PCR考试第二套试卷及答案

一、单选题（每题2分，共30分）1.荧光定量PCR检测过程中，基线漂移的可能原因有：（D）A.蒸发B.探针水解C.相邻荧光通道干扰D.以上都是2.核酸分子中储存遗传信息的关键部分时：（D）A.mRNAB.tRNAC.rRNAD.DNA3.在PCR检测中，分析前的质量影响因素包括（D）A.标本采集室间B.标本运送时间C.标本保存时间和温度D.以上全是4.实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒2个靶标（ORFlab和N基因），阳性结果判断错误的是：（B）A.同一份标本中检测结果均为阳性，判定为阳性B.同一份标本单个靶标阳性后对该样本重复检测，如果仍为单靶标阳性，判定为阳性C.两种标本同时出现单靶标阳性，可判定为阳性D.两种类型标本两次采样检测中均出现单个靶标阳性的检测结果，可判定为阳性5.新冠病毒河段检测样本送检：（D）A.样本采集后室温放置不超过4hB.应按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（原卫生部令第45号）办理《准运证书》C.样本应单独转运，不能和其他物品混杂D.以上都对6.一下哪些有利于DNA的保存：（A）A.加入EDTA螯合钙离子，去除核酸酶的活性B.加入少量DNaseC.溶于pH3.0的溶液中D.加入少量RNase7.如果一个PCR反应体系中加入模板200个，经过30个循环后，理论上扩增产物的数量将达到：（C）A.200×30×2B.2002×30C.200×230D.200×3028.新冠病毒核酸检测过程中为最大限度监控实验室假阳性结果，阴性室内质控建议：（D）A.建议每批检测设立1个阴性质控B.建议每批检测设立2个阴性质控，二份阴性质控固定C.建议每批检测设立3个阴性质控，三份阴性质控固定D.建议每批检测设立3个阴性质控，三份阴性质控随机放在临床样本中间，与待检测样本同时参与全过程检测9.PCR扩增检测采用内标，可以识别扩增检测的：（C）A.假阴性B.假阳性C.假阴性、假阳性都可以预防D.假阴性、假阳性都不能预防10.在临床基因扩增检验实验中，影响结果正确与否的重要因素，除了试剂盒质量外，其他还有：（D）A.人员素质B.仪器设备状态C.室内质控措施D.以上全是11.核酸探针的标志性特征是：（A）A.一小段已知序列的单链核酸B.一小段未知序列的单链核酸C.一小段未知序列的双链核酸D.有同位素或非同位素标志物12.使用PCR技术检测新冠核酸病毒时，PCR体系所必需的组分是：（C）①模板②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶⑤16sRNA⑥反转录酶A.12345B.23456C.12346D.1345613.生物安全水平的级别共分为几个等级：（D）A.1个B.2个C.3个D.4个14.基因突变的实质是指：（A）A.染色体上的DNA序列变化了B.染色体上的DNA变成了蛋白质C.染色体上的DNA变成了RNAD.染色体上的DNA高级结构发生了局部改变15.在临床基因扩增检验中，弱阳性室内质控品发生失控，常见原因有下述各项，但除外（D）A.核酸提取中的丢失、有机溶剂的去除不彻底、标本扩增抑制物的残留等B.扩增仪孔间温度的不均一性C.Taq酶和/或反转录酶的失活D.扩增产物的污染二、判断题（每题2分，共10分）1.应当由经过适当培训的人员使用适当的个人防护装备和设备处理新型冠状病毒危险废弃物。（Y）2.扩增管没有盖好会造成PCR过程中反应液产生热蒸发，直接影响检测结果，但不会成为一个污染源。（X）3.未经培养的感染性材料在采用可靠的方法灭活前进行的新型冠状病毒核酸提取，实验人员应采用生物安全三级实验室的个人防护。（Y）4.使用NGS技术可实现对临床样本中包括点突变（SNV）、插入缺失（Indel）、拷贝数变异（CNV）和结构变异（SV）等多种变异的识别。（Y）5.NGS技术检测结果具有很高的准确性，不需要进行性能验证或性能确认。（X）三、填空题（每题2分，共10分）1.PCR扩增结果的影响因素有引物，模板，DNA聚合酶和DNTP,反转录酶等。2.分子诊断实验室设备管理要求宜重点关注设备标识、设备档案、设备校准、设备保养和设备报废。3.全血标本如用于DNA检测，可2-8°c下短期保存；如用于RNA检验，则应-20°C保存。4.针对常规分子诊断定性检测试剂不同批号性能验证时，应选择阴性和弱阳性的样品，结果符合预期。5.全血标本如用于DNA检测，可2-8°c下短期保存；如用于RNA检验，则应-20°C保存长期-70°C保存。四、问答题（每题8分，共32分）1.分子检测实验室检测过程中，不同批号试剂的批间差异质检该如何做？2.有一基因扩增实验室在检测新冠病毒核酸标本时，以新冠病毒核酸（RNA）扩增片段的cDNA为标准品，检测结果除了试剂盒所带的cDNA标准品为阳性外，所有临床标本及阳性质控标本、阴性质控标本均为阴性，显然该次RT-PCR扩增检测存在问题，进一步查找原因，发现在血清标本的收集运送及保存中均严格按要求进行。那么，你能帮助该实验室分析一下检测失败的原因吗？1.室内质控：建议每批检测设立一个弱阳性、三个阴性质控（建议1份生理盐水、2份阴性样本），三份阴性质控随机放在临床样本中间。与待测样本同时参与全过程检测。弱阳性质控测定应为阳性，三份阴性质控全部为阴性，视为在控。反之，则为失控，不可发出报告，应及时分析原因，必要时重新检测样本。质量控制基本要求注意：每次检测后，记录弱阳性质控品检测的ct值3.简述新冠病毒核酸检测中阴、阳室内质控品失控常见原因有哪些？4.有一实验室准备使用ARMS法开展肿瘤EGFR基因突变检测，是否需要做性能验证？如果做，至少需要做哪些参数？该如何做？五、论述题（18分） 某一开展巨细胞病毒CMV-DNA定性检测的临床实验室，参加盲样测试（包括三个阳性样本、两个阴性样本），该实验室做出的结果为5份样本全部阳性，工作人员将盲样全部阳性的结果确认后立即发出，第二天