴细晕胞分化为Th1邀细胞时起晕加强作用，在邀IL?12晕协同作用下邀，IL?18晕可强烈诱邀导IFN?等晕Th1邀型细胞因子的产生晕，导邀致组织损伤。

本研究晕结邀果显示，PSS病人血晕邀清IL?18水平明显低晕邀于对照组，推测PSS病邀晕人血清IL?18水平邀降晕低可能导致Th1细邀胞分晕泌IFN?水平狰下降，晕Th2细胞分泌狰IL?4晕水平相对增高狰。

进一步引晕起Th1型狰细胞免疫反应晕下调而T尧h2型细胞免疫晕反应相尧对增强，Th1/晕Th尧2细胞免疫失衡扩大晕，尧使机体在多种因素的侵晕尧袭下引起免疫反应异常，樱尧通过各种细胞因子和炎症尧樱递质的作用，造成PS尧S樱病人组织的损伤。

细尧胞因樱子的表达量受基因尧调控，樱编码细胞因子的尧结构基因樱转录效率下降尧可导致细胞樱因子的表达尧量降低。

近年樱来，对I尧L?18基因启樱动子区尧单核苷酸多态性(樱SN尧P)与疾病的关系研樱究尧有诸多报道，许多研究樱尧结果显示，IL?18基樱尧因多态性能影响疾病的发蚁樱生、发展[7?9]。

蚁I樱L?18基因?60蚁7C樱/A和?37G/蚁C位点樱分别存在核因子蚁cAMP樱反应元件结合蚁蛋白和组蛋樱白H4转录蚁因子结合部位樱，SIV蚁A等[9]研究樱认为其蚁多态性可能影响I樱L?蚁18的转录水平。

张樱平蚁安等[10]采用体外樱蚁PBMC培养和刺激方法樱蚁研究IL?18基因型和蚁樱表型的关系，结果表明蚁两樱个位点的基因多态性蚁对I樱L?18分泌和表蚁达无明樱显影响。

本研究蚁对IL?樱18基因?6蚁07C/A樱、?137蚁G/C位点多樱态性分析蚁结果表明，两组樱IL?影18基因?607樱C/影A、?137G/C樱位影点基因型频率和等位基樱影因频率均无显著性差异，樱影未得出IL?18基因?影盂607C/A、?13影7冤G/C位点多态性与影PS冤S相关的结论。

同影时，对冤不同基因型间的影血清IL冤?18水平进影行统计学分冤析，也未得影出基因多态性冤可影响I影L?18血清水冤平的结影论。

由此推断，I冤L?影18基因?607C冤/影A、?137G/C位冤影点多态性与某些疾病的易冤影感性有关，并非完全是通影冤过对于其表达量的影响影而冤发挥作用，可能是该影位点冤与其他相邻位点存诌在连锁冤失衡的共同结果诌，也可能冤与样本大小、诌种族差异、冤地域差异以诌及遗传因素和冤环境因素诌之间存在着复杂冤的相互诌作用等原因有关。

冤【参诌考文献】[1]雁诌VILMANTASG,雁诌BINGH,WENXH诌雁,etal.Clon诌i雁ngandmuta诌ti雁onanalys诌iso雁fthehum诌anIL雁?18pro诌motor雁:apos诌sibler雁oleo诌fpolymo雁rph诌ismsinex雁pr诌essionreg雁u诌lation[J].雁洲JNeuroimmun雁洲ol,2001,112洲雁:146?152.洲雁[2]VILLA洲RRE雁ALGM,AL洲COCE雁R?VARE洲LAJ,L雁LOREN洲TEL.Cy雁toki洲negenea雁ndC洲D25antig雁en洲expressio雁n洲byperipher雁洲albloodTcel雁洲lsfrompatie洲雁ntswithpri洲m雁arySjogre洲n雁ssyndrom洲e[J雁].Autoi洲mmun雁ity,19洲95,20雁(4):2洲23.[雁3]H枕US,TAOD,雁HE枕P.Immunop雁h枕enotypingo牙枕flymphocyte牙虚TandBintheP虚牙eripheralb虚l牙oodofsyst虚em牙iclupuse虚ryt牙hematos虚us[J牙].JTon虚gjiMe牙dUniv虚ersity牙,200虚1,21(2)牙:10虚8.[4]K牙O虚HRIYAMAK,K牙虚ATAYAMAY.Di牙虚sproportion虚牙ofhelperTc虚e牙llsubsets虚in牙peripher虚alb牙loodofp虚atie牙ntswit虚hprim牙arySj虚?gren牙ssyn虚drome[J牙].A职utoimmun牙it职y,2000,32牙(职1):67?72.牙职[5]KIMURAK职牙,KAKIMIK,W职I牙ELANDS,et职al牙.Interle职uki牙n?18inh职ibit牙shepat职itisB牙virus职replic牙atio职ninthel牙ive职rsoftran牙sg职enicmic