DNA的粗提取与鉴定 高二下学期生物人教版选择性必修三

山要葩益要VNO

辊将

菊历史上第一管DNA粗提取物历史上最早注意到DNA

这个东西的人

是当时年仅24岁的瑞士医生FriedrichMiescher

。他利用大量刚换下的外科绷

带来分离白细胞的化学组分。当他用各

种溶剂一点点冲洗，分离脓液中的各种

组分时，他发现析出的一个东西有点不

太一样：它在弱酸性溶液里会沉淀，提

高碱性后又会重新溶解。这就是历史上第一管DNA粗提取物。(图片来自百度)FriedrichMiescher(1844-1895)猕

猴

桃2n=58具体表现物理性质DNA不溶于酒精，但能溶于2mol/L的NaCl溶液。化学性质在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。实验原理一、分析本实验涉及的DNA物理性质和化学性质二、明确DNA粗提取与鉴定的原理1.DNA存在于真核细胞的什么部位?

2.如何使DNA从细胞内到达细胞外?

3.如何将DNA与不溶性杂质分离?4.如何将DNA与可溶性蛋白等杂质分离?

5.鉴定DNA的原理是什么

?实

验

原

理1.DNA存在于真核细胞的什么部位?细胞核(主要)线粒体(少量)叶绿体(少量)(图片来自人教版必修1)3.如何将DNA与不溶性杂质分离?过

滤(图片来自人教版必修1)SDS

瓦

解

细

胞

膜EDTA

抑制DNA酶活性Tris-HCl

缓冲

维持pH稳定液2.如何使DNA从细胞内到达细胞外?机械外力破碎一

—研磨研

磨

液4.如何将DNA与可溶性蛋白质等杂质分离?DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精DNA沉淀析出w-羟基-

γ-酮

基

戊

醛5.二苯胺鉴定DNA的原理1.利用DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精这一原理初步分离DNA和蛋白质。2.利用在一定温度下，D

NA遇二苯胺试剂会呈现蓝

色这一原理鉴定DNA。实验原理实验材料：洋葱、葱白、猕猴桃、研磨液、体积分数为95%的酒精、二苯胺试剂、蒸馏水实验器具：烧杯、量筒、移液枪、枪头、塑料杯、

塑料管、研磨过滤器、恒温水浴锅、10mL离心管等实验材料和器具选取洋葱、葱白、猕猴桃三种常见蔬菜水果，借助研磨液和研磨过滤器破碎细胞，释放DNA,

再

利用预冷的酒精溶液(体积分数95%)将DNA以白

色丝状物的形式析出，最后利用蒸馏水溶解DNA并

加入二苯胺试剂进行鉴定，比较不同实验材料进

行DNA粗提取的效果是否存在差异。实验设计思路实

验

过

程对照

葱白组

洋葱组

猕猴桃组实验结论：不同实验材料进行DNA粗提取效果存在差

异，其中葱白提取效果相较于洋葱和猕猴桃更好。实验结果要加入等量的生物材料，并且研磨材料时必须充分。实验前要将95%的酒精溶液进行预冷处理。尽可能干燥白色丝状物再进行溶解，防止其上的酒精

影响后续的溶解与鉴定。加入二苯胺后进行沸水浴，沸水浴时间要充足。待DNA-二苯胺混合液冷却后再观察其颜色变化。注意事项创新装置优势：1.研磨过滤一步到位，简单方

便2.操作过程中材料不易损失浪

费实

验

创

新

点一

、装置改进，化繁为简，效果明显研磨过滤器实验创新点一

、装置改进，化繁为简，效果明显创新装置优势：3.塑料制品不带电荷，不会吸附DNA分子洋葱

葱白

猕猴桃创新材料优势：1.容易研磨

2.实验效果

明

显二

、材料改进，突破传统材料瓶颈实

验

创

新

点创新试剂优势：1.无需配制，简单方便

2.实验效果明

显葱白十蒸馏水猕猴桃十蒸馏水洋

葱十蒸馏水猕

猴

桃+NaCl洋

葱+NaCl葱

白+NaCl实

验

创

新

点对

照安库实验计之评分辑则(打勾进择相应的分值)扣分原国记景粗提取DNA(60分》正确且药练使用电子天换作壳全符合

(5>换作前未调(3)不会使用电子

天十(o>重安验材料准确(20

g)换作壳全符合5)靠读楚旭江

5g(3>游量说楚超过

10g

(0》且路练调节多预枪

重换作壳生符(5)换作正项但不路练(3)楼作理(0)研荣液(楼作壳生符合5)入的靠少子

(3来入研要液(0)且务练文线研要过

流换作壳生符合5)作正明值不练(3)换作指读(0)名材料研芽充分换作壳全符分5)少重来研望究(3)大

重

来

研

究(0)有活液转够签品

杯中预作壳金行分(s)重济液没合注研望杆中(》大靠进在研望杆中(0)入的

涂换作光全行食(5)入时

重

2

7ml(3)来加入冲(0)用益料犀进行见分协作壳全谷5)来见分器神

0来便用2迎行提萍0)10.

使动料萍没神讨治一

个方间并验验漂幼换作壳金答分5)一个方属值验粒漂动(1)来沿一个方间动0)11.将是重的益状物些起5)禁

是

2

重

证

状物(3)来学起状0)12.用德效尽可题很干益状

物上的水换作壳全行分(5)益状物上有少

水分(状行平质(o》备

定

D

N(25分)13.7入05

2

m

o

的N

oo

深换作兜金行分5)2入过营Noo

g(来加入Nao液

(

o

)入

0

3

m

二

需

5换作光全符分(5)入过重二牌

按试剂(3)来加入二萃接试剂(0)5.将德台试剂置子洪水中

加热10mì换作究全行食(5)洪水落时间过阻(3)来进行清水潘换作(0)16.试肾内出现明昌的置e非常明显(10)一般栅二(5)著不出(0)小通成2

(15分》17.在规走时间内壳成会验橡时壳成3)运时3分钟内(3)这时5分钟内(1)8.

小道成员邯调足台，共同

壳发实所有成员都承2

丁

任

分有1个同学来

录担任分(3有2个及以上号来采担任分(1)19.身北江程中终保验合Y的蓝安

合

Y酒(5)安验台菌一般(3)安验台X彼不

基注(o)总分(满分100)创新评价量表优势：1.评价量表细致具体，易操作

2.评价范围广，涵盖操作规范性

及

团

队

协

作

性四、

评价改进，化教学评价为具象实

验

创

新

点“DNA粗提取与监定”实验评价量化表实施实验计划评分细则(打勾选择相应的分值)扣分原因记录粗提取DNA

(60分)1.正确且熟练使用电子天

平操作完全符合(5)操作前未调零(3)不会使用电子天平(0)2.称量实验材料准确(20g)操作完全符合(5)称量误差超过5g(3)称量误差超过10g(0)3.正确且熟练调节移液枪

量程操作完全符合(5)操作正确但不熟练(3)操作错误(0)4

.

加入足量的研磨液(6

mL)操作完全符合(5)加入的量少于3mL(3)未加入研磨液(0)5.正确且熟练安装研磨过滤器操作完全符合(5)操作正确但不熟练(3)操作错误(0)6.将材料研磨充分操作完全符合(5)少量未研磨充分(3)大量未研磨充分(0)7.将所有滤液转移至塑料杯中操作完全符合(5)少量滤液残留在研磨杆中(3)大量滤液残留在研磨杆中(0)8.加入足量的冷酒精(6mL)操作完全符合(5)加入的量少于3mL(3)未加入冷酒精(0)9.使用塑料棒进行充分搅

拌操作完全符合(5)使用塑料棒但未充分搅拌(3)未使用塑料棒进行搅拌(0)10.使用塑料棒搅拌时沿一

个方向并轻轻搅动操作完全符合(5)沿一个方向但未轻轻搅动(3)未沿一个方向

搅动(0)11.将足量的丝状物卷起操作完全符合(5)只卷起少量丝状物(3)未卷起丝状物(0)12.用滤纸尽可能吸干丝状

物上的水分操作完全符合(5)丝状物上有少量水分(3)未将丝状物进

行干燥(0)实施实验计划评分细则(打勾选择相应的分值)扣分原因记录鉴定DNA(25分)加入蒸馏水操作完全符合(5)加入过量蒸馏水(3)未加入蒸馏水(0)13.加入0.5mt二苯胺试剂操作完全符合(5)加入过量二苯胺试剂(3)未加入二苯胺试剂(0)14.将混合试剂置于沸水中加热10

min操作完全符合(5)沸水浴时间过短

(

3

)未进行沸水浴操作(0)15.试管内出现明显的蓝色非常明显(10)一般明显(5)看不出(0)小组成员的合作(15分)16.在规定时间内完成实验按时完成(5)延时3分钟内(3)延时5分钟内(1)17.小组成员协调配合，共同完成实验所有成员都承

担了任务(5)有1个同学未

承担任务(3)有2个及以上同学未承担任务

(

1

)18.实验过程中始终保持实验

台面的整洁实验台面很整洁

(

5

)实验台面一般整洁(3)实验台面很不整洁(0)20001000750500250100(图片来自百度)拓展

精确分离DNA凝胶电泳法bp23