TZNZ 234-2023 水产养殖环境中五氯酚残留量的测定 液相色谱串联质谱法

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T/ZNZT/ZNZ234—2023水产养殖环境中五氯酚残留量的测定液相色谱串联质谱法Determinationofpentachlorophenolinaquacultureenvironmentsamplesbyliquidchromatography-tandemmassspectrometricmethod2023-12-22发布 2024-01-22实施浙江省农产品质量安全学会 发布T/ZNZ234T/ZNZ234—2023II前  言本文件按照GB/T1.1—20201草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。本文件起草单位：浙江省水产技术推广总站（浙江省渔业检验检测与疫病防控中心）。本文件主要起草人：周钦、李诗言、王扬、何辉、柯庆青、王鼎南、丁雪燕、陆炜、牟哲松。T/ZNZ234T/ZNZ234—2023PAGEPAGE1水产养殖环境中五氯酚残留量测定液相色谱串联质谱法范围本文件规定了水产养殖环境中五氯酚残留量的液相色谱串联质谱测定方法。本文件适用于水体和底泥等水产养殖环境中的五氯酚残留的测定。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T9102.1渔业生态环境监测规范第1部分：总则SC/T9102.2渔业生态环境监测规范第2部分：海洋SC/T9102.3渔业生态环境监测规范第3部分：淡水术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。原理试剂和材料乙腈（CH3CN）：色谱纯。正己烷（C6H14）：色谱纯。甲醇（CH3OH）：色谱纯（B）。甲酸铵（CH5NO2）：色谱纯。5.5 硫酸（H2SO4）：ρ1.83g/mL。5.6 五氯酚标准物质（CAS87-86-5）。纯度≥96%5.7 13C6-五氯酚（CAS85380-74-1）：纯度≥96%。80%乙腈溶液：乙腈（5.1）8：2混合。10%硫酸溶液：硫酸（5.3）1：9混合。5mmol/LA0.315g1000mL容量瓶，混合均匀，现配现用。（（相当于五氯酚1100mL6个月。（以五氯酚计，100ng/mL）1mL（5.10），置100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，混匀，将溶液转移至棕色玻璃储存瓶中，-18℃下避光保存，3个月。（13C6-10mg13C6-100mL1mg/mL五氯酚内标溶液，-18℃3个月。固相萃取小柱：EMR-Lipid小柱（3cc，300mg），或者使用性能相当固相萃取柱。亲水性聚四氟乙烯滤膜：0.22μm。注：除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯；实验用水应符合GB/T6682中规定的一级水。仪器和设备液相色谱串联质谱仪：配有电子喷雾离子源。0.01g0.1mg。5000r/min。旋转蒸发仪。3000r/min。固相萃取装置。微量移液器。采泥器。冷冻干燥机：冷冻温度≤-50°C，真空度＜20Pa。鸡心瓶：50mL。样品采集、制备及保存按照SC/T9102.1、SC/T9102.2和SC/T9102.3规定的方法采集样品，棕色玻璃瓶储存水样，样品无需过膜，将500mL采样瓶完全注满，避光室温保存，7天内分析完成。底泥先在-20°C预冷冻24h，经冷冻干燥机（-50°C，真空度＜20Pa，冷冻干燥10h）冷冻干燥后，剔除石块和植物体，用研钵研磨后过100目筛网，常温避光干燥保存，1个月内完成分析。测定步骤样品萃取及净化水样处理50mL100mL（5.13）200μL1mL10%（5.2）205min，5000r/min5min底泥处理5.00g0.01g，加入五氯酚内标溶液（5.13）100μL10mL硫酸溶液（5.9）20mL正己烷（5.2）5min，5000r/min5min20mL正己烷重复提取一次，移取全部上清液到玻璃鸡心瓶中，待净化。净化40°C2mL（5.8）EMR-Lipid0.22μm亲水性聚四氟乙烯滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱仪测定。仪器参考条件液相色谱参考条件液相色谱参数设置应满足以下条件：C1，2.6μm，2.1mm×50mm内径流动相：5mmol/L甲酸铵溶液(5.10)，甲醇(5.3)，梯度洗脱条件见表1；柱温：40°C；进样量：2μL；1液相色谱的梯度洗脱条件时间（min）5mmol/L甲酸铵溶液甲醇（%）0.0075.025.00.5075.025.04.000.0100.05.500.0100.05.6075.025.08.0075.025.0质谱参考条件质谱参考条件：离子源：电喷雾离子源；扫描模式：电喷雾电离负离子模式（ESI-）；c）监测方式：多重反应监测（MRM）；d）电喷雾电压（IS）：4500V；e）离子源温度（TEM）：550℃；f）气帘气压力（CUR）：35psi；g）雾化气压力（GS1）：40psi；h）辅助气压力（GS2）：50psi；i）碰撞气流速（CAD）：Medium。j）质谱参数见表2。表2五氯酚及13C6-五氯酚的定性离子、定量离子、去簇电压及碰撞能量目标物母离子（m/z）子离子（m/z）去簇电压（V）碰撞能量（V）五氯酚264.735.0a-55-48262.735.0-55-4813C6-五氯酚272.735.0a-55-48a为定量离子。标准曲线的制备精密量取标准工作液（5.12）和内标工作液（5.13）适量，经氮气吹干后，用80乙腈水溶液配制成五氯酚浓度为0.1ng/mL0.5ng/mL2ng/mL5ng/mL10ng/mL20ng/mL50ng/mL100ng/mL系列标准工作液（13C6-五氯酚内标浓度为50ng/mL）。分别以五氯酚浓度为横坐标（x），五氯酚的峰面积和内标13C6-五氯酚峰面积比值为纵坐标（y）绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。0.1ng/mL~100议为0.5ng/mL~50ng/mL。测定定性测定在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与基质标准溶液的保留时间的偏差在±2.5%之内，且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分率相对离子丰度＞5020~50（含）10~20（含）≤10允许的最大偏差±20±25±30±50定量测定13C6-空白实验除不加试样外，均按测定条件和步骤执行。结果计算和表述水体样品结果计算按式（1）计算水体样品中五氯酚残留量。�=(�1−�0)×�1×10001 �2式中：X1—水体样品中五氯酚残留量，单位为纳克每升（ng/L）；c0—试剂空白结果，单位为纳克每毫升（ng/mL）；c1—从标准曲线上得到的样液中五氯酚的含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V1—样品的最终定容体积，单位为毫升（mL）；V2—水体样品的取样体积，单位为毫升（mL）。底泥样品结果计算按式（2）计算底泥样品中五氯酚残留量。2�=(�2−�0)×�3×2�×1000

（2）式中：X2—底泥样品中五氯酚残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；c0—试剂空白结果，单位为纳克每毫升（ng/mL）；c2—从标准曲线上得到的样液中五氯酚的含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V3—样品的最终定容体积，单位为毫升（mL）；m—底泥样品取样质量，单位为克（g）。结果表述测定结果保留小数点后一位。检测方法灵敏度、精密度、准确度检出限和定量限本方法水体样品中五氯酚的检出限为0.31.00.3μg/kg，定量限为1.0μg/kg。准确度本方法在水体样品中五氯酚加标浓度为1ng/L~500ng/L时，回收率为70.0%~120%；底泥样品中五氯酚加标浓度为1μg/kg~10μg/kg时，回收率为7