GXAS-沃柑中噻唑锌、亚胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺农药及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱联用法

Q/LB.□XXXXX-XXXX沃柑中噻唑锌、亚胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法范围本文件描述了沃柑中噻唑锌、亚胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺残留量的液相色谱-质谱联用方法。本文件适用于沃柑中噻唑锌、亚胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺残留量的测定。本文件定量限噻唑锌为0.004mg/kg，亚胺唑为0.006mg/kg，氟吡菌酰胺为0.003mg/kg，毒菌酚为0.002mg/kg。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。原理试样在Na2S2O3溶液中恒温振荡，噻唑锌衍生化成2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑，微酸性条件下用0.5%甲酸乙腈液液分配提取，液相色谱-质谱联用法检测，外标法定量。试剂和材料除另有说明外，在分析中仅使用分析纯试剂和GB/T6682中规定的一级水。试剂乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）：色谱纯。甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。甲酸（HCOOH，CAS号：64-18-6）：色谱纯。盐酸（HCl，CAS号：7647-01-0，纯度36%～38%）。五水硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O，CAS号：10102-17-7）。乙酸铵（CH3CO2NH4，CAS号：631-61-8）。氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）。溶液配制甲酸溶液（1%）：吸取1mL甲酸（5.1.3），用水稀释至100mL，摇匀备用。Na2S2O3溶液（1.0mol/L）：称取24.818g五水硫代硫酸钠（5.1.5），用水溶解并定容至100mL，现用现配。盐酸溶液（1mol/L）：量取82mL盐酸（5.1.4），加水混匀，定容至1L。甲酸乙腈溶液（0.5%）：准确吸取5mL甲酸，用乙腈稀释至1000mL，摇匀备用。酸性乙腈水溶液：1体积甲酸乙腈溶液（5.2.4）+2体积水混合。甲酸溶液（0.1%）：吸取1mL甲酸（5.1.3），用水稀释至1000mL，过0.22μm微孔过滤膜（有机相），现用现配。乙酸铵（5mmol/L）溶液：称取0.3854g乙酸铵（5.1.6）溶于100mL水，用水定容至1000mL摇匀，过O.22μm微孔过滤膜（有机相），现用现配。标准品噻唑锌（C4H4N6S4Zn，CAS号：3234-62-6），标准品纯度≥99%。2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑（AMT，C2H3N3S2，CAS号：2349-67-9），标准品纯度≥98%。亚胺唑（C17H13Cl3N4S，CAS号：86598-92-7），标准品纯度≥99%。氟吡菌酰胺（C16H11ClF6N2O，CAS号：658066-35-4），标准品纯度≥99%。毒菌酚（C13H6Cl6O2，CAS号：70-30-4），标准品纯度≥99%。标准溶液配制噻唑锌标准储备溶液（1000mg/L）准确称取约10mg（精确至0.1mg）噻唑锌标准品（5.3.1）于10mL容量瓶中，用甲酸水溶液（5.2.1）溶解，并定容至10mL。避光2℃～8℃条件保存，有效期6个月。2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑标准储备溶液（1000mg/L）准确称取约10mg（精确至0.1mg）2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑标准品（5.3.2）于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.2）溶解，并定容至10mL。避光-18℃及以下条件保存，有效期6个月。亚胺唑标准储备溶液（1000mg/L）准确称取约10mg（精确至0.1mg）亚胺唑标准品（5.3.3）于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.2）溶解，并定容至10mL。避光-18℃及以下条件保存，有效期6个月。毒菌酚标准储备溶液（1000mg/L）准确称取约10mg（精确至0.1mg）（5.3.5）毒菌酚标准品于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.2）溶解，并定容至10mL。避光-18℃及以下条件保存，有效期6个月。氟吡菌酰胺标准储备溶液（1000mg/L）准确称取约10mg（精确至0.1mg）氟吡菌酰胺标准品（5.3.4）于10mL容量瓶中，用乙腈（5.1.1）溶解，并定容至10mL。避光-18℃及以下条件保存，有效期6个月。混合标准储备溶液(20mg/L～50mg/L)吸取一定量的农药标准储备溶液（5.4.2～5.4.5）于容量瓶中用乙腈（5.1.1）定容至刻度，避光-18℃及以下条件保存，有效期2个月。混合标准溶液(5mg/L)吸取一定量的混合标准储备溶液(5.4.6)于容量瓶中，用乙腈(5.1.1)定容至刻度，避光-18℃及以下条件保存，有效期1个月。材料十八烷基硅烷键合硅胶(C18)：粒径40μm～60μm。carbonS吸附剂：粒径40μm～120μm。微孔滤膜(有机相)：O.22μm或相当者。仪器和设备液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。分析天平：感量0.1mg和感量0.01g。组织捣碎仪。涡旋振荡仪。离心机：转速不低于4500r/min。旋转蒸发仪。pH计。超声清洗仪。恒温振荡仪。试样制备试样制备样品取样部位按照GB2763的规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯容器中。试样储存将试样按照测试和备用分别存放。于-18℃及以下条件储存。分析步骤提取准确称取10g（精确至0.01g）试样于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入3mLNa2S2O3溶液（5.2.2）混匀，在37℃恒温下以180rpm的速率振荡30min，加入0.4mL盐酸溶液（5.2.3）调节pH值约为3左右，准确加入甲酸乙腈溶液（5.2.4）20.0mL，超声提取5min，涡旋提取10min，加入5g氯化钠后涡旋2min，在4500r/min下离心5min，备用。净化吸取取8.1中上层清液5mL于内含125mgC18（5.4.1）、12.5mgcarbonS（5.4.2）的15mL塑料离心管中，涡旋振荡2min，于4500r/min离心5min。准确吸取3mL上清液于l5mL离心管中，40℃水浴氮气吹至约0.1mL，用酸性乙腈水溶液（5.2.5）定容至1.0mL，过微孔滤膜(5.4.4)，转入进样小瓶用于测定。测定液相色谱条件液相色谱条件如下：色谱柱：C18-AQ2.1mm×100mm粒径1.9μm，或相当者；流动相：正模式扫描流动相：A相为0.1%甲酸溶液（5.2.6），B相为甲醇；负模式扫描流动相：A相为5mmol/L乙酸铵溶液（5.2.7），B相为乙腈。流动相梯度条件见表1、表2；流速：0.3mL/min；柱温：40℃；进样量：3μL。正模式扫描流动相及其梯度条件时间流动相A(%)流动相B（%）0.0080202.0080203.0030704.002985.012985.1080209.008020负模式扫描流动相及其梯度条件时间流动相A(%)流动相B（%）0.0060402.0030704.005957.005957.1060409.006040质谱参考条件质谱参考条件如下：离子源类型：电喷雾离子源；扫描方式：正离子和负离子分开扫描；电喷雾电压：正离子4000V，负离子-3500V；离子源温度：300℃；雾化气压力：0.242MPa；辅助加热气：0.242MPa；多反应监测：每种农药分别选择至少2个子离子。所有需要检测的子离子按照出峰顺序，分时段分别检测。每种农药的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数，参见附录A。基质匹配标准工作曲线空白样品按照8.1、8.2进行前处理得到空白基质溶液。精确吸取定一定量的混合标准溶液，逐级用空白基质溶液稀释成质量浓度为0.002mg/L、0.005mg/L、0.010mg/L、0.020mg/L、0.050mg/L、0.100mg/L、0.200mg/L、0.500mg/L的基质匹配标准工作溶液，根据仪器性能和检测需要选择不少于5个浓度点，供液相色谱-串联质谱仪测定。以农药定量用子离子的质量色谱图面积为纵坐标、相对应的基质匹配标雕工作溶液质量浓度为横坐标，绘制基质匹配标准工作曲线。定性及定量保留时间被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较.相对误差应在±2.5%之内。离子丰度比在相同实验条件下进行样品测定时，如检出的色谱峰I的保留时间标准样相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物选择的子离子均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品目标化合物的离子丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，其允许偏差不超过表3规定的范围，则可判断样品中存在目标农药。本方法的标准物质LC-MS/MS多反应监测质量色谱图参见附录B。定性时离子丰度比的最大允许偏差单位为百分比离子丰度比＞50＞20～50＞10～20≤10允许相对偏差±20±25±30±50定量外标法定量。试样溶液的测定将基质匹配目标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱-质谱联用仪中，保留时间和离子丰度比定性，测得定量用子离子的质量色谱图峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。空白试验除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。结果计算试样中各农药残留量以质量分数ω计，单位为毫克每千克(mg/kg)，按公式(1)或公式(2)计算。 ω=ρ1×A×V3×V1 ω=ρ2×V3×式中：ω—试样中各被测物残留量的数值，单位为毫克每千克(mg/kg)；ρ1—基质匹配标准工作溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升(mg/L)；ρ2—从基质匹配标准工作曲线中得到的试样溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升(mg/L)；A—试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积；As—基质匹配标准工作溶液中被测物的质量色谱图峰面积；V1—提取液的体积，单位为毫升(mL)；V2—移取净化液的体积，单位为毫升(mL)；V3—样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m—试样质量的数值，单位为克(g)。试样中噻唑锌残留量留量以质量分数ω噻唑锌计，单位为毫克每千克(mg/kg)，按公式(3)计算。 ω噻唑锌=ω2-氨基式中：ω噻唑锌—试样中噻唑锌残留量的数值，单位为毫克每千克(mg/kg)；ω2-氨基-5-巯基一1,3,4-噻二唑—试样中2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑残留量的数值，单位为毫克每千克(mg/kg)；329.8—噻唑锌的摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol)；133.2—2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑的摩尔质量，单位为克每摩尔(g/mol)；2—系数。

（资料性）

噻唑锌、亚胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺农药及其代谢物的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数见表A.1。噻唑锌、亚胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺农药及其代谢物的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数序号农药中文名农药英文名电离方式保留时间(min)去簇电压（V）离子对Ⅰ碰撞能(V)离子对Ⅱ碰撞能(V)12-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑2-amino-5-sulfanyl-1,3,4-thiadiazole正1.636135134.0/43.0-38134.0/75.0-382氟吡菌酰胺Fluopyram正5.02100397.2/173.1-32397.2/208.1-193亚胺唑Imibenconazole正5.484120412.9/125.0-37412.9/170.9-374毒菌酚Hexachlorophen负1.862100