TGXAS-永福报春苣苔组培快繁技术规程编制说明

团体标准《永福报春苣苔组培快繁技术规程》(征求意见稿)编制说明一、项目来源根据桂标协[2021]28号文件《广西标准化协会关于下达2021年第十一批团体标准制修定项目计划的通知》，《永福报春苣苔组培快繁技术规程》列入2021年广西团体标准制定计划中，序号为2021-1107，起草单位为广西壮族自治区农业科学院花卉研究所。二、项目背景及目的意义永福报春苣苔（Primulinayungfuensis）是苦苣苔科报春苣苔属的多年生草本植物，为广西特有种，主要分布在桂林市及周边县，如永福及临桂。永福报春苣苔以其圆整、矮小的植株，复杂多变的叶面斑纹，颀长的花葶，硕大却清丽雅致的花朵被誉为“中国非洲紫罗兰”的最佳代表，野生花期为5月，群体花期15-30d，是一著名的观赏性较高的原种，同时也是一种不可多得的观叶兼观花的室内盆花和育种材料。永福报春苣苔还具有丰富重要的药用价值，应用前景广阔。近年来，根据植株大小、苗龄大小以及观赏性的高低，永福报春苣苔每株售价从20元至百元不等，市场前景极好。但目前永福报春苣苔的盆栽多数源于野外挖掘，致使大量野生资源遭到破坏流失，严重影响了种群居群的更新发展。为了避免永福报春苣苔因滥采滥挖而产生的资源破坏和流失，同时也为了满足其市场的需求，制定永福报春苣苔的组培快繁技术规程显得尤为重要，不仅有利于永福报春苣苔的规模化生产，且对其产业的发展具有重要促进作用，对我区花卉产业的发展具有积极意义。三、国内外标准制修订情况目前国家暂无该属植物的相关标准，我区亦无该属植物的标准颁布。国家标准中，仅有《主要花卉产品等级第2部分：盆花》涉及了苦苣苔科大岩桐属植物的盆花质量等级划分。在广西地方标准上，已有《重瓣大岩桐组培快繁技术规程》（DB45/T1587-2017）、《重瓣大岩桐盆花生产技术规程》（DB45/T1586-2017）两套标准颁布实施。大岩桐和永福报春苣苔植物为同科不同属的物种，原产地也不同，栽培方式、繁殖方法也有差异。本标准的拟定、颁布填补了这一空白。四、编写标准的原则和依据（一）原则1.以科学、准确、权威为指导思想，坚持可靠性、准确性和实用性原则。标准起草过程中，查询了大量的国内技术资料，凝练了编制者多年的试验，并参考了我国近十多年来的科学实验结果。结合苦苣苔产业当前和长远发展需要，考虑我区现有基础，兼顾将来发展，提出的技术既有科学性、先进性，又有实用性，可操作行强。2.坚持先进性、规范性原则本标准属首次编制，采取了严肃认真态度注意反复推敲和斟酌，通过广泛征求意见，合理采纳同行专家的宝贵意见，采纳国内标准中的合理、适宜的内容，保证内容和条款的先进性和规范性。编写过程中，严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》，结合调研和试验研究的结果，组织标准的起草工作。3.坚持尽量收集永福报春苣苔相关组织培养技术，使本标准的技术方法具有更好的可操作性，可以作为政府部门监督、指导生产的依据，在生产上切实可行。（二）依据本标准按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草，参考《NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程》等相关标准，应用前期研究成果、参考国内文献资料，确定本标准的指标设置和各项指标要求。1.外植体的消毒和灭菌取无病虫害、生长健壮的永福报春苣苔成熟叶片，经洗洁精800倍液浸泡10min后在流水下冲洗10min，然后转移到超净工作台上进行灭菌操作。先用棉球蘸取75%乙醇溶液拭擦叶片正面和背面，无菌水冲洗2次；再将叶片在75%乙醇溶液中浸泡8~10s，无菌水冲洗5次；最后用0.1%氯化汞溶液进行两次浸泡，每次浸泡时间为6min，每次浸泡后用无菌水冲洗5次。乙醇溶液和氯化汞溶液浸泡过程中要轻轻震荡使灭菌剂充分接触叶片。在接种盘内将叶片切成2~3cm×2~3cm大小的叶块，以备用。2.初代培养将切好的叶片按叶片正面朝上、背面朝下的方式接入初代培养基中。每种培养基接种叶块20块，重复3次。经过30d的培养后，发现在培养基上添加了一定浓度的6-BA和NAA有利于不定芽的诱导，并能在较短时间内形成不定芽，适宜的不定芽诱导培养基为MS+3.0mg·L-16-BA+0.25mg·L-1NAA，获得的不定芽长势良好。培养温度为25~28°C，光照强度为12.5~30μmol·m-2·s-1，光照时间为12h·d-1，以下增殖培养、壮苗培养、生根培养的环境条件同初代培养。编号培养基6-BA/mg·L-1NAA/mg·L-1芽诱导率/%愈伤诱导率/%不定芽数/株诱导时间/d生长情况Y1MS0041.67±2.887d015.00±2.000d29.00±1.000a长势差Y2MS1.00.1058.33±7.638cd026.33±3.786c26.00±1.000ab长势差Y3MS1.50.1068.33±16.073bc030.33±0.577bc26.67±0.577ab长势差Y4MS3.00.1073.33±7.638abc033.67±5.033abc25.67±2.082b长势良Y5MS1.00.2575.00±5.000abc037.33±1.115ab26.00±2.646ab长势良Y6MS1.50.2581.67±5.774ab038.67±5.508ab24.00±1.000bc长势良Y7MS3.00.2590.00±5.000a043.67±4.041a25.67±1.528b长势良Y8MS1.00.5078.33±5.774ab037.00±2.000ab23.33±1.528bc长势差Y9MS1.50.5080.00±21.794ab038.33±9.504ab23.33±2.887bc长势差Y10MS3.00.5090.00±5.000a041.33±10.017a21.33±1.528c长势差3.增殖培养将从叶片诱导得到的不定芽切取下来，以单个芽形式接入增殖培养基中。每种培养基接种不定芽20株，重复3次。培养30d后，发现适宜永福报春苣苔不定芽增殖的培养基为：MS+1.0~3.0mg·L-1ZT+0.25g·L-1IBA，不定芽健壮，无玻璃化，生根极少。编号培养基ZT/mg·L-1IBA/mg·L-1增殖系数生长情况F1MS1.000.109.97±0.076e芽小，部分生根F2MS2.000.1011.37±0.858d芽小，部分生根F3MS3.000.1011.80±0.854cd芽小，少数生根F4MS1.000.2512.47±0.076bc芽健壮，少数生根F5MS2.000.2512.68±0.539bc芽健壮，少数生根F6MS3.000.2513.07±0.355ab芽健壮，少数生根F7MS1.000.5012.87±0.189ab芽健壮，生根较多，部分玻璃化F8MS2.000.5013.20±0.482ab芽健壮，生根较多，部分玻璃化F9MS3.000.5013.63±0.126a芽健壮，生根较多，部分玻璃化4.壮苗培养选择具有一对以上叶片的植株，以单株形式接入附加了不同植物生长调节剂种类和浓度的MS、1/2MS、1/4MS培养基中。每种培养基接种植株20株，重复3次。培养30d后，发现永福报春苣苔的适宜壮苗培养基为1/2MS+0.1mg·L-1IBA+0.1g·L-1活性炭，植株无玻璃化，长势好。编号培养基IBA/mg·L-1活性炭/g·L-1不定芽数/株生根率/%玻璃化生长情况S1MS0024.67±1.528a66.67±7.638e较多长势一般S2MS0.1026.00±1.732a76.67±7.638cde较多长势一般S3MS0.10.123.67±2.082a81.67±2.887cd无长势一般S41/2MS0016.67±0.577b75.00±8.660cde极少长势好S51/2MS0.1017.00±1.732b95.00±0.000ab极少长势好S61/2MS0.10.115.33±2.517b100.00±0.000a无长势好S71/4MS0014.67±2.309b71.67±2.887de极少长势差S81/4MS0.1016.00±2.646b83.33±2.887bcd极少长势差S91/4MS0.10.115.00±2.646b85.00±13.229bc无长势差5.生根培养将经过壮苗培养的、具有2对以上叶片的植株以单株形式接入生根培养基中。每种培养基接种植株20株，重复3次。培养30d后，发现适宜的生根培养基为1/2MS+0.3mg·L-1IBA+0.5g·L-1活性炭，生根率为100.00%，生根时间最短，根数最多，根长合适，长势好。处理培养基IBA/mg·L-1活性炭/g·L-1生根率/%生根时间/d根数/条根长/cm生长情况D11/2MS0.10.1100.0027.00±1.000a5.57±0.577c3.23±0.282cd长势好D21/2MS0.20.1100.0025.33±0.577abc6.33±0.577bc2.43±0.306e长势好D31/2MS0.30.1100.0024.67±0.577abcd7.33±0.577abc2.93±0.058d长势好D41/2MS0.10.5100.0025.67±0.577ab7.33±0.577abc4.00±0.100a长势好D51/2MS0.20.5100.0023.00±0.000bcd8.00±1.000ab3.90±0.200ab长势好D61/2MS0.30.5100.0021.67±1.155d8.67±0.577a3.63±0.493abc长势好D71/2MS0.11.0100.0024.67±4.509abcd7.00±1.000abc3.43±0.231bc长势良D81/2MS0.21.0100.0022.00±1.732cd6.00±1.000c3.47±0.306bc长势良D91/2MS0.31.0100.0021.67±2.082d6.67±1.528bc4.03±0.058a长势良6.炼苗移栽将生长健壮、生根良好、具有2对以上叶片的组培苗，移出培养室后揭盖在温室中炼苗7~10d。炼苗的环境条件为温度26~30°C，光照强度62.5μmol·m-2·s-1，室内空气相对湿度没有要求，因为组培苗仍然在组培瓶里，此时组培瓶的湿度较高，足以维持其良好生长。将组培苗小心取出并洗净培养基，用50%多菌灵可湿性粉剂1000倍溶液浸泡10~15min，取出后在阴凉处晾置10min，再移栽到装有基质（腐殖土和粗沙的体积比为2:1）的50孔穴盘中，并浇透定根水。15d后，成活率达100.00%。移栽的环境条件为：温度控制在15~28°C，空气相对湿度维持在70％~80％，光照强度为50~80μmol·m-2·s-1。五、主要工作过程标准制定项目计划下达后，标准起草单位组织主要编写人员对《永福报春苣苔组培快繁技术规程》的总体技术要求进行了讨论，研究制定了标准工作方案、技术路线、主要研究方法，标准的具体格式，确定了标准的总体框架和制定原则，明确了标准制定的具体工作计划和进展。主要工作过程如下：1.前期研究2017年开始对永福报春苣苔进行组培快繁研究，以永福报春苣苔的叶片为外植体，开展附加了不同植物生长调节剂的培养基对不定芽诱导、增殖培养、壮苗培养、生根培养的对比实验，筛选出各培养阶段的适宜培养基，建立其离体快繁体系。结果表明：适宜的不定芽诱导培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.25mg/L；不定芽的增殖培养基为MS+ZT1.0-3.0mg/L+IBA0.25mg/L；适宜的壮苗培养基为1/2MS+IBA0.1mg/L+活性炭0.1g/L；适宜的生根培养基为1/2MS+IBA0.3mg/L+活性炭0.5g/L，生根率为100.00%；采用腐殖土和粗沙（体积比）为2:1为移栽基质，移栽成活率达100.00%。除永福报春苣苔以外，目前为止已开展了60个原生种以及30个园艺种的报春苣苔属组培快繁研究。通过开展组培实验，积累了丰富的实验经验，收集了大量的实验数据，并形成了成熟完善的组培技术，发表永福报春苣苔的组培快繁技术论文1篇，发表其他报春苣苔属植物的组培快繁论文6篇。同时该技术率先在本单位进行了应用，取得了良好的效果。此外，2017年已完成了2项苦苣苔科植物的广西地方标准的编制并获颁布实施：《重瓣大岩桐组培快繁技术规程》（DB45/T1587-2017）、《重瓣大岩桐盆花生产技术规程》（DB45/T1586-2017）。大量的实验经验、实验数据以及两项标准的颁布实施为永福报春苣苔组培快繁技术规程的制定奠定了良好的基础。2.人员组织标准任务下达后，我们积极组织技术骨干成立标准编制工作小组，工作组成员具有较丰富的专业知识和实践经验，熟悉业务，了解标准化工作的相关规定并具有较强的文字表达能力。工作组成立后，制定了工作计划，明确了内部分工及进度要求，责任落实到人，具体人员分工（见表1）。表1主要编制人员与责任分工姓名工作单位职称编制分工闫海霞广西壮族自治区农业科学院花卉研究所副研究员主笔、规程编制陶大燕广西壮族自治区农业科学院花卉研究所助理研究员产技术实施，试验研究关世凯广西壮族自治区农业科学院花卉研究所助理研究员生产技术实施，试验研究周锦业广西壮族自治区农业科学院花卉研究所高级工程师总体协调，协助主笔宋倩广西壮族自治区农业科学院花卉研究所高级工程师资料收集整理罗述名广西壮族自治区农业科学院花卉研究所研究员技术指导、监督3.文献资料的收集、调研和分析为了制定好《永福报春苣苔组培快繁技术规程》，我们首先收集和查阅了永福报春苣苔以及组织培养等方面的相关材料，其中包括我国在2013年颁布的《NY/T2306-2013花卉种苗组培快繁技术规程》、2017年广西颁布的、《重瓣大岩桐组培快繁技术规程》（DB45/T1587-2017），广西农业科学院花卉研究所闫海霞发表的《永福报春苣苔离体快繁体系的建立》等国家、地方标准及论文。通过对资料的广泛收集、整理、调