《实时荧光定量PCR仪性能评价通则GBT+42753-2023》详细解读

《实时荧光定量PCR仪性能评价通则GB/T42753-2023》详细解读contents目录1范围2规范性引用文件3术语和定义4缩略语5要求5.1工作条件contents目录5.2外观5.3安全性5.4环境适应性5.5电磁兼容性5.6性能要求6评价方法6.1外观检查contents目录6.2安全性试验6.3环境适应性试验6.4电磁兼容性试验6.5性能试验7评价报告contents目录附录A(资料性)仪器升降温循环程序和样本测试孔位排布A.1升降温循环程序A.2温度控制性能试验的孔位排布A.3荧光检测性能试验的孔位排布A.4整机性能试验的孔位排布附录B(资料性)荧光参比溶液的制备方法contents目录附录C(资料性)两组数据显著差异的判断方法C.1两组数据显著差异的判断方法C.2F分布分位数表C.3t分布分位数表附录D(资料性)报告格式示例参考文献011范围适用对象实时荧光定量PCR仪的制造商01实时荧光定量PCR仪的使用者02相关的检验检测机构和技术监督部门03实时荧光定量PCR仪的性能参数性能评价的方法和步骤涵盖内容仪器性能的评价指标及其接受标准适用范围限定本通则仅适用于实时荧光定量PCR仪的性能评价不涉及仪器使用过程中的样本处理、试剂准备等操作的评价““010203提供统一的实时荧光定量PCR仪性能评价标准确保仪器性能满足科研和临床诊断的需求为制造商和使用者提供仪器性能评价的依据和方法目的和意义022规范性引用文件核心引用文件该通则在制定过程中，主要引用了与实时荧光定量PCR仪性能评价密切相关的国家或行业标准，这些标准为本通则的制定提供了技术支撑和规范依据。辅助性引用文件除了核心引用文件外，还参考了一系列与PCR技术、仪器设备性能评价等相关的辅助性标准和规范，这些文件为通则的细化和实施提供了补充和支持。2.规范性引用文件文件的选择原则在选择规范性引用文件时，主要考虑了文件的权威性、时效性和适用性。所有引用的文件均经过严格筛选和评估，确保其内容与本通则的要求相契合，并能为实时荧光定量PCR仪的性能评价提供有效的指导。引用文件的作用规范性引用文件在通则中起到了至关重要的作用。它们不仅为通则的制定提供了技术依据，还为实施过程中的具体操作提供了标准化的指导。通过引用这些文件，通则能够更加科学、准确地评价实时荧光定量PCR仪的性能，从而推动行业的技术进步和质量提升。2.规范性引用文件033术语和定义定义实时荧光定量PCR仪是一种通过荧光测量技术，实时监测PCR反应过程中荧光信号变化的仪器。功能该仪器能够自动收集荧光数据，通过计算机进行分析和处理，从而实现对PCR产物的定量检测。3.1实时荧光定量PCR仪定义荧光定量系统是实时荧光定量PCR仪的核心部件，负责激发荧光并检测荧光信号。组成该系统通常由荧光激发光源、荧光检测器以及相关的光路系统组成。3.2荧光定量系统3.3循环过程监测意义通过循环过程监测，可以了解PCR反应的实时动态，为后续的定量分析和结果解读提供依据。定义循环过程监测是指在PCR反应过程中，对每个循环的荧光信号进行实时监测和记录。荧光数据分析是指对实时荧光定量PCR仪收集的荧光数据进行处理和分析的过程。定义荧光数据分析通常包括数据预处理、荧光曲线拟合、Ct值计算等步骤，旨在从荧光数据中提取出有用的生物学信息。方法3.4荧光数据分析044缩略语通过特定的引物和耐热DNA聚合酶，实现DNA的快速复制。在医学诊断、法医学、生物技术等领域有广泛应用。聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）：一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA片段。PCR实时荧光定量PCR（QuantitativeReal-TimePolymeraseChainReaction）：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测PCR进程。可用于定量分析DNA模板的初始浓度，具有灵敏度高、特异性强、准确性好等优点。qPCR常用于基因表达分析、病原体检测、基因突变筛查等。GB/T旨在规范行业行为，提高产品质量和安全性能。GB/T标准具有较高的权威性和指导意义，但并非强制执行。国家推荐性标准（Guobiao/Tuijian）：由国家标准化管理委员会发布，为全国范围内推荐采用的标准。010203DNA脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）：生命体内存储遗传信息的生物大分子。01由四种碱基（A、T、C、G）组成的双螺旋结构，决定了生物的遗传特征。02是生物遗传信息的载体，也是生物进化的基础。03055要求1235.1正常工作条件仪器应在一定的环境温度和相对湿度下正常工作，通常环境温度要求为15℃～30℃，相对湿度不大于80%。供电电源应符合仪器额定电源电压，且电源电压波动不应超出标称电压的±10%。5要求仪器应远离机械振动和冲击，以及强电磁场干扰，以确保稳定的工作环境。5要求5要求5.2仪器外观仪器的外观应光洁，无明显的剥落、擦伤、污垢等瑕疵。铭牌及标志应耐久清晰，内容需符合相关法规和标准要求。仪器的固件不得松动，调节件应灵活且功能正常。零件表面不得有锈蚀现象。5要求5.3安全性要求5要求5.4环境适应性要求若为医疗仪器，则应满足YY0648-2008医疗器械安全标准。分析仪器应满足GB4793.6-2008,GB4793.9-2013和GB/T34065-2017等电气安全标准。0102035要求分析仪器应满足GB/T11606-2007环境条件分组要求。01医疗仪器则应符合GB/T14710-2009的环境条件分组要求。025.5电磁兼容性要求035要求分析仪器应满足GB/T18268.1的电磁兼容性标准。医疗仪器则需满足GB/T18268.26的相应要求，以确保仪器在电磁环境中的稳定运行。温度控制包括升温速率和降温速率，平均速率均不应小于1.5℃/s，以确保快速的热循环。同时，温度波动度应不大于0.2℃，以维持稳定的反应环境。荧光检测性能标准中详细规定了荧光检测的灵敏度、线性范围、分辨率等关键指标，以确保仪器能够准确捕捉和量化荧光信号。整机性能除了上述具体的性能指标外，标准还要求对仪器的整体性能进行评估，包括仪器的稳定性、可靠性、易用性等方面。这些要求共同确保了实时荧光定量PCR仪能够在各种实验条件下提供准确、可重复的结果。5要求065.1工作条件适宜的环境温度范围通常实时荧光定量PCR仪应在15°C至30°C的环境温度下运行，以确保仪器内部组件的稳定性和性能。湿度控制环境湿度应保持在30%至70%之间，以避免仪器内部电路受潮或过于干燥而影响其正常工作。环境温度与湿度电源要求仪器应接入稳定、可靠的电源，电压波动范围应在仪器规定的允许范围内，以保证仪器正常运行及延长使用寿命。接地保护为确保操作安全，仪器应具备良好的接地保护，以防止静电干扰或电气故障对仪器和操作人员造成损害。电源与接地电磁干扰防护仪器应具备一定的电磁屏蔽能力，以减少外部电磁场对仪器内部电路和荧光检测系统的干扰。光照控制避免外部干扰为避免外部光线对荧光检测的影响，仪器在工作时应处于避光状态，或使用遮光罩等设备进行保护。0102VS实时荧光定量PCR仪应放置在平稳、无振动的台面上，以保证仪器在运行过程中不会因振动而影响其性能和稳定性。清洁维护定期对仪器进行清洁和维护，以去除灰尘、污垢等杂质，确保仪器始终处于良好的工作状态。清洁时应使用无绒布或专用清洁剂，避免对仪器表面造成划伤或腐蚀。放置要求仪器放置与清洁075.2外观仪器表面应平整、光滑，无明显的划痕、凹陷、变形等缺陷。仪器的接缝处应均匀、紧密，无明显的缝隙和错位现象。仪器应具备清晰的标识和铭牌，标明仪器名称、型号、制造商等信息。5.2.1仪器整体外观010203控制面板应布局合理，按键、旋钮等操作部件应标识清晰，易于辨识和操作。控制面板上的显示屏应清晰、无闪烁，显示内容应准确、完整。控制面板的材质应具有一定的耐磨性和抗腐蚀性，确保长期使用的稳定性和可靠性。5.2.2控制面板外观仪器的内部结构应整齐、有序，各部件之间的连接应牢固、可靠。5.2.3内部结构外观内部结构应便于清洁和维护，无明显的积尘和污垢。仪器内部的线路和管路应布局合理，避免交叉和干扰，确保仪器运行的稳定性和安全性。5.2.4安全防护装置仪器应具备必要的安全防护装置，如防护罩、防护门等，确保操作人员的安全。01安全防护装置应设计合理，便于操作和使用，不影响仪器的正常运行和维修。02安全防护装置应具备一定的强度和稳定性，能够承受意外情况下的冲击和碰撞。03085.3安全性电气安全实时荧光定量PCR仪必须符合相关的电气安全标准，包括防电击保护、接地保护等，以确保操作人员在使用过程中的人身安全。5.3安全性机械安全仪器的设计应考虑到机械部件的安全性，如防止夹伤、划伤等。同时，应确保移动部件的稳定性和可靠性，以防止意外发生。辐射安全由于PCR仪在工作过程中可能会产生一定的电磁辐射，因此必须确保其辐射水平在安全范围内，不会对操作人员造成健康危害。5.3安全性化学安全：考虑到PCR实验可能涉及有毒或有害的化学物质，仪器应设计有适当的防护措施，如防泄漏、防污染等，以保护操作人员和环境的安全。软件安全：实时荧光定量PCR仪的软件系统应具备高度的稳定性和安全性，防止数据丢失、被篡改或非法访问。同时，应具备用户权限管理功能，以确保不同用户只能访问其被授权的数据和功能。总的来说，安全性是实时荧光定量PCR仪设计和使用过程中必须高度重视的方面。通过严格遵守相关安全标准和规范，可以确保仪器的安全可靠运行，从而保障实验操作人员的健康和实验数据的准确性。请注意，以上内容是基于对《实时荧光定量PCR仪性能评价通则GB/T42753-2023》的理解以及一般实验室设备安全性的常识进行的解读。具体的安全要求可能因仪器型号、生产厂家和实验环境的不同而有所差异。因此，在实际使用过程中，应参考仪器的具体使用说明和安全手册进行操作。095.4环境适应性5.4环境适应性实时荧光定量PCR仪需要在不同的环境温度下保持稳定的性能。通则中规定了仪器在不同温度条件下的工作范围和性能要求，确保仪器在各种实验环境下均能准确、可靠地运行。01040302温度适应性湿度对仪器的性能和稳定性也有重要影响。通则中考虑了不同湿度条件下仪器的表现，确保在相对潮湿或干燥的环境中，仪器仍能维持其精度和可靠性。湿度适应性通则还规定了仪器在不同电源电压和频率下的工作性能，以保证在电力供应不稳定或电源质量不佳的情况下，仪器仍能正常工作，减少因电源问题导致的实验误差或设备损坏。电源适应性考虑到实验室环境中可能存在的各种电磁干扰，通则对仪器的抗干扰能力提出了明确要求。这有助于确保仪器在复杂电磁环境下仍能准确读取数据，提高实验的可靠性和重复性。抗干扰能力105.5电磁兼容性电磁兼容性要求发射限制仪器在正常工作时产生的电磁发射应符合相关标准，以避免对其他设备造成干扰。抗扰度实时荧光定量PCR仪应具有一定的抗电磁干扰能力，以确保在复杂电磁环境中能够正常工作，且性能不受明显影响。电磁兼容性测试应在符合标准的电磁屏蔽室或开阔场地进行，以确保测试结果的准确性和可靠性。测试环境测试应包括静电放电、射频电磁场辐射、电快速瞬变脉冲群、浪涌（冲击）抗扰度等项目，以全面评估仪器的电磁兼容性性能。测试项目电磁兼容性测试优化电路设计，采用滤波、屏蔽、接地等技术手段，提高仪器的抗电磁干扰能力。电路设计选用具有优良电磁屏蔽性能的材料，以减少电磁辐射和泄漏。材料选择通过软件算法优化，提高仪器在复杂电磁环境中的稳定性和可靠性。软件优化电磁兼容性改进措施010203115.6性能要求升温速率同样地，仪器的平均降温速率也应不小于1.5℃/s。快速的降温速率有助于缩短实验周期，并减少非特异性扩增的可能性。降温速率温度波动度在PCR反应过程中，温度的稳定性至关重要。因此，该通则规定温度的波动应不大于0.2℃，以确保反应的准确性和可重复性。实时荧光定量PCR仪的平均升温速率应不小于1.5℃/s。这一指标确保了仪器能够快速达到所需的反应温度，从而提高实验效率。5.6.1温度控制性能5.6.2荧光检测性能荧光信号分辨率为了区分不同浓度的DNA标准物质，仪器应具有高分辨率的荧光信号检测能力。这有助于在定量分析时获得更精确的结果。荧光信号稳定性荧光信号的稳定性对于长时间运行的实验尤为重要。通则要求仪器在连续工作过程中，荧光信号的漂移和噪声应控制在一定范围内，以确保实验结果的可靠性。荧光信号采集仪器应能够实时采集并处理循环过程中的荧光信号。这要求仪器具备高灵敏度的荧光检测系统，以确保低浓度样本的准确检测。0302015.6.3整机性能正常工作条件通则规定了仪器在正常工作条件下应满足的要求，包括环境温度、相对湿度、供电电源等。这些条件确保了仪器在常规实验室环境中的稳定运行。仪器外观与安全性仪器的外观应光洁、无损伤，并符合相关法规和标准的要求。此外，仪器还应满足一定的安全性要求，如电气安全、机械安全等，以保障操作人员的安全。环境适应性与电磁兼容性仪器应具有良好的环境适应性和电磁兼容性，以应对不同实验室环境和电磁干扰的影响。这有助于确保仪器在各种条件下的稳定性能和准确结果。126评价方法在《实时荧光定量PCR仪性能评价通则》中，评价方法部分详细阐述了如何对实时荧光定量PCR仪的性能进行全面、客观的评价。以下是对评价方法的详细解读6评价方法“通过记录仪器从低温到高温以及从高温到低温的所需时间，计算其平均升温速率和降温速率，以验证是否达到标准要求的≥1.5℃/s。升温速率和降温速率测试在设定的温度点上，记录仪器在稳定状态下的温度波动范围，以确认其是否满足≤±0.2℃的要求。温度波动性测试6评价方法通过比较仪器显示的温度与实际测量的温度之间的差异，来评估温度示值的准确性，误差应≤±0.5℃。温度示值误差测试6评价方法在仪器工作区域内选取多个测试点，测量各点的温度值，以计算温度均匀度，确保其≤1℃。温度均匀度测试验证仪器在设定温度下保持时间的准确性，误差应控制在≤±5℃范围内。温度持续时间误差测试荧光强度重复性测试通过多次测量同一样品的荧光强度，计算其相对标准偏差（RSD），以评估荧光强度的稳定性，RSD应≤2%。016评价方法荧光强度均匀性测试在仪器检测区域内选取多个测试点，测量各点的荧光强度值，计算其RSD以评估均匀性，RSD应≤5%。026评价方法荧光强度线性测试通过制备不同浓度的标准样品，测量其荧光强度并绘制标准曲线，计算线性相关系数（r），以验证荧光强度与样品浓度之间的线性关系，r应≥0.990。6评价方法01整机性能评价需要综合考虑仪器的温度控制性能和荧光检测性能。此外，还需对仪器的外观、安全性、环境适应性以及电磁兼容性等方面进行评估。评价方法中还规定了进行整机性能评价时需要具备的条件和使用的试剂与材料，如DNA标准物质和荧光定量PCR检测试剂等。0203通过这些评价方法，可以对实时荧光定量PCR仪的性能进行全面、客观的评价，为仪器的研发、生产和检验提供技术依据，从而推动国产实时荧光定量PCR仪生产技术的发展和质量提升。6.3整机性能评价136.1外观检查外壳涂层应均匀，无脱落、起泡等现象。仪器上的标识、标签应清晰可辨，无模糊、脱落情况。仪器应外观整洁，无明显的划痕、变形或损坏。设备整体外观控制面板及显示屏控制面板应布局合理，按键灵活可靠，无卡阻现象。01显示屏应清晰明亮，无坏点、亮点等显示缺陷。02显示内容应准确无误，无乱码、闪烁等问题。03010203仪器各连接部件应紧固可靠，无松动、脱落现象。接口应标准、规范，方便用户进行连接操作。接口处应有明确的标识，便于用户识别。连接部件及接口146.2安全性试验1.电气安全实时荧光定量PCR仪必须符合相关的电气安全标准。这包括仪器的接地、绝缘、耐压等电气性能，以确保操作人员在使用过程中不会因电气问题而受到伤害。2.机械安全仪器的机械结构必须稳固且安全，防止在操作过程中发生意外移动或损坏。同时，应确保仪器的运动部件在正常运行时不会对人员造成伤害。6.2安全性试验6.2安全性试验01由于实时荧光定量PCR仪在工作过程中会产生热量，因此必须确保仪器的散热系统有效，并设置过热保护装置，以防止因过热而引发的安全事故。考虑到实时荧光定量PCR仪在使用过程中可能会接触到化学试剂，因此仪器应具备一定的化学防护能力，如防腐蚀、防泄漏等，以确保操作人员的化学安全。对于可能产生的电磁辐射或其他类型的辐射，实时荧光定量PCR仪应采取必要的防护措施，以降低辐射对操作人员的影响。02033.热安全4.化学安全5.辐射安全通过以上几个方面的安全性试验，可以全面评估实时荧光定量PCR仪在使用过程中的安全性，从而确保操作人员的生命安全和身体健康。这些安全性要求也是该通则对仪器生产厂家提出的重要标准，有助于推动国产实时荧光定量PCR仪生产技术的发展和质量提升。需要注意的是，虽然该通则为仪器的性能评价提供了全面的指导，但在实际操作过程中，仍需根据具体情况制定相应的安全操作规程，并定期对仪器进行安全检查和维护，以确保其长期安全、稳定地运行。6.2安全性试验156.3环境适应性试验01试验目的环境适应性试验是为了验证实时荧光定量PCR仪在不同环境条件下的工作稳定性和可靠性，以确保仪器在各种实际使用环境中能够正常运行，并提供准确的检测结果。试验内容环境适应性试验通常包括高温试验、低温试验、湿热试验、振动试验等多个方面。这些试验旨在模拟仪器可能遇到的各种极端环境条件，以检验其性能和稳定性。高温试验通过模拟高温环境，检验仪器在高温条件下的工作状况。这包括检查仪器的散热性能、电子元件的耐高温能力以及整体运行的稳定性。6.3环境适应性试验0203湿热试验通过模拟高湿度和温度变化的环境，检验仪器在潮湿条件下的防潮、防霉变能力以及电气性能的稳定性。低温试验在低温环境下进行测试，以验证仪器在寒冷条件下的启动、运行和性能表现。这有助于确保仪器在寒冷地区或冬季能够正常工作。振动试验模拟运输或使用过程中可能出现的振动情况，以测试仪器在振动环境下的结构强度和性能稳定性。这有助于确保仪器在运输或使用过程中不会因振动而损坏或性能下降。6.3环境适应性试验166.4电磁兼容性试验6.4电磁兼容性试验电磁兼容性试验是确保实时荧光定量PCR仪在复杂电磁环境中能正常工作的重要环节。以下是对该部分内容的详细解读试验目的：电磁兼容性试验旨在验证PCR仪在规定的电磁环境下，不会因外界电磁干扰而影响其性能，同时也不会产生过量的电磁干扰影响其他设备。1.抗扰度测试通过模拟各种电磁干扰信号，如静电放电、射频电磁场辐射、电快速瞬变脉冲群等，来检验PCR仪的抗干扰能力。2.发射测试测量PCR仪在正常工作时产生的电磁辐射，以确保其符合相关电磁辐射标准，避免对其他电子设备造成干扰。6.4电磁兼容性试验6.4电磁兼容性试验试验结果评估根据试验结果，评估PCR仪的电磁兼容性性能。如果设备在试验中表现出良好的抗干扰能力和低电磁辐射水平，则认为其通过了电磁兼容性试验。试验环境与设备试验应在符合标准的电磁屏蔽室内进行，以避免外界电磁干扰对测试结果的影响。同时，应使用专业的电磁兼容测试设备，如静电放电发生器、射频信号发生器等。试验标准电磁兼容性试验应遵循国家及国际标准，如GB/T17626系列标准（电磁兼容试验和测量技术）等，以确保试验的准确性和有效性。176.5性能试验1.温度控制性能测试实时荧光定量PCR仪需要具备精确的温度控制能力，以确保PCR反应过程中的温度循环准确性。性能试验将评估仪器在不同温度设定下的稳定性、均匀性和升温降温速率等。2.荧光检测性能测试荧光信号的准确检测是实时荧光定量PCR技术的核心。性能试验将检查仪器的荧光检测系统，包括荧光激发和发射光谱的匹配性、荧光信号的灵敏度和线性范围等。6.5性能试验6.5性能试验3.整机性能测试除了针对特定功能的测试外，整机性能测试还将评估仪器在连续工作、多任务处理以及抗干扰能力等方面的表现。这些测试有助于确保仪器在实际使用中的稳定性和耐用性。4.生物检测功能验证通过使用标准样品或已知浓度的靶标核酸进行PCR扩增，验证仪器的生物检测功能。这包括评估仪器的特异性、灵敏度和定量准确性等关键指标。5.安全性和可靠性测试性能试验还包括对仪器的安全性和可靠性进行评估，如电气安全、机械安全以及仪器的使用寿命等。这些测试旨在确保仪器在操作过程中不会对操作人员造成危害，并能长时间稳定运行。187评价报告仪器基本信息包括仪器名称、型号、生产厂家、出厂编号等。报告内容要求01评价环境描述详细描述评价时的环境温度、湿度、电源等条件。02评价方法与过程详细阐述所采用的评价方法、步骤及操作过程。03评价结果与分析根据实验数据，对仪器的各项性能指标进行客观分析和评价。04报告应使用规范的语言和术语，确保表述清晰、准确。报告撰写规范01报告中的数据应真实、可靠，且需经过严格的统计和分析。02报告中应包含必要的图表和曲线，以便于更直观地展示评价结果。03报告格式应符合相关标准和规范，排版整洁、美观。04报告完成后，应经过相关负责人或专家组的审核，确保报告的质量和准确性。审核通过后，报告可由相关机构或部门正式发布，以供公众查阅和参考。如有需要，报告还可以提交给相关监管部门或行业协会，作为仪器质量评价和监管的依据。报告审核与发布01020319附录A(资料性)仪器升降温循环程序和样本测试孔位排布《实时荧光定量PCR仪性能评价通则GB/T42753-2023》是中国于2023年12月1日开始实施的一项国家标准。该标准规范了实时荧光定量PCR仪的评价体系与方法，为这类仪器的性能评价提供了统一的准则。以下是对该标准的详细解读附录A(资料性)仪器升降温循环程序和样本测试孔位排布一、标准制定的背景和目的附录A(资料性)仪器升降温循环程序和样本测试孔位排布实时荧光定量PCR仪在生物分析领域具有广泛应用，尤其在新冠疫情期间，其重要性更加凸显。然而，长期以来，该市场主要由国外品牌占据，国内产品的发展受到一定制约。随着国内科研仪器制造水平的提升，国产化实时荧光定量PCR仪已逐步占领国内外市场。此标准的制定旨在规范仪器的性能评价指标，推动国产实时荧光定量PCR仪生产技术的发展和质量提升。1.术语和定义明确了实时荧光定量PCR仪的相关术语和定义，为后续的评价工作提供了基础。2.要求对实时荧光定量PCR仪的性能提出了具体要求，包括温控性能、荧光检测性能和整体性能等。附录A(资料性)仪器升降温循环程序和样本测试孔位排布提供了详细的评价方法，包括温度控制性能测试、荧光检测性能测试和整机性能测试等。这些方法确保了评价的准确性和可重复性。3.评价方法规定了评价报告的内容和格式，便于用户和相关机构了解仪器的性能情况。4.评价报告附录A(资料性)仪器升降温循环程序和样本测试孔位排布VS包括升温速率、降温速率、温度波动性、温度示值误差、温度均匀度和温度持续时间误差等关键参数。这些参数对于确保PCR反应的准确性和可重复性至关重要。2.荧光检测性能涉及荧光强度重复性、荧光强度均匀性和荧光强度线性等要求。这些要求有助于确保仪器在荧光检测方面的准确性和稳定性。1.温控性能附录A(资料性)仪器升降温循环程序和样本测试孔位排布四、评价方法的要点在评价方法中，对整机性能进行评价时需要具备DNA标准物质和荧光定量PCR检测试剂。其中，DNA标准物质是国家有证标准物质，包括线性标物和样本标物，且线性标物应为10倍浓度梯度的DNA标准物质系列溶液。这些标准物质和试剂的选择确保了评价的可靠性和有效性。附录A(资料性)仪器升降温循环程序和样本测试孔位排布五、结论《实时荧光定量PCR仪性能评价通则GB/T42753-2023》的制定和实施对于规范实时荧光定量PCR仪的性能评价指标具有重要意义。它不仅为生产企业提供了研发方向和技术依据，还为行业主管部门提供了检验标准。这将有助于推动国产实时荧光定量PCR仪生产技术的发展和质量提升，进一步提高我国生物分析行业的整体水平和核心竞争力。附录A(资料性)仪器升降温循环程序和样本测试孔位排布20A.1升降温循环程序实时荧光定量PCR仪的升温速率应达到或超过1.5℃/s，以确保快速且有效地达到所需的反应温度。升温速率同样地，降温速率也应达到或超过1.5℃/s，以便在必要时能够迅速降低温度，例如在进行某些特定的PCR程序时。降温速率升温速率和降温速率温度波动性为了保证PCR反应的稳定性和一致性，实时荧光定量PCR仪的温度波动性应控制在±0.2℃以内。温度示值误差温度示值误差是指仪器显示温度与实际温度之间的差异，该误差应不超过±0.5℃，以确保实验结果的准确性。温度波动性和温度示值误差温度均匀度温度均匀度是指在仪器工作区域内各点温度之间的差异，对于实时荧光定量PCR仪来说，温度均匀度应控制在1℃以内，以保证整个反应区域内的温度一致性。温度持续时间误差温度均匀度和温度持续时间误差温度持续时间误差是指仪器在设定温度下保持的时间与实际所需时间之间的差异，该误差应不超过±5℃，以避免因时间控制不准确而影响实验结果。010221A.2温度控制性能试验的孔位排布1.试验孔位选择为了确保评价的全面性和准确性，通则要求在选择试验孔位时应考虑仪器的不同区域，包括中心区域和边缘区域。这样可以更全面地反映仪器在整个加热块上的温度均匀性和控制精度。2.孔位排布原则孔位的排布应遵循一定的原则，以确保试验的有效性和可重复性。通常，孔位会按照特定的图案或网格进行排列，以便在试验中能够均匀地覆盖整个加热区域。A.温度控制性能试验的孔位排布A.温度控制性能试验的孔位排布3.温度监测点设置在每个选定的孔位中，需要设置温度监测点来实时记录温度变化。这些监测点通常位于孔位的中心或特定位置，以便准确反映该孔位的实际温度情况。4.试验条件与步骤在进行温度控制性能试验时，需要遵循一定的试验条件和步骤。例如，设定特定的温度程序，包括升温、降温和恒温阶段，并记录每个孔位的温度变化数据。5.数据分析与评价标准试验完成后，需要对收集到的温度数据进行详细的分析。通过比较不同孔位之间的温度差异、升温降温速率以及温度波动性等指标，来评价PCR仪的温度控制性能是否满足通则的要求。22A.3荧光检测性能试验的孔位排布A.3荧光检测性能试验的孔位排布排布方式对结果的影响不同的孔位排布方式可能会对荧光信号的采集和检测结果产生影响。例如，如果孔位过于密集，可能会导致荧光信号的相互干扰；而如果孔位过于分散，则可能会降低检测效率。因此，选择合适的孔位排布方式对于保证检测结果的准确性和可靠性至关重要。标准中的孔位排布要求根据GB/T42753-2023标准，荧光检测性能试验的孔位排布应遵循一定的规则和原则，以确保试验的有效性和可比性。具体要求可能包括孔间的距离、孔的布局方式等。孔位排布的重要性荧光检测性能试验中，孔位排布是影响检测结果准确性和可靠性的关键因素之一。合理的孔位排布能够确保每个样本都得到均匀且准确的荧光信号检测。实际操作中的注意事项：在进行荧光检测性能试验时，操作人员需要严格按照标准中的孔位排布要求进行布局，避免随意更改孔位排布方式。同时，还需要注意保持试验环境的清洁和稳定，以减少外界因素对检测结果的影响。需要注意的是，以上内容仅是对GB/T42753-2023标准中荧光检测性能试验孔位排布方面的简要解读，具体要求和操作方法还需参考标准中的详细规定。此外，对于不同型号和规格的实时荧光定量PCR仪，其孔位排布方式也可能会有所不同，因此在实际操作中需要结合具体情况进行灵活调整。A.3荧光检测性能试验的孔位排布23A.4整机性能试验的孔位排布试验孔位选择均匀分布原则孔位的选择应遵循均匀分布的原则，覆盖仪器的不同区域，从而反映仪器整体性能。代表性孔位在整机性能试验中，应选择具有代表性的孔位进行测试，以确保评价结果的全面性和准确性。根据仪器型号和规格，确定合理的孔位数量和分布方式，确保每个孔位都能得到有效测试。数量与分布对每个选定的孔位进行明确标识和记录，便于试验过程中的数据追踪和分析。标识与记录孔位排布要求在试验开始前，应对选定孔位进行一致性检查，确保各孔位之间的初始状态相同或相近。一致性检查在试验过程中，详细记录每个孔位的数据，并进行统计分析，以评估整机性能的均匀性和稳定性。数据记录与分析试验过程中的注意事项24附录B(资料性)荧光参比溶液的制备方法荧光参比溶液在实时荧光定量PCR仪的性能评价中起着关键作用。它提供了一个已知的荧光信号标准，用于校准和验证仪器的荧光检测系统。通过对比荧光参比溶液的信号输出，可以确保仪器在不同实验条件下的一致性和准确性。荧光参比溶液的作用制备荧光参比溶液应遵循精确、可重复和稳定的原则。这意味着所使用的荧光物质应具有明确的荧光特性，且在溶液中的浓度应精确控制。此外，溶液的保存条件也应经过优化，以确保其荧光信号的长期稳定性。制备方法的原则附录B(资料性)荧光参比溶液的制备方法注意事项：在制备荧光参比溶液时，需要注意避免污染和荧光猝灭等问题。污染可能会影响溶液的荧光特性，而荧光猝灭则可能导致信号强度的降低。因此，应在洁净的环境中进行操作，并使用高质量的试剂和容器。同时，还应定期对荧光参比溶液进行更新和重新校准，以确保其持续的有效性。综上所述，荧光参比溶液的制备是实时荧光定量PCR仪性能评价中的重要环节。通过遵循精确的制备原则和注意相关事项，可以确保所制备的荧光参比溶液具有高度的可靠性和稳定性，从而为仪器的准确校准和验证提供有力支持。附录B(资料性)荧光参比溶液的制备方法25附录C(资料性)两组数据显著差异的判断方法在《实时荧光定量PCR仪性能评价通则GB/T42753-2023》中，附录C提供了判断两组数据是否存在显著差异的方法。这些方法对于评价PCR仪的性能至关重要，因为它们允许研究人员准确地确定不同条件下仪器性能的变异程度。以下是关于这些方法的详细解读附录C(资料性)两组数据显著差异的判断方法1.数据正态性检验在进行显著差异判断之前，首先需要对两组数据进行正态性检验。这是为了确保数据符合正态分布，从而可以采用相应的统计方法进行分析。附录C(资料性)两组数据显著差异的判断方法如果数据不符合正态分布，则可以考虑使用非参数统计方法，如Mann-WhitneyU检验（也称为Wilcoxon秩和检验），来比较两组数据的分布是否存在显著差异。2.t检验或U检验如果数据符合正态分布，通常可以采用t检验来判断两组数据的均值是否存在显著差异。附录C(资料性)两组数据显著差异的判断方法0102033.确定显著性水平在进行差异显著性检验时，需要设定一个显著性水平（通常为0.05或0.01），用于判断观察到的差异是否可能由随机误差引起。附录C(资料性)两组数据显著差异的判断方法如果计算出的p值小于设定的显著性水平，则可以拒绝原假设（即两组数据无显著差异），认为两组数据存在显著差异。附录C(资料性)两组数据显著差异的判断方法4.效应量计算除了统计显著性外，还可以计算效应量来量化两组数据之间的差异程度。例如，可以使用Cohen'sd或η²等指标来衡量差异的幅度。5.结果解释与报告根据统计分析和效应量的结果，可以对两组数据的差异进行解释和报告。这有助于理解PCR仪在不同条件下的性能变化，并为仪器优化或选择提供依据。通过遵循这些步骤和方法，研究人员可以更加科学、准确地评价实时荧光定量PCR仪的性能，并推动相关技术的持续改进和发展。附录C(资料性)两组数据显著差异的判断方法26C.1两组数据显著差异的判断方法保证样本量为确保结果的可靠性，应保证足够的样本量，以减少抽样误差对结果的影响。遵循统计学原理显著差异的判断应基于统计学原理，通过合理的统计分析方法来确定两组数据间是否存在显著差异。明确检验目的在进行显著差异判断前，应明确检验的目的和假设，以便选择合适的统计方法。判断原则T检验适用于两组数据均服从正态分布且方差相等的情况，通过计算T值来判断两组数据的均值是否存在显著差异。01常用判断方法非参数检验当数据不满足正态分布或方差不等时，可采用非参数检验方法，如Mann-WhitneyU检验等，来判断两组数据的分布是否存在显著差异。02方法选择应根据数据的实际情况选择合适的判断方法，以确保结果的准确性和可靠性。结果解释在得出显著差异的结论后，应对结果进行合理解释，并结合实际背景进行分析和讨论。数据清洗在进行显著差异判断前，应对数据进行清洗和处理，以消除异常值、缺失值等对结果的影响。注意事项27C.2F分布分位数表010203F分布是两个卡方分布变量的比率分布，常用于方差分析、回归分析等统计推断中。F分布具有非对称性，其形状取决于分子和分母的自由度。F分布的分位数表是统计推断中重要的参考工具，可用于确定临界值