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出口蜂蜜中常见蜜源植物成分的检测方法实时荧光PCR法第5部分：椴树I 第8部分：紫云英。本部分为SN/T4848的第5部分。1实时荧光PCR法第5部分：椴树SN/T4848的本部分规定了出口蜂蜜中椴树成分的实时荧光PCR检本部分适用于出口蜂蜜中椴树成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为1%GB14963—2011食品安全国家标准蜂蜜GB/T27403—2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测2UNG:尿嘧啶N-糖基化酶(uracilN-glycosylase)物种名称引物/探针序列(5'→3)物种名称引物/探针序列(5'→3)F:GCTGAAGCAGCTACTTTCGAAR:AGGAGCCGTGTGAGATGAP:FAM-TGGAGTGGGAGAGTCAGAGTCGAAAAGAGP:FAM-AAAGAAGATGCGCCTACAAGACCTGTTGC长度靶基因内参照36.4体积分数为70%的乙醇。6.6蛋白酶K(20mg/mL)。pH=8.0。7.8pH计。48.1.2蜂蜜上清DNA提取于-20℃保存。使用核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计分别检测260nm和280nm处的吸光值A26o和A280。A——260nm处的吸光值；N——核酸稀释倍数。8.3实时荧光PCR扩增8.3.1实时荧光PCR反应体系实时荧光PCR反应体系的反应条件见表2。DNA模板(10ng/pL～200ng/pL)无菌ddH₂O8.3.2实时荧光PCR反应程序内参照基因和椴树nrl基因扩增程序均为：50℃2min;95℃预变性10min;95℃15s,60℃5b)Ct值≥40,则判定为阴性。c)35<Ct值<40,则重复实验一次。如再次扩增后Ct值<40,则判定为阳性；Ct值≥40,则判定检测过程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403-2008中附录D的规定执行。6GGGCATCGAACATGAGCTTTTTAGCTCCTATTAAAGAAGATGCTGCGCTGGTTCCACGTGAGAAAATCCCATGC沉淀溶液/recipitationSolu注：以Promeg

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