前列泰胶囊中扁蓄药材的薄层鉴别方法研究

前列泰胶囊中萹蓄药材的薄层鉴别方法研究

[摘要]目的：建立前列泰胶囊中萹蓄的薄层鉴别方法。方法：以山奈素有效成分作为对照品，先采用萃取办法除杂，后用双相酸水解的方法提取前列泰胶囊中萹蓄的山奈素成分，对萹蓄药材进行薄层鉴别，并考察不同展开介质、不同点样量、不同厂家薄层板、不同温度、不同湿度对该药中萹蓄药材薄层色谱的影响。结果：以山奈素为对照品，甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8:3:1）为展开系统，对萹蓄药材薄层鉴别特征明显，专属性强。结论：经过试验,该方法可行，重复性好，可作为前列泰胶囊中萹蓄药材的薄层鉴别方法。关键词：前列泰胶囊；萹蓄；山奈素；薄层鉴别前列泰胶囊是由益母草、萹蓄、红花、油菜蜂花粉、知母(盐炒)、黄柏(盐炒)、六味药材，经水提浓缩等工艺制备的胶囊固体制剂。具有清热利湿、活血散结的功效［1］，临床上对湿热挟淤的慢性前列腺炎症有较好的疗效。该品种全国有11家生产企业生产，但目前执行的质量标准可控性较低，还有待于完善。目前，萹蓄作为该处方的臣药，萹蓄为蓼科植物萹蓄PolygonumaviculareL.的干燥地上部分,收载于2010年版中国药典(一部),具有补肾、清肝明目、利尿的功能[2]。山奈素、杨梅苷和萹蓄苷等黄酮类是其主要的有效活性成分[3]，在目前标准中，并未见到关于萹蓄的定性或定量的方法，因此，本实验将选取山奈素作为指标性成分，对前列泰胶囊的萹蓄通过薄层色谱鉴别方法进行研究，为保证标准的可控性更加有效可控。1仪器、试剂和样品KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），DGG-9246A电热恒温鼓风干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司），十万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司），甲醇(分析纯20130411,上海申博化工有限公司)。三氯甲烷(分析纯20140528,上海申博化工有限公司)，浓盐酸(分析纯20130721,上海申博化工有限公司)，山奈素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，编号为111532-201402），前列泰胶囊（20140304、20140201、20140202，贵州百灵企业集团制药股份有限公司）。2方法与结果2.1供试品溶液的制备取本品内容物2g，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水30ml溶解，静置，倾取上层液，水液以三氯甲烷提取四次，每次25ml，三氯甲烷液弃去，水液加浓盐酸1ml，三氯甲烷40ml，水浴回流提取1h，分取三氯甲烷层，水浴浓缩至5ml，作为供试品溶液。2.2对照品溶液的制备取山奈素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。2.3阴性对照品溶液的制备按处方比例及制备工艺，配制缺少萹蓄药材的阴性样品，按“2.1”同法制备阴性对照品溶液，2.4显色剂5%三氯化铝乙醇溶液。2.5展开剂甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8:3:1）[4]展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，105℃下加热5分钟，于紫外灯下365nm检视。2.6薄层色谱条件的考察2.6.1薄层板的选择分别吸取供试品溶液2μl和对照品溶液2μl，以薄层硅胶G板和聚酰胺薄膜2种不同类型材料薄层板，进行展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热5min，于紫外灯下365nm检视。见图1、2。123SS123S（1、2、3为样品3批次，S为山奈素对照品）（1、2、3为样品3批次，S为山奈素对照品）图1聚酰胺薄膜图2硅胶G板由图1、2可得，聚酰胺薄膜板并未将供试品分离；硅胶G板分离效果良好，斑点圆整，与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。故选取硅胶G板展开。2.6.2最佳点样量考察分别吸取供试品溶液和对照品溶液1、2、3、4、5、6μl，分别点于不同薄层硅胶G板上，进行考察，展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热5min，于紫外灯下365nm检视。见图3、4。1234561234567图3供试品不同点样量的考察图4对照品不同点样量的考察由图3、4可得，供试品2µl点样量效果最佳。当点样量大于2µl时，供试品山奈素位置斑点出现拖尾现象；对照品最佳点样量2~7µl皆可，故选择2µl。结合上述2种因素实验结果，可确定薄层板为硅胶G板，供试品和对照品最佳点样量皆为2µl。经预实验验证，确定鉴别萹蓄的薄层鉴别的方法，并按照《中国药典》2010版一部附录ⅩⅧA中药质量标准分析方法验证指导原则进行方法学验证。2.7方法学验证2.7.1专属性考察用三个批次的样品，照上述方法进行专属性实验，结果见图5。123SS1（1、2、3为前列泰胶囊三批次样品，S为山奈素对照品，S1为缺萹蓄阴性对照）图5供试品山奈素专属性考察经专属性试验考察图片，阴性样品无干扰，山奈素Rf值约为0.42。在与对照品相应位置上，显相同颜色清晰斑点，斑点圆整，分离效果好。说明该法专属性强，斑点显色清晰。2.7.2耐用性试验用三个批次的样品，分别进行3个不同厂家薄层板对比，3种不同温度及湿度作为变动因素，照上述鉴别方法进行实验。2.7.2.1不同厂家薄层板试验图片见5、6、7。123S123S(1、2、3为样品3批，S为山奈素对照品)(1、2、3为样品3批，S为山奈素对照品)图片6厂家1图片7厂家2123S(1、2、3为样品3批，S为山奈素对照品)图片8厂家3经3不同厂家耐用性实验结果表明，前列泰胶囊中山奈素的薄层鉴别图斑点分离效果均表现好，斑点圆整，但不同厂家薄层板对山奈素斑点影响不大，重复性较好。2.7.2.2不同温度及湿度试验不同温湿度设定参数，见表1。图谱见9、10、11。表1不同温度及相对湿度的考察项目序号温度（℃）相对湿度（％）120502255533570123S123S123S(1、2、3为样品3批，S为山奈素对照品)(1、2、3为样品3批，S为山奈素对照品)(1、2、3为样品3批，S为山奈素对照品)图9温度20℃湿度50%的考察图10温度25℃湿度55%的考察图10温度35℃湿度70%的考察通过上述不同温度及相对湿度的考察实验，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。斑点清晰，分离效果好，Rf值适中，阴性对照无干扰。细小的变动，该鉴别方法仍有效。2.8结果经过上述中药质量标准分析方法验证，确定该方法为：取本品2g，加甲醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水30ml溶解，静置，倾取上层液，水液以三氯甲烷提取四次，每次25ml，三氯甲烷液弃去，水液加浓盐酸1ml，三氯甲烷40ml，水浴回流提取1h，分取三氯甲烷层，水浴浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取山奈素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8:3:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，105℃下加热5分钟，于紫外灯下365nm检视。2.9讨论本研究在选定供试品处理方法及展开系统之后，选取不同薄层板作为实验考查因素，对2种薄层板进行了考查，确定硅胶G板作为展开介质。在确认整个薄层方法后，首先进行了系统预试验，对供试品和对照品进行最佳点样量的考查，找出最佳点样量，最后，进行该薄层系统方法学验证试验，考察不同温度、不同湿度和不同厂家薄层板对此展开系统的影响，结果表明该薄层鉴别方法可行，专属性强，重复性良好。【参考文献】[1]王聪庆，陈娟，师彦平等．高效液相色谱法测定前列泰片中山柰素的含量［J］.分析测试与仪器，2008,14(1):50~53.[2]许福泉，管华诗，刘红兵等．萹蓄化学成分及其归经药性初探［J］.中国海洋大学学报，2010,40(3):101~104.[3]吴呈祥，李萍，陈君等．中药萹蓄的质量标准研究［J］.药学与临床研究，2009,17(5):365~369.[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京:化学工业出版社,2010:314.[5]国家药典委员会.